آماده سازی نمونه با توان بالا FFPE: استخراج پروتئین و برش اسید نوکلئیک
با UIP400MTP اولتراسونیک با توان بالا، مافوق صوت Hielscher به چالش های تثبیت فرمالین و پارافین تعبیه شده (FFPE) آماده سازی بافت. بیاموزید که چگونه اولتراسونیک نمونه FFPE را در تعداد زیادی برای دپارافینیزاسیون FFPE، لیز بافت، همگن سازی، استخراج پروتئین و برش DNA / RNA پردازش می کند! از آماده سازی بافت اولتراسونیک FFPE استفاده کنید – پردازش تعداد نمونه های بزرگ در صفحات چند چاه! نمونه های با کیفیت بالا را بدست آورید و تعداد نمونه های بالایی را برای نتایج تحقیقات قابل اعتماد دریافت کنید! و آخرین، اما نه کم اهمیت ترین صرفه جویی در وقت و هزینه!
آماده سازی نمونه FFPE با فراصوت با توان بالا تسهیل می شود
تثبیت فرمالین و جاسازی پارافین (FFPE) رایج ترین روش برای نگهداری و بایگانی بافت های جامد است. استخراج مولکول های زیستی از نمونه های بافتی FFPE اغلب به دلیل کیفیت نمونه های ذخیره شده چالش های قابل توجهی را به همراه دارد. این نمونه ها که دارایی های ارزشمندی در زیست شناسی مولکولی و تحقیقات بالینی هستند، منبع غنی از اطلاعات بیولوژیکی را برای مطالعات گذشته نگر و اعتبارسنجی نشانگرهای زیستی تشخیصی فراهم می کنند. با این حال، فرآیند تثبیت فرمالین و جاسازی پارافین، ضمن حفظ معماری و مورفولوژی بافت، استخراج اسیدهای نوکلئیک و پروتئین های با کیفیت بالا را پیچیده می کند. فرمالین باعث اتصال متقابل اسیدهای نوکلئیک و پروتئین ها می شود که منجر به تکه تکه شدن مولکولی و تغییرات شیمیایی می شود. بیاموزید که چگونه UIP400MTP اولتراسونیک با توان بالا بر چالش های آماده سازی نمونه FFPE غلبه می کند!
Ultrasonicator برای آماده سازی نمونه FFPE کارآمد
- گردش کار با کاربری آسان: فرآیندهای ساده ای که کاربر پسند هستند.
- پارافین زدایی، استخراج پروتئین، برش DNA/RNA
- پردازش سریع با توان عملیاتی بالا: جابجایی کارآمد صفحات چند چاه.
- Deparaffinization موثر: بهبود حلالیت پروتئین ها.
- حلال های غیر سمی: از استفاده از حلال های آلی مضر مانند زایلن جلوگیری می کند.
UIP400MTP سونیکاتور با توان بالا برای پردازش نمونه FFPE با توان بالا در صفحات چند چاه
پیشرفت در تکنیک های استخراج پروتئین از بافت FFPE
Hielscher اولتراسونیک به چالش های موجود در آماده سازی نمونه FFPE با توان بالا می پردازد. فراصوت با استفاده از امواج مافوق صوت برای تولید ارتعاشات مکانیکی و حفره متمرکز، به طور موثر مختل کردن ساختارهای سلولی و افزایش حلالیت از مولکول های زیستی. این روش به دلیل توانایی آن در افزایش کارایی و بازده استخراج اسید نوکلئیک و پروتئین از بافت های FFPE و همچنین برش DNA و RNA برای آماده سازی کتابخانه محبوبیت پیدا کرده است. این بسیار مهم است که برجسته شود که ultrasonication با استفاده از UIP400MTP چند خوبی صفحه فراصوت حفظ یکپارچگی این مولکول های زیستی برای کاربردهای پایین دست.
