96 quyu Plitə Sonicator UIP400MTP istifadə edərək MBEC Təhlil Protokolu
MBEC analizi dirək qapaqlarında əmələ gələn biofilmləri aradan qaldırmaq üçün lazım olan antimikrob agentlərin konsentrasiyasını müəyyən etmək üçün istifadə olunur. Biofilmin canlılığını qiymətləndirmək üçün əvvəlcə biofilmlər 96 quyu boşqabın qapaqlarından ayrılmalıdır. Sonikasiya bu dəstə üçün ən etibarlı və effektiv üsuldur. Çox quyulu boşqab sonikatoru UIP400MTP, yüksək məhsuldarlıqlı MBEC analizlərini tənzimləmək və sürətləndirmək, maksimum səmərəlilik və rahatlıqla analiz lövhələrini emal etmək üçün xüsusi olaraq hazırlanmışdır.
Biofilm Dekolmanı üçün sonikasiya
Sonication Minimum Biofilm Eradikasiya Konsentrasiyası (MBEC) analizlərində həlledici addımdır və biofilm hüceyrələrinin səthi birləşməsindən effektiv şəkildə çıxarılmasına imkan verir. Biofilmlər hüceyrədənkənar bir matrisdə əhatə olunmuş mikroorqanizmlərin təbii olaraq strukturlaşdırılmış icmalarıdır ki, bu da onları planktonik hüceyrələrlə müqayisədə antimikrob agentlərə qarşı əhəmiyyətli dərəcədə daha davamlı edir. MBEC analizləri zamanı sonikasiya idarə olunan kavitasiya yaratmaq üçün ultrasəs dalğalarından istifadə edir, biofilm matrisini pozur və daxili hüceyrələri asma halına salır. Bu addım biofilm hüceyrələrinin bərpa mühitində bərabər şəkildə yayılmasını təmin edir, örtük, seyreltmə və ya spektrofotometrik üsullarla dəqiq canlılıq qiymətləndirmələrini asanlaşdırır. Müvafiq biofilm ayrılması olmadan, qalıq matris komponentləri hüceyrələri qoruya bilər ki, bu da antimikrobiyal effektivliyin düzgün qiymətləndirilməməsinə səbəb olur. Buna görə də, sonikasiya sınaqdan keçmiş agentlərin həqiqi eradikasiya potensialını əks etdirən etibarlı və təkrarlana bilən MBEC dəyərlərini əldə etmək üçün əvəzolunmazdır. Çox quyulu boşqab sonikatoru UIP400MTP, analiz plitələrində asan yüksək məhsuldarlıqlı nümunə hazırlamağa imkan verir.
Çox quyulu boşqab sonikatoru UIP400MTP analiz lövhələrində yüksək məhsuldarlıqlı nümunənin hazırlanmasını asanlaşdırır.
Minimum Biofilm Eradikasiya Konsentrasiyası (MBEC) Təhlil Protokolu
Addım 1: Biofilmin formalaşması
- Bakterial süspansiyonu hazırlayın:
Log-fazlı artım üçün müvafiq mühitdə bakteriyalar yetişdirin.
Müəyyən edilmiş optik sıxlığa (məsələn, OD600 ~ 0,1) bakterial mədəniyyəti seyreltin. - 96 quyu boşqabını aşılayın:
Standart 96 gözlü mikrotitr plitəsinin hər quyusuna bakterial suspenziyanı (məsələn, 150-200 µL) əlavə edin. - Qapağı bağlayın:
Mıx səthlərində biofilmin əmələ gəlməsinə imkan vermək üçün dirək qapağını aşılanmış boşqabın üzərinə qoyun. - Plitəni inkubasiya edin:
Biofilmin böyüməsini təşviq etmək üçün 24-48 saat ərzində silkələnmədən quraşdırmanı müvafiq temperaturda (məsələn, 37°C) inkubasiya edin.
