תפוקת פקטין גבוהה יותר עם מיצוי קולי
מיצוי אולטראסוני מביא לתפוקה גבוהה של פקטינים באיכות מעולה. באמצעות סוניקציה, ניתן לייצר פקטין יקר ערך ביעילות מפסולת פירות (למשל, תוצרי לוואי מעיבוד מיצים) ומחומר גלם ביולוגי אחר. מיצוי פקטין אולטראסוני מצטיין בטכניקות מיצוי אחרות על ידי הפקת תפוקות גבוהות יותר, מתן איכות פקטין מעולה והליך מיצוי מהיר.
מיצוי פקטין מוגבר על ידי סוניקציה
פקטין משמש כחומר ג'לינג, מתחלב ומעבה במוצרי מזון רבים, כמו גם כמרכיב בקוסמטיקה ותרופות. מיצוי פקטין תעשייתי קונבנציונלי נעשה באמצעות מיצוי מים חמים, כאשר חומר הגלם כגון קליפות הדרים, פומס תפוחים ופסולת פירות אחרת מושרה במים חמים של 60-100 מעלות צלזיוס ב- pH נמוך (כ- pH 1.5 – 3.5) למשך תקופה ארוכה. זה הופך את שאיבת המים החמים הקונבנציונלית לתהליך גוזל זמן ואנרגיה, שלעתים קרובות אפילו אינו יעיל מספיק כדי לשחרר את מלוא כמות הפקטינים הזמינים בחומר הגלם.
על מנת להתגבר על חוסר היעילות של שיטת הייצור הקונבנציונלית, מיצוי קולי מיושם כטכניקה להגברת התהליך המפחיתה את זמן המיצוי וממקסמת את תפוקת הפקטין באופן משמעותי בהשוואה למיצוי המים החמים המסורתי.
היתרון של מיצוי פקטין קולי
מיצוי אולטראסוני מיושם בתחומים רבים של ייצור תמציות, למשל תמציות בוטניות וצמחיות עבור מזונות, תוספי מזון, תרופות וקוסמטיקה. דוגמה בולטת מאוד למיצוי אולטראסוני היא מיצוי קנבידיול (CBD) ותרכובות נוספות מצמח הקנאביס.
מיצוי קולי הוא טכניקת מיצוי לא תרמית, המונעת בכך את החומרים הביו-אקטיביים נגד השפלה תרמית. כל הפרמטרים תהליך קולי, כגון משרעת, עוצמה, זמן, טמפרטורה ולחץ, ניתן לשלוט במדויק. זה מאפשר תהליך מדויק ובקרת איכות ומקל על חזרה ושחזור לאחר קבלת תוצאות החילוץ. Extract יצרנים ערך ultrasonication עבור חזרתיות תהליך אמין, אשר מסייע סטנדרטיזציה תהליכים ומוצרים.
- עוצמת סוניקציה
- טמפרטורה
- ערך pH
- זמן
- גודל חלקיקים של חומר גלם

המחלץ הקולי UIP4000hdT הוא מחלץ חזק 4kW לייצור פקטין תעשייתי.
מצא את הפרוטוקול למיצוי פקטין קולי מקליפת אשכולית שהודגם בסרטון למעלה כאן!
קביעת פרמטרי התהליך הרלוונטיים מאפשרת לייעל את תהליך המיצוי האולטרסוני ליעילות הגבוהה ביותר ואיכות תמצית מעולה.
לדוגמה, גודל החלקיקים של חומר הגלם (למשל, קליפות הדרים) הוא גורם חשוב: גודל חלקיקים קטן יותר פירושו שטח פנים גבוה יותר עבור הגלים העל-קוליים לפעול. גודל חלקיק קטן גורם בכך לתפוקת פקטין גבוהה יותר, רמה נמוכה יותר של מתילציה ויחס גדול יותר של אזורי רמנוגלקטורונן.
ערך ה- pH של ממס המיצוי (כלומר מים + חומצה) הוא פרמטר חיוני נוסף. כאשר פקטין מופק בתנאים חומציים, אזורים מסועפים רבים של הפולימר נרקבים, כך שבעיקר אזורים "ישרים" הומוגלקטורוניים עם כמה מולקולות סוכר ניטרליות המחוברות על או בשרשרת הליניארית הראשית נותרות.