برش اسید نوکلئیک با استفاده از سونوگرافی با توان بالا
UIP400MTP اولتراسونیک چند خوبی برای استفاده در تنظیمات با توان عملیاتی بالا آماده سازی نمونه های FFPE را به سطح جدیدی می رساند. این روش فراصوت چند چاه صفحه فراهم می کند یک راه حل کارآمد و قابل اعتماد برای پردازش همزمان از نمونه های متعدد. استخراج سریع و قابل تکرار DNA، RNA و پروتئین ها را تسهیل می کند که برای تکنیک های تحلیلی مختلف از جمله توالی یابی نسل بعدی (NGS)، PCR کمی و تجزیه و تحلیل پروتئومیک حیاتی هستند. بهینه سازی پارامترهای فراصوت ، مانند دامنه ، مدت زمان و دما ، بیشتر کیفیت و کمیت مولکول های زیستی استخراج شده را افزایش می دهد.
فراصوت UIP400MTP برای صفحات چند چاه مزایای قابل توجهی برای تکه تکه شدن و برش DNA و RNA از بافت FFPE ارائه می دهد. یکی از ویژگی های برجسته این سیستم توانایی آن برای دستیابی به اندازه قطعه باریک DNA و RNA است، ارائه قابلیت تنظیم دقیق شدت فراصوت برای به دست آوردن قطعات کوتاه از 150-200 جفت پایه (bp) و یا قطعات طولانی تر از جفت کیلوباز 15-20 (kbp). این تطبیق پذیری UIP400MTP را برای برنامه های توالی یابی کوتاه مدت و طولانی مدت ضروری می کند و نتایج با کیفیت بالا را برای توالی یابی نسل بعدی (NGS) و توالی یابی کل ژنوم (WGS) تضمین می کند. کنترل دقیق آن بر اندازه قطعه برای محققان در همه زمینه های ژنومیک بسیار مهم است، زیرا امکان تهیه نمونه ها را با توجه به مشخصات فراهم می کند.
برای راه حل های پیشرفته در بافت FFPE با ما تماس بگیرید
کشف UIP400MTP چند خوب صفحه صوتی برای بازیابی کارآمد مولکول های زیستی از نمونه های FFPE، حفظ یکپارچگی اسیدهای نوکلئیک استخراج شده و پروتئین ها و اطمینان از تکرارپذیری نتایج. این فناوری به طور یکپارچه با سایر گردش های کاری آماده سازی و تحلیلی ادغام می شود و تحقیقات مولکولی را با استفاده از آرشیوهای بافت FFPE ساده و بهبود می بخشد.
تثبیت کننده ها و اثرات آنها
تثبیت یک مرحله مهم در آماده سازی نمونه است که ساختارهای سلولی را حفظ می کند، واکنش های بیوشیمیایی را متوقف می کند و از تخریب جلوگیری می کند. بسته به نیازهای آزمایشی خاص از تثبیت کننده های مختلفی استفاده می شود. دو تثبیت کننده رایج فرمالدئید و پارافرمالدئید هستند که پروتئین ها و اسیدهای نوکلئیک را به هم متصل می کنند و مورفولوژی و آنتی ژنیسیته سلول ها و بافت ها را حفظ می کنند. سایر تثبیت کننده ها مانند اتانول، متانول و گلوتارآلدئید برای کاربردهای خاص استفاده می شوند.
تثبیت کننده های فرمالدئید و پارافرمالدئید پل های متیلن را بین گروه های آمینه تشکیل می دهند و در نتیجه اتصال عرضی پروتئین ایجاد می شوند. این فرآیند به طور موثر اجزای سلولی را بی حرکت می کند و یکپارچگی آنها را در طی مراحل تجزیه و تحلیل بعدی حفظ می کند. اثرات این تثبیت کننده ها می تواند تحت تأثیر عواملی مانند غلظت، pH و دما قرار گیرد و بهینه سازی این پارامترها برای اطمینان از حفظ بهینه ساختارهای سلولی بسیار مهم است.
