Գենետիկական փոխակերպումը բույսերի բջիջներում ուլտրաձայնային օգնությամբ

Sonication-Assisted Agrobacterium Mediated Transformation (SAAT) արդյունավետ մեթոդ է բույսերի բջիջները վարակելու օտար գեներով՝ օգտագործելով Agrobacterium-ը որպես փոխադրող: Ուլտրաձայնային կավիտացիան առաջացնում է սոնոպորացիա, որը կարելի է բնութագրել որպես բույսերի հյուսվածքի նպատակային միկրո վերք: Այս ուլտրաձայնային միկրովերքերի միջոցով ԴՆԹ-ի և ԴՆԹ-ի վեկտորները կարող են արդյունավետ կերպով տեղափոխվել բջջային մատրիցա:

sonoporation – Ուլտրաձայնային ուժեղացված բջիջների փոխակերպում

Ultrasonicator UP100H-ը լաբորատոր հոմոգենիզատոր է, որը հաճախ օգտագործվում է բջիջների կուլտուրայի թիթեղների նմուշների պատրաստման համար:Երբ ցածր հաճախականության ուլտրաձայնը (մոտ 20 կՀց) կիրառվում է բջիջների կախոցների վրա, ակուստիկ կավիտացիայի հետևանքները առաջացնում են բջիջների հյուսվածքների վրա մեմբրանի անցողիկ թափանցելիություն: Այս ուլտրաձայնային ազդեցությունը հայտնի է որպես սոնոպորացիա և օգտագործվում է բջիջների կամ հյուսվածքների մեջ գեների փոխանցման համար:
Ultrasonication-ի առավելությունները հիմնված են դրա ոչ ջերմային մեխանիկական աշխատանքի սկզբունքի վրա, որը ստիպում է sonication-ը հաճախ ավելի բազմակողմանի լինել և ավելի քիչ կախված լինել բջիջների տեսակներից: Սոնոպորացիայի բազմակողմանի կիրառումը հնարավորություն է բացում տրանսգենային բույսերի օգտագործման համար, որոնք զգալի ներուժ ունեն մարդկային բարդ թերապևտիկ սպիտակուցների կենսաարտադրության մեջ: Բույսերի վրա հիմնված նման կենսառեակտորները կարող են հեշտ գենետիկորեն մանիպուլյացիայի ենթարկվել, կանխել պոտենցիալ աղտոտումը մարդու պաթոգեններով, չեն վնասում վերափոխման միջնորդ բակտերիաներին (օրինակ՝ Ագրոբակտերիում) և հանդիսանում են կենսասինթեզի էժան, արդյունավետ մեթոդ:

Տեղեկատվության պահանջ





Տեսանյութում ցուցադրվում է ուլտրաձայնային նմուշի պատրաստման UIP400MTP համակարգը, որը թույլ է տալիս հուսալի նմուշի պատրաստում ցանկացած ստանդարտ բազմաբնակարանային թիթեղներից՝ օգտագործելով բարձր ինտենսիվության ուլտրաձայնային հետազոտություն: UIP400MTP-ի բնորոշ կիրառությունները ներառում են բջիջների լիզը, ԴՆԹ, ՌՆԹ և քրոմատինի կտրումը, ինչպես նաև սպիտակուցի արդյունահանումը:

Ultrasonicator UIP400MTP բազմահորս ափսեի ձայնայնացման համար

Ուլտրաձայնային օգնությամբ բջիջների փոխակերպում

Զոնդի տիպի ուլտրաձայնային սարքերը, ինչպիսին է UP200St-ը, հյուսվածքների հուսալի համասեռացուցիչներ են և լայնորեն օգտագործվում են գենետիկայի մեջ նմուշների պատրաստման համար, օրինակ՝ ագրոբակտերիումի միջնորդավորված տրանսֆորմացիայի (SAAT) ձայնագրման օգնությամբ:Sonication-ը տեխնիկա է, որը կիրառում է ցածր հաճախականության ուլտրաձայնային ալիքներ՝ լուծույթում մասնիկները խառնելու, լուծույթները խառնելու համար՝ դրանով իսկ մեծացնելով զանգվածի փոխանցման և տարրալուծման արագությունը: Միաժամանակ, sonication-ը կարող է հեռացնել լուծված գազերը հեղուկներից: Բույսերի փոխակերպման ժամանակ ձայնային ախտահանումը կառաջացնի միկրովերքերի ձևավորում բույսերի հյուսվածքի վրա և կուժեղացնի մերկ ԴՆԹ-ի առաքումը բույսի պրոտոպլաստ:

