Staphylococcus Biofilm Becərilməsi və Ayrılması Protokolu

Etibarlı tədqiqat nəticələri üçün standart üsullar vacibdir. Burada stafilokok biofilmlərinin becərilməsi və ayrılması protokolunu tapa bilərsiniz. Bu protokol, 96 quyu boşqablarında səmərəli, yüksək məhsuldarlıqlı biofilmin ayrılması üçün UIP400MTP çox quyulu boşqab sonikatorundan istifadə edərək sadələşdirilmiş yüksək məhsuldarlıqlı nümunənin hazırlanmasına diqqət yetirir. Protokol həmçinin biofilmin becərilməsi, yuyulması və vizuallaşdırılması üçün əsas addımları ehtiva edir, burada dəyişkənliyin minimuma endirilməsi və təkrar istehsalın təmin edilməsinə diqqət yetirilir.

Staphylococcus Biofilm və Antibiotik Tədqiqatı

Stafilokokların biofilmləri antibiotiklərə qarşı müqaviməti və immun reaksiyalarına görə davamlı infeksiyalarda mühüm rol oynayır. Biofilmin əmələ gəlməsi bakteriyalar üçün qoruyucu mühit yaradır və infeksiyaların müalicəsini çətinləşdirir. Biofilmlər üzərində aparılan tədqiqatlar tez-tez eksperimental iş axınlarını asanlaşdırmaq üçün yüksək məhsuldarlıq metodlarına diqqət yetirməklə, onların əmələ gəlməsini, davranışını və antimikroblara qarşı həssaslığını anlamağa yönəldir.
UIP400MTP çox quyulu boşqab sonikatoru 96 quyulu lövhələrdən biofilmlərin sürətli və səmərəli şəkildə ayrılmasını təmin etməklə biofilm tədqiqatında mühüm üstünlük təklif edir. Bu cihaz dəyişkənliyi minimuma endirməklə bərabər ardıcıl nəticələr təmin etməklə bütün quyuları vahid ultrasəs enerjisi ilə təmin edir.

Staphylococcus biofilm becərilməsi və ayrılması üçün Protokol

Aşağıda, stafilokok biofilminin becərilməsi və ayrılması prosesi ilə sizə addım-addım təlimat veririk. Nümunəvi analitik addım olaraq, kristal bənövşəyi rəngləmə ilə becərilmiş biokütlənin spektrofotometrik olaraq kəmiyyətini necə təyin edəcəyinizi sizə göstəririk.

Staphylococcus Biofilm-in yetişdirilməsi

Tələb olunan materiallar:

• Steril düz dibli 96 quyu polistirol toxuma kulturası ilə işlənmiş qapaqlı mikrotitr lövhələr
• 0,25% qlükoza ilə Triptik Soya Bulyonu (TSB).
• Bioloji təhlükəsizlik şkafı

Addımlar:

1. Çirklənməni minimuma endirmək üçün bioloji təhlükəsizlik kabinetində steril iş mühiti hazırlayın.
2. Mikrotitr boşqab quyularına 0,25% qlükoza olan TSB əlavə edin. Qlükozasız TSB ümumiyyətlə biofilmin əmələ gəlməsini dəstəkləmir və yalnız tələb olunarsa nəzarət kimi istifadə edilməlidir.
3. Quyuları aşağıda göstərildiyi kimi hazırlanmış bakteriya ştammları ilə aşılayın:
4. Süspansiyonları sonikasiyadan istifadə edərək homogenləşdirməklə və ya 23-qabar iynə və qısa vortekslə çoxluqları parçalamaqla əvvəlcədən mövcud olan hüceyrə qruplarının olmamasından əmin olun.
5. Plitəni qapağı ilə bağlayın və biofilmin əmələ gəlməsi üçün optimal şəraitdə (məsələn, 24 saat ərzində 37°C) inkubasiya edin.
6. Etibarlılığı təmin etmək üçün hər bir bakteriya ştammı (hər bir ştam üçün üç quyu) üçün eksperimenti üç nüsxədə həyata keçirin.
7. Mənfi nəzarət üçün boşqab başına altı quyu ayırın. 96 quyulu boşqab üçün 30-a qədər ştamm sınaqdan keçirilə bilər.

Biofilmin vizuallaşdırılması və yuyulması

1. İnkubasiyadan sonra biofilmi pozmamaq üçün mühiti diqqətlə atın.
2. Planktonik bakteriyaları çıxarmaq üçün hər quyu dörd dəfə fizioloji salin ilə yuyulur.
3. Quyuların dibini biofilmin mövcudluğunu göstərən ağ ləkələr üçün yoxlayın.