مزایای آماده سازی اولتراسونیک FFPE
امواج فراصوت یک تکنیک قدرتمند برای مختل کردن سلول ها و بافت های ثابت است که برتری از تکنیک های معمولی است. چندین مزیت قابل توجه نسبت به روش های سنتی لیز ارائه می دهد:
- سرعت و کارایی: لیز اولتراسونیک باعث اختلال سریع سلول ها و بافت ها می شود و به طور قابل توجهی زمان پردازش را در مقایسه با روش های لیز مکانیکی یا شیمیایی کاهش می دهد. امواج صوتی با فرکانس بالا تولید شده توسط پروب اولتراسونیک نیروهای برشی مکانیکی ایجاد می کنند و باعث اختلال در ساختارهای سلولی ثابت می شوند. این اختلال سریع و کارآمد محققان را قادر می سازد تا حجم نمونه های زیادی را در یک بازه زمانی کوتاه پردازش کنند.
- ملایم و قابل تنظیم: لیز اولتراسونیک ارائه می دهد یک مکانیسم اختلال ملایم است که آسیب به مولکول های زیستی حساس مانند پروتئین ها، اسیدهای نوکلئیک و آنزیم ها را به حداقل می رساند. بر خلاف روش های مکانیکی که تولید گرما بیش از حد و یا نیروهای برشی, لیز مافوق صوت با بهره گیری از حفره کنترل شده برای مختل کردن سلول ها در حالی که حفظ یکپارچگی و عملکرد اجزای داخل سلولی.
- تنوع: لیز اولتراسونیک را می توان به تثبیت کننده های مختلف اعمال می شود و به محققان اجازه می دهد تا با طیف گسترده ای از نمونه های ثابت کار کنند. این که آیا با استفاده از فرمالدئید، پارافرمالدئید، یا تثبیت کننده های جایگزین، لیز اولتراسونیک به طور مداوم ارائه اختلال کارآمد، اطمینان از بازیابی بهینه از اجزای سلولی.
- عملکرد و کیفیت بالا: لیز اولتراسونیک تسهیل بازده بالا از اجزای سلولی دست نخورده با توجه به توانایی آن در مختل کردن سلول های ثابت و بافت به طور یکنواخت. این امر کاربردهای پایین دستی مانند تجزیه و تحلیل پروتئین، استخراج اسید نوکلئیک و سنجش های آنزیمی را قادر می سازد تا نتایج قابل اعتماد و قابل تکرار را به دست آورند.
- سازگاری اتوماسیون: لیز اولتراسونیک را می توان به راحتی در سیستم های خودکار ادغام کرد و امکان پردازش نمونه با توان بالا را فراهم می کند. این سازگاری محققان را قادر می سازد تا گردش کار خود را ساده کنند و بهره وری را افزایش دهند، به ویژه در مطالعات در مقیاس بزرگ.
سونیکاتور صفحه 96 به خوبی UIP400MTP برای فراصوت میکروتیتر و صفحات چند چاه
لیز اولتراسونیک انقلابی در اختلال سلول ها و بافت های ثابت ایجاد کرده است و مزایای متعددی را نسبت به روش های سنتی لیز ارائه می دهد. سرعت، کارایی، گزینش پذیری، تطبیق پذیری، بازده بالا و سازگاری اتوماسیون آن را به ابزاری ضروری در تحقیقات زیست شناسی مولکولی و بیوتکنولوژی تبدیل کرده است. ارائه فراصوت بدون تماس و همچنین سونیکاتور نوع پروب ، مافوق صوت Hielscher ارائه می دهد مناسب ترین هموژنایزر اولتراسونیک برای نرم افزار علوم زیستی خود را. این که آیا شما می خواهید برای پردازش نمونه های تک، نمونه های متعدد و یا تعداد نمونه بسیار بالا به طور همزمان، ما به شما بهترین فراصوت مطابق با تحقیقات و نیازهای تشخیصی خود را ارائه می دهیم.
اطلاعات بیشتر در مورد Hielscher غیر تماسی فراصوت برای چند نمونه و با توان بالا آماده سازی نمونه!