Գենետիկ փոխակերպման համար Sonication-Assisted Agrobacterium-ի միջնորդավորված տրանսֆորմացիան (SAAT) նախընտրելի մեթոդ է և ունի զգալիորեն ավելի բարձր արդյունավետություն, քան մերկ ԴՆԹ-ի և ԴՆԹ-ի վեկտորները ուղղակիորեն պրոտոպլաստ տեղափոխելու համար օգտագործվող հնչյունավորումը: Բազմաթիվ ուսումնասիրություններ ցույց են տվել, որ Agrobacterium-ի միջնորդավորված տրանսֆորմացիան (SAAT) կարող է օգտագործվել ուլտրաձայնային ալիքների միջոցով բույսերի բջիջների վրա մեխանիկական խանգարումների և վերքերի ձևավորման համար և արդյունքում առաջացած ակուստիկ կավիտացիայի միջոցով: Կարճ ուլտրաձայնային բուժումը միկրովերքեր է ստեղծում արտամղակների մակերեսին: Քանի որ վիրավոր բջիջները թույլ կտան Agrobacterium-ին ներթափանցել բույսերի հյուսվածքների խորը հատված՝ դրանով իսկ մեծացնելով բույսերի բջիջների վարակվելու հավանականությունը։ Բացի այդ, արտազատվող ֆենոլային միացությունները ուժեղացնում են փոխակերպումը: Ուլտրաձայնային եղանակով առաջացած միկրովերքերը նաև ավելի իրական են դարձնում մանրէների ներթափանցումը: SAAT-ը հաջողությամբ կիրառվել է գենետիկական փոխակերպման համար բույսերի տեսակների մեջ, որոնք, մասնավորապես, համարվում են կայուն Agrobacterium-ի նկատմամբ:
Լինելով շատ պարզ և էժան մեթոդ, ինչպես նաև Agrobacterium միջնորդավորված գեների փոխանցման զգալի բարելավումը SAAT-ի հիմնական առավելություններն են: Բացի SAAT-ի հաջող կիրառումից Chenopodium rubrum L.-ի և Beta vulgaris L.-ի փոխակերպման մեջ, այս մոտեցումը կիրառվել է նաև ռեկոմբինանտ Escherichia coli վայրի տիպի ջերմակայուն հոլոտոքսինի և Escherichia coli մուտանտ LT պատվաստանյութի ադյուվանտների արտադրության մեջ Nicotiana tabacum-ում: , որի դեպքում LT-B-ին բնորոշ ամենաբարձր IgG տիտրերը հայտնաբերվել են թռչունների մոտ:
(տես Laere et al., 2016; M. Klimek-Chodacka and R. Baranski, 2014):

VialTweeter-ը կարող է օգտագործվել պլանային բջիջների ԴՆԹ-ի վարակման համար, օրինակ՝ օգտագործելով Agrobacterium-ի միջնորդավորված փոխակերպումը (SAAT) ձայնային թերապիայի միջոցով:

VialTweeter- ը բազմակի նմուշառող խողովակների միաժամանակյա ձայնագրման համար, օրինակ՝ ագրոբակտերիումի միջնորդավորված փոխակերպման (SAAT) միջոցով ձայնային ախտահանման միջոցով:

Ագրոբակտերիումի միջոցով միջնորդավորված փոխակերպման (SAAT) գիտականորեն ապացուցված առավելությունները

Ագրոբակտերիումի միջնորդավորված փոխակերպումը (SAAT) կիրառվել է բազմաթիվ բույսերի տեսակների վրա: Բուսական բջիջների կուլտուրաների կարճ և համեմատաբար մեղմ ուլտրաձայնային բուժումը առաջացնում է սոնոպորացիա, որը հետագայում թույլ է տալիս խորը ներթափանցել Ագրոբակտերիումը՝ որպես գենի փոխադրող: Ստորև կարող եք կարդալ օրինակելի ուսումնասիրություններ, որոնք ցույց են տալիս SAAT-ի օգտակար ազդեցությունը:

