Fragmentación de alfa-sinucleína con el sonicador VialTweeter

Las fibrillas y cintas de α-sinucleína se fragmentan en la investigación científica para generar fragmentos de fibrillas más pequeños o incluso moléculas de proteína individuales, que pueden analizarse más fácilmente mediante diversas técnicas experimentales. El VialTweeter Sonicator es uno de los ultrasonidos más utilizados para la fragmentación eficaz y fiable de la alfa-sinucleína.

α-Sinucleína en la investigación

VialTweeter para la fragmentación simultánea de múltiples muestras de fibrillas de alfa-sinucleína exactamente en las mismas condiciones.Las fibrillas de alfa-sinucleína son agregados proteicos fuertemente asociados a trastornos neurodegenerativos como la enfermedad de Parkinson y ciertas formas de demencia, incluida la demencia con cuerpos de Lewy. La investigación centrada en las fibrillas de alfa-sinucleína pretende comprender su papel en la progresión de la enfermedad y desarrollar posibles intervenciones terapéuticas. Al descomponer las fibrillas de alfa-sinucleína en fragmentos más pequeños, los investigadores pueden estudiar sus características estructurales específicas. Por ejemplo, fragmentar las fibrillas de alfa-sinucleína permite investigar sus interacciones con otras moléculas, como proteínas, lípidos o moléculas pequeñas. Al producir fragmentos más pequeños, se pueden sondear más eficazmente los sitios de unión y la afinidad por estos socios interactivos. Los fragmentos y cintas de α-Syn más pequeños también pueden mostrar una toxicidad y unos efectos bioquímicos alterados. Por lo tanto, es crucial disponer de una técnica de fragmentación fiable y eficiente, que produzca resultados reproducibles en un tratamiento de muestras rápido y sencillo.
Fragmentación ultrasónica Alpha-Syn: El sonicador VialTweeter es el sistema de preparación de muestras por ultrasonidos establecido que sonicará hasta 10 viales simultáneamente en exactamente las mismas condiciones. Los ajustes programables permiten la repetición sencilla y rápida de los mismos experimentos, lo que proporciona resultados altamente fiables y reproducibles en la fragmentación de fibrillas de alfa-sinucleína.

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El VialTweeter Sonicator es uno de los ultrasonicadores más utilizados para la fragmentación eficaz y fiable de la alfa-sinucleína.

Sonicador VialTweeter para la fragmentación ultrasónica simultánea de múltiples muestras de alfa-sinucleína.

 

El VialTweeter es un sistema ultrasónico único para la sonicación simultánea de hasta 10 viales en exactamente las mismas condiciones sin contaminación cruzada.

UP200St con VialTweeter para la sonicación de viales cerrados

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Preparación de muestras de α-sinucleína con un sonicador

Un método para estudiar las fibrillas de alfa-sinucleína consiste en extraerlas y fragmentarlas mediante técnicas como la sonicación. La sonicación es un proceso que utiliza ondas ultrasónicas de alta intensidad y baja frecuencia para romper los agregados de proteínas y liberar fibrillas más pequeñas o moléculas de proteínas individuales. El sonicador VialTweeter es un dispositivo de uso común en los estudios de investigación relacionados con la α-sinucleína para este fin.

Numerosos estudios de investigación describen protocolos precisos de preparación de muestras para la sonicación de fibrillas de alfa-sinucleína, que utilizan el VialTweeter de Hielscher para una fragmentación eficiente y fiable de las fibrillas de α-sinucleína. Al fragmentar las fibrillas por ultrasonidos, los investigadores pueden analizar los productos resultantes y examinar su estructura, toxicidad e interacciones con otras moléculas. Esta investigación aporta importantes conocimientos sobre los mecanismos subyacentes a la neurodegeneración y puede identificar nuevas dianas terapéuticas. Los protocolos de sonicación de α-sinucleína bien establecidos que utilizan el sonicador VialTweeter permiten obtener resultados fiables y reproducibles.

Alpha synuclein fibril fragmentation VialTweeter sonicator

Imágenes superiores: fibrillas de alfa-sinucleína no fragmentadas
Imágenes inferiores: Fibrillas de alfa-sinucleína fragmentadas por ultrasonidos con el sonicador VialTweeter.
(estudio e imágenes: ©Dieriks et al., 2022)

Fragmentación ultrasónica de fibrillas de α-sinucleína – protocolos

Dado que numerosos investigadores utilizan el sonicador VialTweeter como técnica de fragmentación preferida para producir fragmentos uniformes de fibrillas de α-sinucleína, se dispone fácilmente de protocolos establecidos. A continuación encontrará algunos protocolos de fragmentación ejemplares.
 