מיצוי פקטין אולטראסוני מקצר את זמן המיצוי ומוריד את טמפרטורת התהליך הנדרשת, מה שמקטין את הסיכוי לשינוי פקטין לא רצוי על ידי חומצות. זה מאפשר להשתמש בחומצות בתנאים מוגבלים על מנת לשנות פקטין בדיוק לדרישות המוצר.
מה הופך מיצוי פקטין קולי לכל כך יעיל?
ההשפעה של מיצוי קולי משפיע ישירות על נפיחות, ניקוב ושבירה של קירות התא. העברת מסה המושרה באולטרסאונד גורמת להידרציה של חומר פקטוני בלמלה האמצעית, מה שמוביל לפירוק רקמות צמחיות. כוחות קוויטציה וגזירה על-קוליים פוגעים ישירות בדפנות התא ושוברים אותן. מנגנונים אלה מביאים לתוצאות יעילות ביותר של מיצוי קולי.
פקטין שחולץ באופן אולטרסאונד (גם פקטין אקוסטי בסיוע מיצוי, קיצור ACAE) שהיה בעל משקל מולקולרי נמוך יותר ודרגת מתוקסילציה נמוכים יותר, היה עשיר יותר באזור rhamnogalacturonan-I עם שרשראות צד ארוכות בהשוואה לפקטין המופק בחום קונבנציונלי מאנליזה כימית ו- FT-IR. צריכת האנרגיה עבור מיצוי פקטין ulgtrasonic היה נמוך באופן משמעותי מאשר שיטת חימום קונבנציונאלי, אשר מציין את היישום המבטיח שלה בקנה מידה הייצור התעשייתי.
(ראה: וואנג ואחרים, 2017)
וואנג ועמיתיו (2017) גם מדגישים כי מיצוי בסיוע אולטרה-סאונד הוכח כתהליך חסכוני וידידותי יותר לסביבה עם יעילות גבוהה יותר ועלות נמוכה יותר בהשוואה למיצוי חימום קונבנציונלי.

SEM של עיסת סלק סוכר שיורית בהגדלה של 1000x: (א) לפני מיצוי, ולאחר מיצוי פקטין באמצעות (ב) קסילנאסאה (250 U/g), (ג) צלולאז (300 U/g), (ד) Xylanasae+צלולאז (1:1), ו-(e) Xylanasae+צלולאז (1:1.5), ו-(f) Xylanasae+צלולאז (1:2).
(מחקר ותמונות: Abou-Elseoud et al., 2021)
כיצד פועל מיצוי פקטין קולי?
מיצוי קולי מבוסס על ההשפעות הסונומכניות של אולטרסאונד בעוצמה גבוהה. כדי לקדם ולהגביר את מיצוי הפקטין באמצעות אולטרסוניקציה, גלי אולטרסאונד בעוצמה גבוהה מצומדים באמצעות בדיקה על-קולית (המכונה גם קרן על-קולית או סונוטרודה) לתוך התווך הנוזלי, כלומר הבוצה המורכבת מחומר הגלם המכיל פקטין והממס. גלי האולטרסאונד עוברים דרך הנוזל ויוצרים לסירוגין מחזורי לחץ נמוך / לחץ גבוה. במהלך מחזורי לחץ נמוך, נוצרות בועות ואקום זעירות (הנקראות בועות קוויטציה), אשר גדלות על פני מספר מחזורי לחץ. במהלך מחזורים אלה של צמיחת הבועה, הגזים המומסים בנוזל נכנסים לבועת הוואקום, כך שבועת הריק הופכת לבועות גז גדלות. בגודל מסוים, כאשר הבועות אינן יכולות לספוג יותר אנרגיה, הן מתפוצצות באלימות במהלך מחזור לחץ גבוה. קריסת הבועה מאופיינת בכוחות קוויטציוניים עזים, כולל טמפרטורה ולחץ גבוהים מאוד המגיעים עד 4000K ו 1000ATM, בהתאמה; כמו גם הפרשי טמפרטורה ולחץ גבוהים בהתאמה. מערבולות אולטרה-סאונד וכוחות גזירה אלה מפרקים את תאי הצמח ומשחררים את הפקטינים התוך-תאיים לתוך הממס מבוסס המים. מכיוון שקוויטציה על-קולית יוצרת העברת מסה אינטנסיבית ביותר, סוניקציה מביאה לתפוקות גבוהות במיוחד בזמן עיבוד קצר מאוד.