Çox Quyu Plitə Sonicatoru UIP400MTP istifadə edərək Biofilm Dekolmanı

Cihazın qurulması və parametrləri:

• UIP400MTP çox quyulu boşqab sonikatoru
• Əməliyyat parametrləri: 60% amplituda, 60 saniyə ON / 30 saniyə OFF ilə dövr rejimi

Addımlar:

1. Yuyulmuş mikrotitr boşqabını UIP400MTP platformasına qoyun.
2. Nümunələri tövsiyə olunan parametrlərdə sonikləşdirin (60% amplituda, 60 saniyə ON, 30 saniyə OFF). Parametrləri bakteriya gərginliyinə uyğunlaşdırın.
3. Biofilmi ayırmaq üçün sonikasiya prosesinə başlayın. Ultrasəs dalğaları biofilm matrisini pozaraq yapışan bakteriyaları buraxır.
4. UIP400MTP ardıcıl ayırma nəticələri üçün bütün quyularda vahid ekspozisiyanı təmin edir.

Analitik addım: Kristal Bənövşəyi (CV) istifadə edərək ayrılmış Staphylococcus Biofilm Biokütləsinin Kəmiyyətinin Təsdiqlənməsi

Tələb olunan materiallar:

• 0.1% kristal bənövşəyi (CV) məhlulu
• 95% etanol və ya 30% sirkə turşusu (həll etmək üçün)
• 570 nm-də oxuya bilən mikroplata oxuyucusu
• Boyanma üçün steril mikrotitr lövhələr

Addımlar:

1. Boyanma Plitəsinin Hazırlanması: 100 µL ayrılmış biofilm suspenziyasını sonikasiya edilmiş lövhənin hər quyusundan təmiz, steril 96 quyu mikrotitr plitəsinin müvafiq quyularına köçürün. Bu, ləkə üçün aydın və vahid mühit təmin edir.
2. Ayrılmış biofilmin rənglənməsi: Tərkibində ayrılmış biofilm asqısı olan hər quyuya 150 µL 0,1% kristal bənövşəyi məhlul əlavə edin. Biofilm süspansiyonunun və kristal bənövşəyin bərabər qarışmasını təmin etmək üçün yumşaq bir şəkildə pipetka ilə çəkin.
3. İnkubasiya: Kristal bənövşəyi biokütləni effektiv şəkildə ləkələmək üçün boşqabın otaq temperaturunda 15 dəqiqə inkubasiyasına icazə verin.
4. Yuma: İnkubasiyadan sonra, biokütləni pozmadan kristal bənövşəyi məhlulu ehtiyatla quyulardan atın. Bağlanmamış ləkəni çıxarmaq üçün hər quyunu üç dəfə steril fizioloji salin ilə yuyun.
5. Qurutma: boşqabın otaq temperaturunda və ya steril hava axınının başlığı altında qurumasına icazə verin. Isıtmadan çəkinin, çünki bu, nəticələri dəyişə bilər.
6. Solubilizasiya: Bağlanmış kristal bənövşəyi həll etmək üçün hər bir quyuya 200 µL 95% etanol (və ya standart laboratoriya təcrübələrindən asılı olaraq 30% sirkə turşusu) əlavə edin. Otaq temperaturunda 10 dəqiqə ərzində plitəni pipetlə və ya silkələməklə yumşaq qarışdırın.
7. Ölçmə: Mikroplitə oxuyucusu ilə 570 nm-də həll olunan kristal bənövşəyi məhlulun optik sıxlığını (OD) ölçün.
8. Məlumatların Təhlili: Mənfi nəzarət vasitələrinin (TSB olan, lakin bakteriya inokulumu olmayan quyular) orta OD570 dəyərini eksperimental quyulardan fon rəngini nəzərə almaq üçün çıxarın. Məlumatları qeyd edin və təhlil edin.

Qeyd: Təkrarlanmağı təmin etmək üçün hər bir şərt üçün eksperimenti üç nüsxədə həyata keçirin. Kristal bənövşəyi və etanolun düzgün idarə olunmasını, təhlükəsizlik və utilizasiya protokollarına riayət edilməsini təmin edin.
 

Bir baxışda UIP400MTP-nin əsas üstünlükləri:

• Yüksək məhsuldarlıqlı emal: Xüsusilə çox quyulu lövhələr üçün nəzərdə tutulmuşdur, eyni zamanda birdən çox nümunəni emal etməyə imkan verir.
• Vahid ultrasəs paylanması: Quyular arasında bərabər ultrasəs intensivliyini təmin edir, bütün nümunələrdə ardıcıl nəticələr verir.
• İstənilən standart lövhədən istifadə edin: UIP400MTP istənilən standart çoxqulu lövhələri, Petri qablarını və boru rəflərini idarə edə bilər. Heç bir bahalı mülkiyyət plitələrinə ehtiyac yoxdur!
• İstifadəçi dostu interfeys: Quraşdırmaq və idarə etmək asandır, bu onu laboratoriya məhsuldarlığını artırmaq üçün əla vasitədir. Proqramlaşdırıla bilən parametrlər və avtomatlaşdırma prosesin standartlaşdırılmasını asanlaşdırır!