Ultrasonik Kök Hüceyrə İzolyasiyası
Sonication insan yağ toxumasından kök hüceyrələri təcrid etmək üçün yüksək effektiv mexaniki üsuldur. Ultrasonik olaraq təcrid olunmuş stromal vaskulyar fraksiya (SVF) tibbi tətbiqlər üçün əhəmiyyətli regenerativ potensial nümayiş etdirir. Hielscher Ultrasonics, kök hüceyrə yığımı üçün bir sıra birbaşa və dolayı sonikasiya variantları təqdim edir. Kök hüceyrə təcrid prosesiniz üçün ideal sonikator tapın!
Kök Hüceyrələrin Ultrasonik İzolyasiyası
İnsan bədənindən çıxarılan piy toxuması (liposaksiya yolu ilə) toxumanı kök hüceyrələrdən və digər böyümə hüceyrələrindən çıxarmaq üçün ultrasəs üsulu ilə müalicə olunur. Hüceyrələrin bu ayrılmış hissəsi stromal vaskulyar fraksiya hüceyrələri (SVF) kimi tanınır.
Kök hüceyrələrin piy toxumasından ultrasəs izolyasiya texnikası yalnız sırf mexaniki kəsmə olan ultrasəsdən əldə edilən kavitasiyanın iş prinsipinə əsaslanır. Bu kavitasiya kəsmə qüvvələri piy toxumasını pozur, beləliklə kök hüceyrələr yağ toxumasının strukturundan azad olur. Ultrasonik kök hüceyrə izolyasiyası kollagenaza, tripsin və ya dispazın istifadəsindən yayınan fermentsiz bir prosedurdur.
Çıxarılan kök hüceyrələri, mezenximal kök hüceyrələri, endotel prekursorları və digər böyümə hüceyrə növlərini ayırmaq üçün sonikləşdirilmiş yağ toxuması sentrifuqa edilir.
Ayrılan kök hüceyrələr dərhal otoloji transplantasiya üçün istifadə edilməzdən əvvəl hüceyrə sayı, canlılıq qabiliyyəti, endotoksin və qram ləkəsi daxil olmaqla keyfiyyətinə görə toplanır və təhlil edilir və ya krio anbarda saxlanılır.
Niyə fermentlərdən qaçın?
Kök hüceyrə izolyasiyası üçün fermentativ həzm yüksək xərclər və mümkün təhlükəsizlik riskləri, eləcə də effektivliyin olmaması ilə müşayiət olunduğundan [Oberbauer et al. 2015], ultrasəs kavitasiyası kimi fermentativ olmayan izolyasiya üsullarına üstünlük verilir. Ultrasəs izolyasiya addımı hüceyrələri və hüceyrə aqreqatlarını yağ toxumasından mexaniki olaraq ayıraraq fermentativ həzmi əvəz edir.
GDmini2 UP200St-TD Transduserdə (200 vatt)
- Sürətli
- Səmərəli
- təkrarlana bilən
- Təhlükəsiz
- Fermentsiz
- Xərc baxımından səmərəli
- Steril Seçimlər
Piydən əldə edilən kök hüceyrələr
Soniaction ilə əldə edilən kök hüceyrə məhsuldarlığı
1,67–2,24 × 10 ölçüsündə ultrasəs kavitasiya məhsuldarlığından istifadə edərək nəşr olunmuş stromal damar fraksiyasının izolyasiya üsulu7 həyat qabiliyyəti 97,1-98,9% olan hüceyrələr [Victor, S., 2014]. Təxminən 2-4 milyon hüceyrə/qram yağ toxumasının hüceyrə məhsuldarlığı dissosiasiya olunmuş yağ toxumasında yetkin adipositlərin ultrasəs lizisi ilə əldə edilmişdir [Bright et al., 2014].
Ultrasəs üsulu ilə hazırlanmış hüceyrələr standart enzimatik izolyasiya üsulu ilə müqayisədə eyni dərəcədə yüksək adipogen və osteogenik diferensiallaşma potensialına malikdir [Oberbauer et al. 2015].
Kök hüceyrə izolyasiyası üçün ultrasəs sistemləri
Ən yüksək təhlükəsizlik və ən yüksək keyfiyyəti təmin etmək üçün kök hüceyrə müalicəsi üzərində dəqiq nəzarəti təmin edən etibarlı ultrasəs avadanlıqları xəstələrin uğurlu müalicəsi üçün əsas amildir. Hielscher Ultrasonics, kök və endotelial prekursor hüceyrələrini təcrid etmək və yığmaq üçün otolog ultrasəs kavitasiya ayırma prosesi üçün müxtəlif variantlar təklif edir.