- سرمایه گذاری یکباره
- از مواد مصرفی خود استفاده کنید
- بدون هزینه های مکرر برای لوازم جانبی و مواد مصرفی اختصاصی
- توان عملیاتی بالا
- کنترل دقیق
- تکنولوژی روز
- قابلیت اطمینان & نیرومندی
- کنترل فرآیند قابل تنظیم و دقیق
- درجه صنعتی: می تواند به طور مداوم 24/7 کار کند
- آسان و ایمن برای کار
- تعمیر و نگهداری کم
سونیکاتور صفحه UIP400MTP برای هر صفحه 96 چاه، صفحات میکروتیتر و صفحات چند چاه.
طراحی، ساخت و مشاوره – کیفیت ساخت آلمان
مافوق صوت Hielscher به خوبی برای بالاترین کیفیت و استانداردهای طراحی خود را شناخته شده. استحکام و بهره برداری آسان اجازه می دهد تا ادغام صاف از ultrasonicators ما به امکانات صنعتی. شرایط خشن و محیط های خواستار به راحتی توسط مافوق صوت Hielscher رسیده.
Hielscher اولتراسونیک یک شرکت دارای گواهینامه ISO است و تاکید ویژه ای بر مافوق صوت با کارایی بالا با ویژگی های دولت از هنر فن آوری و کاربر پسند قرار داده است. البته، مافوق صوت Hielscher مطابق با CE و دیدار با الزامات UL، CSA و RoHs.
تماس با ما! / از ما بپرسید!
UIP400MTP Ultrasonicator: آماده سازی نمونه FFPE با توان بالا در چند چاه صفحه
سوالات متداول
در زیر ، ما به سوالات متداول پاسخ می دهیم ، که مربوط به آماده سازی بافت FFPE و سونوگرافی نمونه های FFPE است.
بافت FFPE چگونه تهیه می شود؟
مراحل آماده سازی بافت FFPE: دست زدن و پردازش دقیق بافت تازه برای تولید نمونه های FFPE با کیفیت بالا بسیار مهم است. اطمینان از حفظ معماری سلولی، اسیدهای نوکلئیک و پروتئین ها برای تجزیه و تحلیل دقیق پایین دست ضروری است. هر مرحله - از جمع آوری تا جاسازی - نیاز به دقت برای حفظ یکپارچگی نمونه برای تجزیه و تحلیل های مختلف، از جمله معاینه بافت شناسی، ایمونوهیستوشیمی و مطالعات مولکولی دارد. این فرآیند تثبیت و جاسازی که به درستی اجرا می شود، تضمین می کند که بافت حفظ شده به طور دقیق حالت in vivo را منعکس می کند و نتایج تشخیصی و تحقیقاتی قابل اعتماد را امکان پذیر می کند.
ما شما را در 6 مرحله اصلی فرآیند تعبیه نمونه های بافت FFPE راهنمایی می کنیم.
- جمع آوری بافت
بیوپسی از پستانداران زنده و کشت بافت هر دو منابع مناسبی برای به دست آوردن بافت تازه برای آماده سازی نمونه FFPE هستند.
استفاده از تکنیک آسپتیک مهم است: برای جلوگیری از آلودگی از ابزار و دستکش استریل استفاده کنید. در حالت ایده آل، بافت ها را در یک محیط استریل مانند سوئیت جراحی یا هود جریان آرام جمع آوری کنید.
از آنجایی که نمونه بسیار شکننده است، جابجایی حساس آن ضروری است: تاخیر در پردازش را به حداقل برسانید و بلافاصله پس از برداشتن پردازش بافت را شروع کنید. این برای جلوگیری از اتولیز و تخریب بسیار مهم است. بافت را در دمای اتاق نگه دارید. از انجماد خودداری کنید زیرا می تواند باعث تشکیل کریستال یخ و آسیب بافتی شود. - تثبیت بافت
ابتدا بافت با یک محلول تثبیت کننده درمان می شود: از فرمالین بافر خنثی 10٪ (NBF) استفاده کنید که معادل 4٪ فرمالدئید در آب است و تا pH خنثی بافر شده است.