חילוץ אצווה קולי UIP2000hdT עם קרן קסקטרוד
פקטין המופק מפסולת פירות
פסולת פירות כגון קליפות, שאריות עיסת פירות (לאחר כבישת מיץ פירות) ותוצרי לוואי אחרים של פירות הם לעתים קרובות מקורות פקטין עשירים. בעוד שמוצרי פסולת פירות משמשים לעתים קרובות כמזון לבעלי חיים, מיצוי פקטין הוא שימוש בעל ערך רב יותר בפסולת פירות.
מיצוי פקטין קולי כבר מבוצע בהצלחה עם קליפות הדרים (כגון תפוזים, מנדרינות, אשכולית), קליפות מלון, פומס תפוחים, עיסת סלק סוכר, קליפות מנגו, פסולת עגבניות, כמו גם פרי הג'ק, פסיפלורה, קליפות תאנים בין היתר.
מקרי בוחן של מיצוי פקטין קולי
בשל החסרונות של מיצוי פקטין קונבנציונאלי על ידי חום, המחקר והתעשייה כבר חקרו חלופות חדשניות כגון מיצוי קולי. בכך, מידע רב על פרמטרים של תהליך עבור חומרי גלם שונים, כמו גם נתוני אופטימיזציה של תהליכים זמינים.
מיצוי קולי של פקטין מפומס תפוחים
Dranca and Oroian (2019) חקרו את תהליך החילוץ בסיוע אולטרה-סאונד של פקטין מפומייס תפוחים, תוך הפעלת תנאים על-קוליים שונים ושימוש בעיצוב משטח התגובה Box-Behnken. הם מצאו כי משרעת האולטרסאונד משפיעה מאוד על התשואה ועל מידת האסטריפיקציה של הפקטין המופק, בעוד של- pH השאיבה הייתה השפעה רבה על כל שלוש התגובות, כלומר התשואה, תוכן הגאלה ומידת האסטריפיקציה. התנאים האופטימליים למיצוי היו 100% משרעת, pH של 1.8, יחס מוצק-נוזל של 1:10 גרם/מ"ל וסוניקציה של 30 דקות. בתנאים אלה, תפוקת הפקטין הייתה 9.183% והייתה בעלת תכולת גל"א של 98.127 גרם / 100 גרם ודרגת אסטריפיקציה של 83.202%. כדי לקבוע את התוצאות של פקטין שחולץ באולטרסאונד ביחס לפקטין מסחרי, דגימת פקטין שהתקבלה על ידי מיצוי קולי בתנאים אופטימליים הושוותה לדגימות פקטין הדרים ותפוחים מסחריות על ידי FT-IR, DSC, ניתוח ראולוגי ו- SEM. שתי הטכניקות הראשונות הדגישו כמה מאפיינים ייחודיים של דגימת הפקטין שחולצה על ידי מיצוי על-קולי, כגון טווח ההתפלגות הצר יותר של משקל מולקולרי, הסידור המולקולרי המסודר, ורמת האסטריפיקציה הגבוהה שהייתה דומה לזו של פקטין תפוחים זמין מסחרית. ניתוח המאפיינים המורפולוגיים של דגימה המתקבלת באולטרסאונד מצביע על דפוס קביעה בין התפלגות גודל המקטעים של מדגם זה ותכולת הגאלה שלו בצד אחד, לבין יכולת ספיגת המים בצד השני. צמיגות תמיסת הפקטין שחולצה באולטרסאונד הייתה גבוהה בהרבה מזו של התמיסות שיוצרו באמצעות פקטין מסחרי, אולי בגלל הריכוז הגבוה של חומצה גלקטורונית. כאשר לוקחים בחשבון גם את הרמה הגבוהה של אסטריפיקציה, זה עשוי להסביר מדוע הצמיגות הייתה גבוהה יותר עבור פקטין שחולץ באולטרסאונד. החוקרים מסיקים כי הטוהר, המבנה וההתנהגות הריאולוגית של פקטין המופק על ידי מיצוי על-קולי מפומס תפוחים Malus domestica 'Fălticeni' מצביעים על יישומים מבטיחים של סיב מסיס זה. (ראה: דרנקה & אורויאן 2019)
- תשואות גבוהות יותר
- עיבוד מהיר יותר
- תנאי עיבוד מתונים יותר
- יעילות כוללת משופרת
- תפעול פשוט ובטוח
- החזר השקעה מהיר
מחלץ אולטראסוני בעל ביצועים גבוהים לייצור פקטין
מיצוי קולי הוא טכנולוגיית עיבוד אמינה, אשר מאפשר ומאיץ את הייצור של פקטין באיכות גבוהה חומרי גלם שונים כגון פירות הדר תוצרי לוואי קליפות, תפוח pomace ועוד רבים אחרים. תיק Hielscher Ultrasonics מכסה את כל הטווח מ ultrasonicators מעבדה קומפקטית למערכות מיצוי תעשייתי. בכך, אנו ב Hielscher יכול להציע לך את ultrasonicator המתאים ביותר עבור יכולת התהליך החזוי שלך. הצוות הוותיק והמנוסה שלנו יסייע לכם החל מבדיקות היתכנות ואופטימיזציה של תהליכים ועד להתקנת המערכת האולטרסונית שלכם ברמת הייצור הסופי.