Kök Hüceyrə İzolyasiyası üçün Birbaşa Sonikasiya
Birbaşa sonication vasitəsilə kök hüceyrə təcrid prosesi üçün, ultrasəs buynuz (sonotrode, ultrasəs uc / zond) yağlı yağ toxumasına batırılır. Sonotrot vasitəsilə ultrasəs dalğaları birbaşa otolog yağa birləşdirilir ki, ultrasəs kavitasiyası kök hüceyrələri və stromal hüceyrələri qalıq toxumadan azad edir. Hielscher sonikatorları UP200Ht və UP200 St sonotrode ilə S26d14 otolog kök hüceyrə müalicəsi üçün çox istifadə olunan sistemlərdir. Birbaşa sonikasiya ilə stromal damar fraksiyasının təcrid edilməsi əsasən təmiz otaqlarda istifadə üçün uygundur.
Kök Hüceyrə İzolyasiyası üçün Dolayı Sonikasiya
Kök hüceyrələr otoloji tətbiqlər üçün istifadə edildiyi üçün prosesin sterilliyi çox vacibdir. Buna görə də, Hielscher kimi dolayı sonication bir neçə variantları inkişaf etmişdir GDmini2, VialTweeter və digər fərdiləşdirilmiş sistemlər. Dolayı sonikasiya ilə ultrasəs dalğaları divar qabı vasitəsilə yağ toxumasına birləşdirilir. Stromal vaskulyar fraksiya (SVF) birbaşa sonikasiya zamanı olduğu kimi ultrasəs kavitasiyası ilə yağ toxumasından ayrılır.
Dolayı sonikasiya prosesi hüceyrələrin qapalı bir qabda emal edilməsi üçün üstünlük təklif edir çirklənmədən azad şərait çünki ultrasəs buynuzunun (sonotrode) daxil edilməsi ilə çarpaz çirklənmə riski aradan qaldırılır. Hüceyrə izolyasiyası steril proses şəraitini təmin edən qapalı sistemdə həyata keçirilir.
Hielscher Steril Sonicators haqqında daha çox oxuyun!
Hielscher rəqəmsal sonikatorları toxunma ekranı və ya brauzer nəzarəti ilə dəqiq idarə oluna bilər. Sonikasiya prosedurları intuitiv menyu vasitəsilə əvvəlcədən təyin edilə bilər. Ultrasəs cihazları avtomatik məlumat qeydi ilə təchiz edilmişdir (bütün sonikasiya prosesi məlumatları inteqrasiya olunmuş SD-Kartda saxlanılır). Ultrasonik enerji girişi hüceyrə izolyasiya protokoluna tam uyğunlaşdırıla bilər.
VialTweeter sonikatoru vahid və sürətli steril nümunə hazırlamaq üçün steril homojenizatordur.
Ədəbiyyat / İstinadlar
- Oberbauer, Eleni; Steffenhagen, Carolin; Wurzer, Christoph; Gabriel, Christian; Redl, Heinz; Wolbank, Susanne (2015): Enzymatic and non-enzymatic isolation systems for adipose tissue-derived cells: current state of the art. Cell Regeneration (2015) 4:7.
- Stadlmann, J., Taubenschmid, J., Wenzel, D. et al. (2017): Comparative glycoproteomics of stem cells identifies new players in ricin toxicity. Nature 549, 2017. 538–542
- Haghjoo M., Azarbayjani M.A., Peeri M., Hosseini S.A. (2019): Effect of Training, Hyaluronic Acid, and Mesenchymal Stem Cell Therapies on Osteocalcin Gene Expression in Cartilage Tissue of Rats with Knee Osteoarthritis. Gene Cell Tissue 6, 2019.
- Zhu M., Kong D., Tian R., Pang M. , Mo M., Cheng, Y., Yang G., Cheng H.L., Lei X., Fang K., Cheng B., Wu Y. (2020): Platelet sonicates activate hair follicle stem cells and mediate enhanced hair follicle regeneration. Journal of Cellular and Molecular Medicine 24, 2020. 1786–1794.
Bilməyə Dəyər Faktlar
Kök Hüceyrələr nədir?
Kök hüceyrələr eyni tipdən qeyri-müəyyən müddətə daha çox hüceyrə istehsal etmək qabiliyyətinə malik çoxhüceyrəli orqanizmin fərqlənməmiş hüceyrələridir. Onlar həyat və böyümənin erkən dövründə bədəndə bir çox fərqli hüceyrə tipinə çevrilmək üçün əla potensialla xarakterizə olunur. Kök hüceyrələrin ən fərqləndirici xüsusiyyəti onların hüceyrə bölünməsi yolu ilə özünü yeniləmək və xüsusi funksiyaları olan toxuma və ya orqanlara xas hüceyrələrə çevrilmə qabiliyyətidir. Pluripotent kök hüceyrələr üç germ hüceyrəsindən hər hansı birinə diferensiallaşma potensialına malikdir: endoderma (mədə daxili selikli qişa, mədə-bağırsaq traktı, ağciyərlər), mezoderma (əzələ, sümük, qan, sidik-cinsiyyət orqanları) və ya ektoderma (epidermal toxumalar və sinir sistemi).