بافت را کاملا در فرمالین غوطه ور کنید. از نسبت حجمی تثبیت کننده به بافت حداقل 10:1 اطمینان حاصل کنید. زمان تثبیت معمولا بسته به نوع و اندازه بافت از 6 تا 24 ساعت متغیر است. مهم است که فیکساتور بتواند به طور کامل به بافت نفوذ کند. با این حال، تثبیت بیش از حد می تواند منجر به اتصال عرضی شود که بازیابی آنتی ژن را پیچیده می کند، در حالی که تثبیت کم می تواند منجر به حفظ ضعیف بافت شود. - پیرایش بافت
در مرحله دوم، بافت را تا ضخامت حدود 3-5 میلی متر کوتاه کنید تا امکان نفوذ کافی در تثبیت کننده فراهم شود. از جهت گیری مناسب بافت برای گرفتن ساختارهای بافت شناسی مربوطه اطمینان حاصل کنید. این فرآیند استخراج را تسهیل می کند زمانی که بافت بعدا برای تجزیه و تحلیل استفاده می شود. - پردازش نمونه ثابت
اکنون ، بافت ثابت باید کم آب شود: پس از تثبیت ، بافت باید کم آب شود تا از نفوذ کامل موم پارافین اطمینان حاصل شود. بافت را از یک سری درجه بندی شده اتانول (70٪، 80٪، 90٪ و 100٪) عبور دهید تا آب خارج شود.
پاکسازی با زایلین: موم پارافین در آب نامحلول است، اما در زایلن محلول است. بنابراین ، آب موجود در بافت باید با زایلن جایگزین شود. با این حال، زایلن به خودی خود در آب نامحلول است اما در الکل محلول است و نیاز به یک مرحله میانی دارد که در آن ابتدا آب با الکل جایگزین شود. بافت را در زایلن یا جایگزین زایلن غوطه ور کنید تا اتانول حذف شود و بافت را برای نفوذ پارافین آماده کنید.
نفوذ با استفاده از پارافین: بافت را در موم پارافین مذاب جاسازی کنید و از نفوذ کامل اطمینان حاصل کنید. این مرحله معمولا شامل چندین تغییر پارافین برای اطمینان از اشباع کامل است. - تعبیه بافت
در این مرحله بافت به صورت بلوک بافتی قالب گیری می شود: بافت را در قالبی با جهت دلخواه قرار دهید و پارافین مذاب را روی آن بریزید. اجازه دهید پارافین با خنک کردن در دمای اتاق یا روی بشقاب سرد جامد شود. - بخش بندی و نصب
میکروتومی: برای برش بافت جاسازی شده، از یک میکروتوم برای برش بخش های نازک (معمولا 4-5 میکرومتر) از بلوک پارافین استفاده کنید. سپس نمونه نصب می شود و بخش ها را روی اسلایدهای شیشه ای برای رنگ آمیزی بعدی و تجزیه و تحلیل میکروسکوپی قرار می دهد.
در نهایت، کیفیت بافت شناسی را بررسی کنید: بخش های اول را زیر میکروسکوپ ارزیابی کنید تا از تثبیت و پردازش مناسب اطمینان حاصل کنید. پروتکل ها را بر اساس نوع بافت و کیفیت مشاهده شده تنظیم کنید.
از بافت های FFPE می توان برای بازیابی RNA، DNA و پروتئین ها و همچنین کشف علائم سرطان یا بیماری های دیگر استفاده کرد. آنها می توانند برای سال ها ذخیره شوند و بخش مهمی از نحوه استفاده محققان و پزشکان از نمونه های بافت برای تشخیص و تحقیق هستند.