טביעת הרגל הקטנה של קולטי האדים העל-קוליים שלנו, כמו גם הרבגוניות שלהם באפשרויות ההתקנה, הופכים אותם למתאימים אפילו למתקני עיבוד פקטין בחלל קטן. מעבדים קוליים מותקנים ברחבי העולם במתקני ייצור מזון, פארמה ותוספי תזונה.
הטבלה הבאה נותנת לך אינדיקציה ליכולת העיבוד המשוערת של האולטרסאונד שלנו:
נפח אצווה | קצב זרימה | מכשירים מומלצים |
---|---|---|
1 עד 500 מ"ל | 10 עד 200 מ"ל/דקה | UP100H |
00.1 עד 20 ליטר | 00.2 עד 4L/דקה | UIP2000hdT |
10 עד 100 ליטר | 2 עד 10 ליטר/דקה | UIP4000hdT |
נ.א. | 10 עד 100 ליטר/דקה | UIP16000 |
נ.א. | גדול | אשכול של UIP16000 |
צרו קשר! / שאל אותנו!
Hielscher Ultrasonics – ציוד חילוץ מתוחכם
תיק המוצרים של Hielscher Ultrasonics מכסה את כל מגוון המחלצים האולטרסוניים בעלי הביצועים הגבוהים בקנה מידה קטן עד גדול. אביזרים נוספים מאפשרים הרכבה קלה של תצורת המכשיר האולטרסוני המתאימה ביותר לתהליך מיצוי הפקטין שלך. ההתקנה הקולית האופטימלית תלויה בקיבולת החזויה, נפח, חומר גלם, תהליך אצווה או מוטבע וציר זמן.
אצווה ומוטבע
Hielscher ultrasonicators ניתן להשתמש עבור אצווה ועיבוד זרימה מתמשכת. עיבוד אצווה על-קולי אידיאלי לבדיקת תהליכים, אופטימיזציה ורמת ייצור קטנה עד בינונית. עבור ייצור כמויות גדולות של פקטין, עיבוד בתוך השורה עשוי להיות מועיל יותר. תהליך ערבוב מוטבע רציף דורש הגדרה מתוחכמת – מורכב במשאבה, צינורות או צינורות ומיכלים -, אבל זה יעיל מאוד, מהיר ודורש הרבה פחות עבודה. Hielscher Ultrasonics יש את ההתקנה מיצוי המתאים ביותר עבור נפח החילוץ שלך ואת מטרות התהליך.
קולטי אדים על-קוליים לכל קיבולת מוצר
טווח המוצרים של Hielscher Ultrasonics מכסה את הספקטרום המלא של מעבדים קוליים, החל מאולטרסוניקטורים מעבדה קומפקטיים מעל מערכות ספסל ופיילוט ועד מעבדים קוליים תעשייתיים לחלוטין עם היכולת לעבד מטענים לשעה. מגוון המוצרים המלא מאפשר לנו להציע לכם את המחלץ האולטרסוני המתאים ביותר לחומר הגלם המכיל פקטין, קיבולת התהליך ויעדי הייצור שלכם.