Bağırsaq və sümük iliyi kimi bəzi orqanlarda kök hüceyrələr köhnəlmiş və ya zədələnmiş toxumaları bərpa etmək və əvəz etmək üçün müntəzəm olaraq bölünür. Mədəaltı vəzi və ürək kimi digər orqanlarda kök hüceyrələr yalnız xüsusi şəraitdə bölünür.
Regenerativ və estetik tibbdə müxtəlif terapevtik tətbiqlər üçün yüksək potensial təklif edən mezenximal stromal/kök hüceyrələr (MSC) əsasən sümük iliyində olur, lakin onlar digər toxumalardan (məsələn, qığırdaq, yağ, əzələ hüceyrələri), da. Mezenximal kök hüceyrələr, özünü yeniləmə qabiliyyəti ilə xarakterizə olunan prototip yetkin kök hüceyrələr hesab olunur.
Kök hüceyrə tədqiqatı və müalicəsi transplantasiya məqsədləri üçün toxuma və orqanların yetişdirilməsi üçün istifadə olunur (toxuma mühəndisliyi). Kök hüceyrələrin tətbiqi üçün digər tibbi sahələr beyin xəstəliklərinin (məsələn, Parkinson və Alzheimer xəstəliyi), hüceyrə çatışmazlığı terapiyası, qan xəstəlikləri (məsələn, leykemiya), oynaq və qığırdaq degenerasiyası (məsələn, osteoartrit) və həmçinin kosmetik müalicələrdə tapıla bilər. (məsələn, yaşlanma əleyhinə müalicələr). Ümumiyyətlə, kök hüceyrələrin ölçüsü təqribən. 15-25 mikron diametrdə.
mezenximal kök hüceyrələr (MSC) osteoblastlar (sümük hüceyrələri), xondrositlər (qığırdaq hüceyrələri), miyositlər (əzələ hüceyrələri) və adipositlər (yağ hüceyrələri) daxil olmaqla, müxtəlif hüceyrə növlərinə differensasiya etmək qabiliyyətinə malik olan multipotent stromal hüceyrələrdir.
Stromal Vaskulyar Fraksiya (SVF) nədir?
Stromal Damar Fraksiyası (SVF) insan bədənindəki piy toxumasından liposaksiya yolu ilə çıxarıla bilən lipoaspiratın tərkib hissəsidir. Lipoaspirat hüceyrələrin heterojen qarışığından ibarətdir və sümük iliyinin kök hüceyrələri ilə oxşarlıqlar göstərən, məsələn, çoxnəsilli hüceyrələrə differensiasiya qabiliyyətini göstərən piydən əldə edilən kök hüceyrələr (ASC və ya ADSC) kimi tanınan kök hüceyrələrin yüksək tərkibinə malikdir.
Stromal damar fraksiyasının heterojen populyasiyasına endotel hüceyrələri, eritrositlər, fibroblastlar, limfositlər, monositlər/makrofaqlar və perisitlər, həmçinin piydən qaynaqlanan kök hüceyrələrin mühüm bir hissəsi daxildir.
Piydən törəmə stromal/kök hüceyrələr (ASC) nədir?
Piydən əldə edilən stromal/kök hüceyrələr (ASC / ADSC) epidermal böyümə faktoru (EGF), damar endotelinin böyümə faktoru (VEGF), əsas fibroblast böyümə faktoru (bFGF), keratinosit böyümə faktoru (KGF) kimi yüksək səviyyədə bioaktiv böyümə faktorları buraxır. , trombositdən əldə edilən böyümə faktoru (PDGF), hepatosit böyümə faktoru (HGF), transformasiya edən böyümə faktoru-beta (TGF-β), insulin böyümə faktoru (IGF) və beyindən əldə edilən neyrotrofik amil (BDNF). ACS təkcə böyümə faktorlarını buraxmır, həm də fms ilə əlaqəli tirozin kinaz 3 (Flt-3) liqand, qranulosit-koloniya stimullaşdırıcı amil (G-CSF), qranulosit makrofaq-koloniya stimullaşdırıcı amil (GM-CSF), makrofaq daxil olmaqla sitokinlər ifraz edir. -koloniya stimullaşdırıcı amil (M-CSF), IL-6, IL-7, IL-8, IL-11 və IL-12 kimi interleykin (IL), leykemiya inhibitor faktor (LIF) və şiş nekrozu faktoru-alfa (TNF-α).
Kök hüceyrə necə çıxarılır?
İnsanlardan otoloji yetkin kök hüceyrələri aşağıdakı mənbələrdən əldə edilə bilər:
- Yığım yolu ilə çıxarılmasını tələb edən sümük iliyi, yəni sümüyə qazma.
- Liposuction ilə ekstraksiya tələb edən yağ toxuması (lipid hüceyrələri).
- Aferez yolu ilə çıxarılması tələb olunan qan, burada donordan gələn qan a “dializ” digər qan komponentlərinin donora qaytarılarkən kök hüceyrələrin çıxarıldığı maşın.