Աշվագանդայի ուլտրաձայնային օգնությամբ փոխակերպումը

W. somnifera-ում (հայտնի է որպես ashwagandha կամ ձմեռային բալ) տրանսֆորմացիայի արդյունավետությունը բարելավելու համար Դեհդաշտին և գործընկերները (2016) ուսումնասիրել են ացետոսիրինգոնի (AS) և sonication-ի օգտագործումը:
Acetosyringone (AS) ավելացվել է երեք փուլով. Agrobacterium հեղուկ կուլտուրա, Agrobacterium ինֆեկցիա և արտամղիչների համատեղ մշակում Agrobacterium-ի հետ: Պարզվել է, որ 75 μM AS-ի ավելացումը Agrobacterium հեղուկ մշակույթին օպտիմալ է vir գեների ինդուկցիայի համար:
Sonication-ի (SAAT) լրացուցիչ կիրառումը հանգեցրեց գենի ամենաբարձր արտահայտմանը: Պարզվել է, որ մազոտ արմատներում gusA գենի արտահայտությունը լավագույնն է, երբ տերևները և բողբոջների ծայրերը համապատասխանաբար 10 և 20 վայրկյան են հնչեցրել: Բարելավված արձանագրության փոխակերպման արդյունավետությունը տերևների և ընձյուղների ծայրամասերի դեպքում գրանցվել է համապատասխանաբար 66,5 և 59,5%: Երբ համեմատվում է այլ արձանագրությունների հետ, այս բարելավված արձանագրության փոխակերպման արդյունավետությունը պարզվել է, որ 2,5 անգամ ավելի բարձր է տերևների համար և 3,7 անգամ ավելի բարձր ընձյուղների համար: Southern blot-ի անալիզները հաստատել են gusA տրանսգենի 1-2 օրինակ W1-W4 տողերում, մինչդեռ 1-4 տրանսգենային պատճեններ հայտնաբերվել են բարելավված արձանագրության միջոցով ստեղծված W5 տողում:

Sonication-ի տեւողությունը (ուլտրաձայնի ազդեցության ժամանակը) ազդում է Sonication-ի օգնությամբ Agrobacterium-ով միջնորդավորված փոխակերպման (SAAT) վրա W. somnifera-ում փոխակերպման վրա:

Ագրոբակտերիումի միջնորդավորված տրանսֆորմացիայի (SAAT) տևողության ազդեցությունը W. somnifera տերևի (ա) և ընձյուղի ծայրի (բ) արտանետումների փոխակերպման հաճախականության վրա
(ուսումնական և գրաֆիկական՝ © Dehdashti et al., 2016)

Տեղեկատվության պահանջ





Բամբակի ուլտրաձայնային օգնությամբ փոխակերպում

Հուսեյնը և այլք: (2007 թ.) ցույց են տալիս բամբակի վերափոխման ազդեցությամբ օժտված ձայնային ազդեցությամբ: Ցածր հաճախականության ուլտրաձայնի հետևանքով առաջացած ակուստիկ կավիտացիան ստեղծում է միկրովերքեր բույսերի հյուսվածքի մակերևույթի վրա և ներքևում (սոնոպորացիա) և թույլ է տալիս Agrobacterium-ին ավելի խորը և ամբողջությամբ շրջել բույսերի հյուսվածքով: Այս վիրավորական ձևը մեծացնում է հյուսվածքների մեջ ավելի խորը ընկած բույսերի բջիջները վարակելու հավանականությունը: SAAT-ի փոխակերպման արդյունավետությունը գնահատելու համար չափվել է GUS գենի էքսպրեսիան: GUS-ի թղթակցի համակարգը ռեպորտաժային գենային համակարգ է, որը հատկապես օգտակար է բույսերի մոլեկուլային կենսաբանության և մանրէաբանության մեջ: Կարգավորելով SAAT-ի տարբեր պարամետրերը, GUS-ի անցողիկ արտահայտությունը բամբակի մեջ, օգտագործելով հասուն սաղմերը որպես արտամղիչ, զգալիորեն բարելավվեց: GUS-ն առաջին անգամ հայտնաբերվեց արտանետումների ինկուբացիայից 24 ժամ հետո, իսկ 48 ժամվա ընթացքում GUS-ի արտահայտությունը շատ ինտենսիվ էր, ինչը ծառայեց որպես բամբակի արտանետումների հաջող փոխակերպման օգտակար ցուցիչ՝ Agrobacterium-ի միջնորդավորված տրանսֆորմացիան (SAAT) հետևանքով: Տարբեր փոխակերպման տեխնիկայի (այսինքն՝ կենսաբանական, Ագրո, BAAT, SAAT) համեմատությունը, ագրոբակտերիումի միջնորդավորված տրանսֆորմացիան (SAAT) ազդեցությամբ, ցույց տվեց փոխակերպման ամենալավ արդյունքները:

Ագրոբակտերիումի միջնորդավորված տրանսֆորմացիան (SAAT) ազդեցությամբ օժտված ագրոբակտերիայով (SAAT) ցույց է տալիս զգալիորեն ավելի բարձր անցողիկ արտահայտություն, երբ համեմատվում է վարակի այլընտրանքային մեթոդների հետ:

Փոխակերպման ընթացակարգի ընտրություն GUS-ի անցողիկ արտահայտման հիման վրա: Sonication-ի օգնությամբ Agrobacterium-ի միջնորդավորված փոխակերպումը (SAAT) ցույց է տալիս զգալիորեն ավելի բարձր անցողիկ արտահայտություն:
(ուսումնական և գրաֆիկական. © Hussain et al., 2007)