מערכות ספסל אולטראסוניות אידיאליות לבדיקות היתכנות ואופטימיזציה של תהליכים. סקייל-אפ ליניארי המבוסס על פרמטרים של תהליך מבוסס מקל מאוד על הגדלת יכולות העיבוד ממגרשים קטנים יותר לייצור מסחרי מלא. שדרוג קנה המידה יכול להיעשות על ידי התקנת יחידת חילוץ קולי חזק יותר או קיבוץ מספר ultrasonicators במקביל. עם UIP16000, Hielscher מציעה את המחלץ קולי החזק ביותר בעולם.
אמפליטודות ניתנות לשליטה מדויקת לקבלת תוצאות מיטביות
כל Ultrasonicators Hielscher הם נשלטים במדויק ובכך סוסי עבודה אמין בייצור. המשרעת היא אחד הפרמטרים המכריעים בתהליך המשפיעים על היעילות והאפקטיביות של מיצוי קולי של פקטין מפירות ופסולת ביולוגית.
כל הסוניקטורים של Hielscher מאפשרים הגדרה מדויקת של המשרעת. סונוטרודים וקרניים מאיצים הם אביזרים המאפשרים לשנות את המשרעת בטווח רחב עוד יותר. Hielscher מעבדים קוליים תעשייתיים יכולים לספק אמפליטודות גבוהות מאוד ולספק את העוצמה הקולית הנדרשת עבור יישומים תובעניים. אמפליטודות של עד 200μm ניתנות להפעלה רציפה בקלות בפעולה 24/7.
הגדרות משרעת מדויקות וניטור קבוע של פרמטרי התהליך העל-קולי באמצעות תוכנה חכמה מעניקים לך את האפשרות לטפל בחומר הגלם שלך בתנאים האולטרסוניים היעילים ביותר. סוניקציה אופטימלית לתוצאות החילוץ הטובות ביותר!
החוסן של הציוד הקולי של Hielscher מאפשר פעולה 24/7 בחובה כבדה ובסביבות תובעניות. זה עושה את הציוד קולי של Hielscher כלי עבודה אמין הממלא את דרישות החילוץ שלך.
בדיקה קלה ונטולת סיכונים
תהליכים קוליים יכולים להיות בקנה מידה ליניארי לחלוטין. משמעות הדבר היא שכל תוצאה שהשגתם באמצעות מעבדה או אולטרסאונד עליון, ניתן לשנות את קנה המידה לאותה תפוקה בדיוק באמצעות אותם פרמטרים של תהליך. זה הופך את האולטרסוניקציה לאידיאלית לבדיקת היתכנות ללא סיכון, אופטימיזציה של תהליכים ויישום לאחר מכן בייצור מסחרי. צרו איתנו קשר כדי ללמוד כיצד סוניקציה יכולה להגביר את ייצור תמצית הפקטין שלכם.
האיכות הגבוהה ביותר – עוצב ויוצר בגרמניה
כעסק בבעלות משפחתית ומשפחתית, Hielscher מתעדף את תקני האיכות הגבוהים ביותר עבור המעבדים העל-קוליים שלה. כל האולטרה-סוניקטורים מתוכננים, מיוצרים ונבדקים ביסודיות במטה שלנו בטלטאו ליד ברלין, גרמניה. חוסן ואמינות של ציוד קולי של Hielscher להפוך אותו סוס עבודה הייצור שלך. פעולה 24/7 תחת עומס מלא ובסביבות תובעניות היא מאפיין טבעי של מיקסרים בעלי ביצועים גבוהים של Hielscher.
אודות פקטין
פקטין הוא הטרופוליסכריד מסועף המורכב ממקטעי גלקטורונן ארוכי שרשרת וסוכרים ניטרליים אחרים כגון רמנוז, אראבינוז, גלקטוז וקסילוז. ליתר דיוק, פקטין הוא גוש של קו-פולימר המורכב מחומצה גלקטורונית מקושרת 1,4-α ורמנוז מקושר 1,2 עם ענפים צדדיים של β-D-גלקטוז, L-אראבינוז ויחידות סוכר אחרות. מכיוון שבפקטין נמצאים מספר סוכרים ורמות שונות של מתיל-אסטריפיקציה, לפקטין אין משקל מולקולרי מוגדר כמו לרב-סוכרים אחרים. פקטין, המוגדר לשימוש במזונות, מוגדר כהטרופוליסכריד המכיל לפחות 65% יחידות חומצה גלקטורונית. על ידי החלת תנאי מיצוי ספציפיים, ניתן לשנות בהצלחה פקטין ולתפקד אותו על מנת למלא דרישות ספציפיות. הייצור של פקטינים פונקציונליים ומותאמים מעניינים עבור יישומים מיוחדים, למשל פקטין דל מתוקסילאט עבור תרופות.