 
Preparación de semillas ClearTau: Las fibrillas ClearTau se diluyeron a 10 μM en dH2O y se sonicaron al 70 % de amplitud durante 50 s con un ciclo de 1 s ON 1 s OFF en el tubo utilizando el sonicador UP200St con VialTweeter. Las semillas se caracterizaron mediante microscopía electrónica.
Medición de la fluorescencia del ThS: Las fibrillas ClearTau se diluyeron a 2,5 μM en dH2O y se sonicaron a una amplitud del 70 % durante 50 s con un ciclo de 1 s ON 1 s OFF en el tubo utilizando UP200St con VialTweeter. Como control se utilizó 2,5 μM de monómero Tau 4R2N de longitud completa. A la reacción de 100 μl se añadieron 100 μl de ThS (10 μM), obteniéndose concentraciones finales de proteína de 1,25 μM. Se midió la fluorescencia de ThS en un solo punto temporal utilizando placas de fondo transparente de 96 pocillos configuradas en un lector de microplacas FLUOstar Omega con excitación a 445 nm y se registró la emisión a 485 nm.
(cf. Limorenko et al., 2023)
 
Longitud uniforme de la α-sinucleína mediante sonicación: La heterogeneidad de longitud de las fibrillas y cintas de α-syn se redujo mediante sonicación durante 20 min en hielo en tubos Eppendorf de 2 ml en un VialTweeter ajustado a una amplitud del 75%, pulsos de 0,5 s.
(cf. Bousset et al., 2013)
 
Se llevó a cabo el control de calidad de la a-Syn humana recombinante monomérica WT o S129A y de los polimorfos fibrilares que generan, así como el de la a-Syn 1-110. Posteriormente, los polimorfos fibrilares se fragmentaron por sonicación durante 20 min en tubos Eppendorf de 2 ml en el ultrasonicador VialTweeter para generar partículas fibrilares con un tamaño medio de 42-52 nm aptas para endocitosis.
(cf. Shrivastava et al., 2020)
 

La fragmentación ultrasónica es un método altamente fiable y eficiente para fragmentar fibrillas y cintas de alfa-sinucleína de manera uniforme. El VialTweeter es uno de los sonicadores más utilizados para la fragmentación de α-sinucleína.

Caracterización de cinco polimorfos fibrilares de α-Syn. (A) Se muestran micrografías electrónicas de transmisión de polimorfos fibrilares de α-Syn teñidos negativamente, cintas, fibrillas-91, fibrillas-65 y fibrillas-110 antes (carril superior) y después de la fragmentación con el VialTweeter (carril inferior). (B) Se muestra la distribución de longitud de los polimorfos fibrilares fragmentados. Se indica el número (n) de conjuntos fibrilares de los que se obtuvieron los histogramas.
(estudio e imágenes: Shrivastava et al., 2020)

 
Las fibrillas de α-Syn se fragmentaron por sonicación durante 20 min en tubos Eppendorf de 2 ml en un VialTweeter para generar partículas fibrilares con un tamaño medio de 42-52 nm según se evaluó mediante análisis TEM.
(cf. Negrini et al., 2022)
 
Las fibrillas resuspendidas91 (en PBS) se fragmentaron antes de añadirlas a los cultivos celulares mediante sonicación durante 20 min en tubos Eppendorf de 2 mL utilizando el sonicador Vial Tweeter, se tomaron alícuotas, se congelaron rápidamente en nitrógeno líquido y se almacenaron hasta su uso a -80 ̊C.
(cf. Vajhøj et al., 2021)
 

Sonicator UIP400MTP para la fragmentación de fibrillas de alfa-sinucleína en placas multipocillo.

Sonicator UIP400MTP para la fragmentación de fibrillas de alfa-sinucleína en placas multipocillo.

Sonicator UIP400MTP para la fragmentación de fibrillas de alfa-sinucleína en placas multipocillo.