مشکلات و چالش های رایج بافت FFPE چیست؟
نمونه های بافت پارافین ثابت فرمالین (FFPE) به طور گسترده ای در تحقیقات و تشخیص استفاده می شوند، اما چندین چالش و مشکلات رایج را به همراه دارند:
- تخریب مولکول های زیستی: تثبیت طولانی مدت می تواند منجر به تخریب DNA، RNA و پروتئین ها شود و استخراج اسیدهای نوکلئیک یا پروتئین های با کیفیت بالا را برای کاربردهای پایین دست دشوار کند. تثبیت صحیح (اجتناب از تثبیت کم و بیش از حد) برای حفظ بافت ضروری است.
- ماسک آنتی ژن: فرآیند تثبیت می تواند سایت های آنتی ژنی را بپوشاند و اثربخشی اتصال آنتی بادی را در ایمونوهیستوشیمی و سایر سنجش های ایمونولوژیک کاهش دهد. این اغلب نیاز به بازیابی آنتی ژن دارد، روشی که از طریق آن پوشاندن اپی توپ معکوس می شود و اتصال اپی توپ-آنتی بادی بازیابی می شود. با این حال، آنتی ژنیسیته کامل ممکن است همیشه بازیابی نشود.
- کیفیت تثبیت متغیر: تفاوت در زمان ها و شرایط تثبیت می تواند منجر به کیفیت نمونه متناقض شود و بر تکرارپذیری و مقایسه پذیری نتایج تأثیر بگذارد. از پروتکل های تثبیت قابل اعتماد استفاده کنید و از تثبیت کم و بیش از حد خودداری کنید.
- آسیب و تکه تکه شدن DNA: تثبیت فرمالین نمونه های FFPE می تواند باعث انواع مختلفی از آسیب DNA شود، از جمله دآمیناسیون سیتوزین (جهش های C به T)، آسیب اکسیداتیو (به عنوان مثال، 8-اکسوگوانین که منجر به جهش های G به T) می شود، و همچنین اختلالات فیزیکی مانند شکاف ها، شکاف ها و مکان های آبازیک که مانع فعالیت DNA پلیمراز می شوند. فرآیند تثبیت فرمالین می تواند باعث تکه تکه شدن DNA شود و تجزیه و تحلیل ژنتیکی و ژنومی مانند PCR و توالی یابی را پیچیده کند.
- کیفیت RNA: RNA استخراج شده از بافت های FFPE اغلب تکه تکه شده و از نظر شیمیایی اصلاح می شود و انجام تجزیه و تحلیل های رونویسی با کیفیت بالا را چالش برانگیز می کند.
- تغییرات پروتئین: فرمالین می تواند تغییرات شیمیایی در پروتئین ها ایجاد کند و بر ساختار و عملکرد آنها تأثیر بگذارد که می تواند در تجزیه و تحلیل پروتئومیک اختلال ایجاد کند.
- مصنوعات پردازش نمونه: در طول فرآیند جاسازی و بخشش، تنش مکانیکی و گرما می تواند مصنوعات را وارد کند و باعث آسیب بیشتر به بافت شود.
- تنوع دسته به دسته: تغییرات در پروتکل های تثبیت و جاسازی بین دسته های مختلف می تواند منجر به تنوع قابل توجهی در نتایج شود، و مقایسه ها را بین مطالعات پیچیده کند.
- مسائل مربوط به ذخیره سازی: ذخیره سازی طولانی مدت بلوک های FFPE می تواند منجر به تخریب بیشتر و از بین رفتن یکپارچگی اسید نوکلئیک در طول زمان شود و بر زنده ماندن نمونه های آرشیوی برای مطالعات گذشته نگر تأثیر بگذارد.
پیوند متقابل: تثبیت فرمالین باعث اتصال عرضی پروتئین ها و اسیدهای نوکلئیک می شود که می تواند مانع تجزیه و تحلیل مولکولی شود و بر دقت ایمونوهیستوشیمی و سایر سنجش ها تأثیر بگذارد.
استفاده از پروتکل های بهینه، مدیریت دقیق نمونه و به کارگیری تکنیک های پیشرفته به بهبود کیفیت و قابلیت اطمینان داده های به دست آمده از بافت های FFPE کمک می کند.