Addım 2: Antimikrobiyal agentlərlə müalicə
- Antimikrobiyal məhlulları hazırlayın:
Təzə mühitdə bir sıra antimikrob konsentrasiyaları hazırlayın.
Biofilmləri antimikrobiyal agentlərə məruz qoyun:
Bakteriya mədəniyyətindən dirək qapağını çıxarın və planktonik hüceyrələri çıxarmaq üçün steril salin və ya PBS ilə yuyun.
Qapağı antimikrob məhlulları olan yeni 96 quyu boşqaba yerləşdirin. - Plitəni inkubasiya edin:
Antimikrobiyal təsirə imkan vermək üçün müəyyən müddətə (məsələn, 24 saat) inkubasiya edin.
Çox quyulu boşqab sonikatoru UIP400MTP yüksək məhsuldarlıqlı nümunənin hazırlanması üçün
Addım 3: 96 Quyu Plitəli Sonicator UIP400MTP ilə sonikasiya
Sonikasiya mərhələsi canlılığı qiymətləndirmək üçün biofilmləri dirək qapaqlarından ayırmaq üçün vacibdir. UIP400MTP sonikatoru üçün bu addımları yerinə yetirin:
- Quraşdırmanı hazırlayın:
Təzə 96 quyu boşqabını hər quyuya bərpa mühiti (məsələn, neytrallaşdırıcı bulyon və ya təzə böyümə mühiti) ilə doldurun. - Çubuğun qapağını köçürün:
Antimikrobiyal müalicə lövhəsindən dirək qapağını çıxarın.
Qalıq antimikrob agentləri çıxarmaq üçün qapağı steril salin və ya PBS ilə yuyun. - Plitəni və sonikatoru yerləşdirin:
Mıxın qapağını bərpa orta boşqabına yapışdırın.
Plitənin mərkəzdə və sabit olmasını təmin edərək, bərpa orta lövhəsini UIP400MTP sonikator platformasına qoyun. - Sonikasiya parametrlərini tənzimləyin:
UIP400MTP-də sonikasiya parametrlərini təyin edin (Parametrlər biofilmə uyğunlaşdırıla bilər):
Amplituda: 70-100%.
Sonikasiya vaxtı: sikl rejimində 1-3 dəqiqə (biofilmin möhkəmliyinə əsasən tənzimləyin). - Sonikasiya:
Sonikasiya prosesinə başlayın. Ultrasəs vibrasiyası biofilmləri dirək səthlərindən bərpa mühitinə çıxaracaq. - Prosesə nəzarət edin:
Quyularda nümunə temperaturuna nəzarət etmək üçün qoşula bilən temperatur sensorundan istifadə edin. UIP400MTP soyutma üçün laboratoriya soyuducuya qoşula bilər. - Post-Sonication İdarəetmə:
Dərhal aşağı axın analizi üçün bərpa mühitini (indi ayrılmış biofilmləri ehtiva edir) təzə steril boşqaba köçürün.
(A) Biofilmin əmələ gəlməsi, hüceyrələrin bərpası və
MİK və MBCB-nin təyini; (B) Stafilokok biofilmlərinin əmələ gəlməsi üçün sancaqlar olan qapaq. MİK və MBCB-nin təyini; (B) Stafilokok biofilmlərinin əmələ gəlməsi üçün sancaqlar olan qapaq.
Sancaqlar üzərində əmələ gələn biofilm hüceyrələri sonikasiya (Hielscher Ultrasəs Texnologiyası) ilə hüceyrələrin bərpası üçün təzə mədəniyyət mühiti olan 96 quyuluq boşqablarda 5 dəqiqə ərzində yerindən çıxarıldı.
(Şəkil və tədqiqat: ©de Oliveira et al., 2016)
Addım 4: Həyat qabiliyyətinin qiymətləndirilməsi
Plaka və kulturadan ayrılmış biofilmlər:
- Koloniya əmələ gətirən vahidləri (CFU) sadalamaq üçün aqar üzərinə bərpaedici mühit və boşqabın ardıcıl seyreltmələrini həyata keçirin.