VialTweeter y sonicadores de laboratorio para la fragmentación de α-Syn

VialTweeter con tubos Eppendorf de 2,0 ml para una fragmentación fiable de las fibrillas de alfa-sinucleínaHielscher Ultrasonics es reconocido mundialmente como fabricante líder de ultrasonidos de última generación. De confianza y establecidos en los principales laboratorios de investigación de todo el mundo, nuestros ultrasonidos ofrecen una calidad y un rendimiento inigualables para sus experimentos críticos.
Con el VialTweeter de Hielscher y cualquier otro sonicador de Hielscher, experimentará una comodidad de uso inigualable, ya que han sido cuidadosamente diseñados para obtener resultados reproducibles, facilidad de uso y un funcionamiento sin problemas. Gracias a las funciones de registro automático de datos, podrá centrarse en su investigación mientras nuestros ultrasonicadores registran meticulosamente datos cruciales para lograr reproducibilidad y precisión.
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Nuestros ultrasonicadores se diseñan y fabrican en Alemania. La precisión alemana y la más alta calidad de ingeniería garantizan siempre una preparación de muestras fiable y precisa, como la fragmentación de fibrillas de alfa-sinucleína. Se acabaron las preocupaciones por resultados incoherentes: nuestra tecnología de ultrasonidos garantiza que su investigación se mantenga a la vanguardia del avance científico.
Pero eso no es todo. Nuestro compromiso con la excelencia va más allá de nuestros productos. Estamos orgullosos de nuestro excepcional servicio de atención al cliente, que ofrece asistencia experta para resolver cualquier duda o preocupación que pueda tener. Nuestro equipo especializado está aquí para ayudarle en cada paso de su viaje de investigación, asegurándose de que obtiene el máximo provecho de nuestros ultrasonicadores.
Elija innovación, fiabilidad y una experiencia de usuario excepcional: elija nuestros sonicadores de laboratorio como el VialTweeter para la fragmentación de fibrillas de alfa-sinucleína. Benefíciese de los protocolos ya establecidos y únase a las filas de los investigadores líderes que confían en nuestra tecnología para sus estudios críticos. Eleve su investigación y explore nuevas fronteras en la investigación de la demencia y las enfermedades neurodegenerativas con nuestros ultrasonicadores de última generación.

¿Por qué Hielscher Ultrasonics?

  • elevada eficiencia
  • tecnología punta
  • fiabilidad & robustez
  • reproducibilidad
  • control de procesos preciso y ajustable
  • para cualquier volumen
  • software inteligente
  • funciones inteligentes (por ejemplo, programable, protocolización de datos, control remoto)
  • Manejo sencillo y seguro
  • Bajo mantenimiento
  • CIP (limpieza in situ)

 

Este tutorial explica qué tipo de sonicador es el mejor para sus tareas de preparación de muestras como lisis, disrupción celular, aislamiento de proteínas, fragmentación de ADN y ARN en laboratorios, análisis e investigación. Elija el tipo de sonicador ideal para su aplicación, volumen de muestra, número de muestras y rendimiento. Hielscher Ultrasonics tiene el homogeneizador ultrasónico ideal para usted.

Cómo encontrar el sonicador perfecto para la disrupción celular y la extracción de proteínas en ciencia y análisis

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Diseño, fabricación y consultoría – Calidad Made in Germany

Los ultrasonidos de Hielscher son conocidos por sus elevados estándares de calidad y diseño. Su robustez y fácil manejo permiten una integración sin problemas de nuestros ultrasonidos en las instalaciones industriales. Los ultrasonidos de Hielscher soportan sin problemas las condiciones más duras y los entornos más exigentes.

Hielscher Ultrasonics es una empresa con certificación ISO y pone especial énfasis en los ultrasonidos de alto rendimiento con tecnología punta y facilidad de uso. Por supuesto, los sonicadores de Hielscher cumplen la normativa CE y los requisitos de UL, CSA y RoHs.
 
La tabla siguiente le ofrece una indicación de la capacidad de procesamiento aproximada de nuestros ultrasonicadores de tamaño laboratorio:
 

Dispositivos recomendadosVolumen del loteTasa de flujo
UIP400MTPplacas multipocillo / microtituladorasn.a.
CupHorn ultrasónicoCupHorn para viales o vaso de precipitadosn.a.
GDmini2reactor ultrasónico de microflujon.a.
VialTweeter0,5 a 1,5 mLn.a.
UP100H1 a 500 mL10 a 200 mL/min.
UP200Ht, UP400St10 a 2000 mL20 a 400 mL/min.

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El vídeo muestra el sistema de preparación de muestras por ultrasonidos UIP400MTP, que permite la preparación fiable de muestras de cualquier placa multipocillo estándar mediante ultrasonidos de alta intensidad. Las aplicaciones típicas del UIP400MTP incluyen la lisis celular, el cizallamiento de ADN, ARN y cromatina, así como la extracción de proteínas.

Ultrasonicador UIP400MTP para sonicación de placas de pocillos múltiples

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El MultiSampleSonicator VialTweeter puede contener hasta 10 viales más pequeños y hasta 5 tubos de ensayo más grandes

El VialTweeter se utiliza habitualmente para fragmentar la fibrilla de alfa-sinucleína como paso de la preparación preanalítica de la muestra



Literatura / Referencias


Ultrasonidos de alto rendimiento La gama de productos Hielscher cubre todo el espectro, desde el ultrasonicador compacto de laboratorio, pasando por las unidades de sobremesa, hasta los sistemas de ultrasonidos totalmente industriales.

Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrasónicos de alto rendimiento de laboratorio a tamaño industrial.


Estaremos encantados de hablar de su proceso.

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