Բարձր արդյունավետության ուլտրաձայնային լուծումներ Sonoporation-ի և SAAT-ի համար

Hielscher Ultrasonics-ը երկարամյա փորձ ունի լաբորատորիաների, հետազոտական օբյեկտների, ինչպես նաև շատ բարձր թողունակությամբ արդյունաբերական արտադրության բարձր արդյունավետության ուլտրաձայնային սարքերի մշակման և արտադրության մեջ: Մանրէաբանության և կենսաբանության համար Hielscher-ն առաջարկում է տարբեր լուծումներ՝ բավարարելու որոշակի հյուսվածքների և դրանց բուժման համար անհրաժեշտ տարբեր պահանջներ: Բազմաթիվ նմուշների միաժամանակյա ուլտրաձայնային ախտորոշման համար Hielscher-ն առաջարկում է UIP400MTP՝ բազմաբնույթ ափսեների համար, VialTweeter՝ մինչև 10 սրվակների (օրինակ՝ Էպենդորֆյան խողովակներ) կամ ուլտրաձայնային CupHorn-ի համար: Զոնդի տիպի ուլտրաձայնային սարքերը հասանելի են 50-ից մինչև 400 վտ հզորությամբ որպես լաբորատոր հոմոգենիզատորներ, մինչդեռ արդյունաբերական համակարգերը ընդգրկում են հզորության միջակայքը 500 Վտ-ից մինչև 16 կՎտ:
Խնդրում ենք կապ հաստատել մեզ հետ և տեղեկացնել մեզ ձեր դիմումի և գործընթացի պահանջների մասին: Մեր փորձառու անձնակազմը սիրով կառաջարկի ձեր կենսաբանական գործընթացի համար ամենահարմար ուլտրաձայնային սարքը:
Ստորեւ ներկայացված աղյուսակը ձեզ ցույց է տալիս մեր ultrasonicators- ի մոտավոր մշակման հզորությունը:

խմբաքանակի Volume Ծախսի Rate Առաջարկվող սարքեր
բազմաբնակարան / միկրոտիտրային թիթեղներ na UIP400MTP
մինչև 10 սրվակ na VialTweeter- ը
մինչև 5 սրվակ/խողովակ կամ 1 ավելի մեծ անոթ na Cuphorn
1-ից 500 մլ 10-ից մինչեւ 200 մլ / վրկ UP100H
10-ից մինչեւ 2000 մլ 20-ից 400 մլ / վրկ Uf200 ः տ,, UP400St
01-ից մինչեւ 20 լ 02-ից 4 լ / րոպե UIP2000hdT
10-ից 100 լ 2-ից 10 լ / րոպե UIP4000hdT
na 10-ից 100 լ / րոպե UIP16000
na ավելի մեծ Կլաստերի UIP16000

Կապ մեզ հետ | / Հարցրեք մեզ!

Հարցրեք ավելին

Խնդրում ենք լրացնել ստորև բերված ձևը մեր ուլտրաձայնային սարքերի, դրանց դիմումների և գնի մասին լրացուցիչ տեղեկություններ ստանալու համար: Մենք ուրախ կլինենք քննարկել ձեր գործընթացը ձեզ հետ և առաջարկել ձեզ ուլտրաձայնային համակարգ, որը բավարարում է ձեր պահանջները:









Խնդրում ենք նկատի ունենալ մեր Գաղտնիության քաղաքականություն,



Ուլտրաձայնային բարձր կտրվածքային հոմոգենիզատորները օգտագործվում են լաբորատոր, նստարանային, փորձնական և արդյունաբերական մշակման մեջ:

Hielscher Ultrasonics- ը արտադրում է բարձրորակ ուլտրաձայնային համասեռացուցիչներ `լաբորատոր, պիլոտային և արդյունաբերական մասշտաբով ծրագրերը խառնելու, ցրելու, էմուլգացման և արդյունահանման համար:



Գրականություն / Հղումներ


Բարձր արդյունավետության ուլտրաձայնային! Hielscher-ի արտադրանքի տեսականին ընդգրկում է ամբողջ սպեկտրը՝ կոմպակտ լաբորատոր ուլտրաձայնային սարքից մինչև նստարանային վերին ագրեգատներից մինչև ամբողջական արդյունաբերական ուլտրաձայնային համակարգեր:

Hielscher Ultrasonics- ը արտադրում է բարձրորակ ուլտրաձայնային հոմոգենացնողներից ` Լաբորատորիա դեպի արդյունաբերական չափը