تفاوت بین FFPE و بافت منجمد چیست؟
بافت FFPE (فرمالین ثابت، پارافین تعبیه شده) با استفاده از فرمالین برای تثبیت بافت حفظ می شود و سپس در موم پارافین تعبیه می شود و امکان نگهداری طولانی مدت در دمای اتاق را فراهم می کند و در عین حال مورفولوژی بافت را حفظ می کند. در مقابل ، بافت منجمد به سرعت با انجماد حفظ می شود ، که یکپارچگی اسیدهای نوکلئیک و پروتئین ها را بهتر حفظ می کند اما نیاز به ذخیره سازی در دماهای بسیار پایین دارد.
چه مواد شیمیایی برای تعبیه FFPE استفاده می شود؟
مواد شیمیایی مورد استفاده برای تعبیه FFPE به طور معمول شامل فرمالین برای تثبیت و موم پارافین برای تعبیه است. برای تعبیه FFPE، بافت ها معمولا با استفاده از فرمالین بافر خنثی 10٪ (v/v) یا محلول فرمالدئید (PFA) 4٪ (w/v) تازه آماده شده از پودر پارافرمالدئید ثابت می شوند. فرمالین که محلول فرمالدئید موجود در آب است، برای حفظ مورفولوژی بافت و جلوگیری از اتصال بیش از حد به PH خنثی بافر می شود. محلول مبتنی بر پارافرمالدئید همچنین با اتصال متقابل پروتئین ها، تثبیت موثری را فراهم می کند، در نتیجه ساختار بافت را برای تعبیه بعدی در موم پارافین تثبیت می کند. این مواد شیمیایی برای حفظ یکپارچگی بافت و مورفولوژی در طول فرآیند تثبیت و جاسازی ضروری هستند.
پارافین چگونه از نمونه های FFPE حذف می شود؟
برای حذف پارافین از نمونه های FFPE، بخش های بافتی معمولا تحت یک سری شستشوی زایلن قرار می گیرند و به دنبال آن آبرسانی مجدد از طریق یک سری درجه بندی شده از الکل ها و در نهایت آب انجام می شود. از آنجا که زایلن بسیار سمی است و خطرات سلامتی مانند مشکلات تنفسی، تحریک پوست و اثرات بالقوه طولانی مدت با قرار گرفتن در معرض مکرر را به همراه دارد، حذف پارافین اولتراسونیک به عنوان یک جایگزین امیدوارکننده در بسیاری از آزمایشگاه ها در حال ظهور است. این روش از امواج اولتراسونیک شدید برای حذف کارآمد و ایمن پارافین بدون نیاز به حلال های سمی مانند زایلن استفاده می کند و در نتیجه خطر را برای پرسنل آزمایشگاه کاهش می دهد و محیط کاری ایمن تری ایجاد می کند.
چه مدت باید بافت های خود را برای کیفیت نمونه FFPE خوب ثابت کنم؟
توصیه های کلی برای مدت زمان تثبیت معمولا توصیه می کند که نمونه های بافت را در فرمالین به مدت 24 تا 48 ساعت ثابت کنید. این مدت زمان به طور کلی برای حفظ مورفولوژی بافت و ساختارهای سلولی و در عین حال به حداقل رساندن تثبیت بیش از حد کافی است، که می تواند منجر به اتصال عرضی بیش از حد و تخریب اسیدهای نوکلئیک و پروتئین ها شود. با این حال، زمان تثبیت بهینه بسته به اندازه و نوع بافت می تواند متفاوت باشد، با نمونه های کوچکتر یا ظریف تر که به زمان تثبیت کوتاه تری نیاز دارند. متعادل کردن تثبیت کافی برای جلوگیری از اتولیز و تخریب بافت و در عین حال اجتناب از تثبیت طولانی مدت که می تواند تجزیه و تحلیل مولکولی پایین دست را پیچیده کند، بسیار مهم است.