כיצד מפרידים פקטין מתמיסת התמצית?
משקעים פקטין לאחר מיצוי קולי: הוספת אתנול לתמיסת תמצית יכולה לעזור להפריד פקטין בתהליך שנקרא משקעים. פקטין, פוליסכריד מורכב המצוי בדפנות התא של צמחים, מסיס במים בתנאים רגילים. עם זאת, על ידי שינוי הסביבה הממס עם תוספת של אתנול, מסיסות של פקטין יכול להיות מופחת, המוביל משקעים שלה מן הפתרון.
להלן נסביר לכם את הכימיה מאחורי משקעי פקטין באמצעות אתנול:
- שיבוש קשרי מימן: מולקולות פקטין מוחזקות יחד על ידי קשרי מימן, התורמים למסיסותן במים. אתנול משבש את קשרי המימן הללו בכך שהוא מתחרה עם מולקולות מים על אתרי קשירה על מולקולות הפקטין (pectin). כאשר מולקולות אתנול מחליפות מולקולות מים סביב מולקולות הפקטין קשרי המימן בין מולקולות הפקטין נחלשים, ומפחיתים את מסיסותן בממס.
- ירידה בקוטביות הממס: אתנול הוא פחות קוטבי ממים, כלומר יש לו יכולת נמוכה יותר להמיס חומרים קוטביים כמו פקטין. ככל שמוסיפים אתנול לתמיסת התמצית, הקוטביות הכוללת של הממס פוחתת, מה שהופך אותו לפחות נוח למולקולות פקטין להישאר בתמיסה. זה מוביל למשקעים של פקטין מתוך התמיסה כפי שהוא הופך פחות מסיס בתערובת אתנול מים.
- ריכוז פקטין מוגבר: ככל שמולקולות הפקטין יוצאות מהתמיסה, ריכוז הפקטין בתמיסה הנותרת עולה. זה מאפשר הפרדה קלה יותר של הפקטין מהפאזה הנוזלית באמצעות סינון או צנטריפוגה.
ספרות / מקורות
- Wafaa S. Abou-Elseoud, Enas A. Hassan, Mohammad L. Hassan (2021): Extraction of pectin from sugar beet pulp by enzymatic and ultrasound-assisted treatments. Carbohydrate Polymer Technologies and Applications, Volume 2, 2021.
- Marina Fernández-Delgado, Esther del Amo-Mateos, Mónica Coca, Juan Carlos López-Linares, M. Teresa García-Cubero, Susana Lucas (2023): Enhancement of industrial pectin production from sugar beet pulp by the integration of surfactants in ultrasound-assisted extraction followed by diafiltration/ultrafiltration. Industrial Crops and Products, Volume 194, 2023.
- Wang, Wenjun; Wu, Xingzhu; Chantapakul, Thunthacha; Wang, Danli; Zhang, Song; Ma Xiaobin; Ding, Tian; Ye, Xingqian; Liu, Donghong(2017): Acoustic cavitation assisted extraction of pectin from waste grapefruit peels: A green two-stage approach and its general mechanism. Food Research Journal Vol.102, December 2017. 101-110.
- Drance, Florina; Oroian, Mircea (2019): Ultrasound-Assisted Extraction of Pectin from Malus domestica ‘Fălticeni’ Apple Pomace. Processes 7(8): 488; 2019.
- Owais Yousuf; Anupama Singh; N. C. Shahi; Anil Kumar; A. K. Verma (2018): Ultrasound Assisted Extraction of Pectin from Orange Peel. Bulletin of Environment, Pharmacology and Life Sciences Vol 7 [12], November 2018. 48-54.
- Lena Rebecca Larsen; Julia Buerschaper; Andreas Schieber; Fabian Weber (2019): Interactions of Anthocyanins with Pectin and Pectin Fragments in Model Solutions. J Agric Food Chem 2019 Aug 21; 67(33). pp. 9344-9353.