Alternativ olaraq, kolorimetrik və ya flüoresan əsaslı canlılıq testindən istifadə edin. - Nəticələri qeyd edin:
MBEC-ni aşkar edilə bilən biofilmin canlılığını aradan qaldıran ən aşağı antimikrob konsentrasiyası kimi müəyyən edin.
Dizayn, İstehsalat və Konsaltinq – Keyfiyyətli Almaniya istehsalı
Hielscher ultrasəs cihazları ən yüksək keyfiyyət və dizayn standartları ilə tanınır. Sağlamlıq və asan əməliyyat ultrasəs aparatlarımızın sənaye obyektlərinə rahat inteqrasiyasına imkan verir. Kobud şərtlər və tələbkar mühitlər Hielscher sonicatorları tərəfindən asanlıqla idarə olunur.
Hielscher Ultrasonics, ISO sertifikatlı bir şirkətdir və ən müasir texnologiya və istifadəçi dostu olan yüksək performanslı ultrasəs cihazlarına xüsusi diqqət yetirir. Əlbəttə ki, Hielscher ultrasəs cihazları CE-yə uyğundur və UL, CSA və RoHs tələblərinə cavab verir.
96 quyu boşqablarda və analiz lövhələrində nümunənin hazırlanmasını sürətləndirin UIP400MTP çox quyulu boşqab sonikatorundan istifadə etməklə
Ədəbiyyat / İstinadlar
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Dreyer J., Ricci G., van den Berg J., Bhardwaj V., Funk J., Armstrong C., van Batenburg V., Sine C., VanInsberghe M.A., Marsman R., Mandemaker I.K., di Sanzo S., Costantini J., Manzo S.G., Biran A., Burny C., Völker-Albert M., Groth A., Spencer S.L., van Oudenaarden A., Mattiroli F. (2024): Acute multi-level response to defective de novo chromatin assembly in S-phase. Molecular Cell 2024.
- Mochizuki, Chika; Taketomi, Yoshitaka; Irie, Atsushi; Kano, Kuniyuki; Nagasaki, Yuki; Miki, Yoshimi; Ono, Takashi; Nishito, Yasumasa; Nakajima, Takahiro; Tomabechi, Yuri; Hanada, Kazuharu; Shirouzu, Mikako; Watanabe, Takashi; Hata, Kousuke; Izumi, Yoshihiro; Bamba, Takeshi; Chun, Jerold; Kudo, Kai; Kotani, Ai; Murakami, Makoto (2024): Secreted phospholipase PLA2G12A-driven lysophospholipid signaling via lipolytic modification of extracellular vesicles facilitates pathogenic Th17 differentiation. BioRxiv 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics. 2024.
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
- Microplate Sonicator Validated in Peer-Reviewed Proteomics Study
Tez-tez soruşulan suallar
MBEC Təhlili nədir?
Minimum Biofilm Eradikasiya Konsentrasiyası (MBEC) analizi biofilmlə əlaqəli bakteriyaların məhv edilməsi üçün tələb olunan antimikrob agentin ən aşağı konsentrasiyasını təyin etmək üçün istifadə edilən standartlaşdırılmış üsuldur. Bu, xüsusi səthlərdə biofilmlərin böyüməsini, onların müxtəlif antimikrob konsentrasiyalarına məruz qalmasını və müalicənin effektivliyini qiymətləndirmək üçün adətən sonikasiya vasitəsilə biofilmin pozulmasından sonra ayrılmış hüceyrələrin həyat qabiliyyətinin qiymətləndirilməsini əhatə edir.
MBIC və MBEC arasındakı fərq nədir?
Minimum Biofilmin İnhibisiya Konsentrasiyası (MBIC) biofilmin əmələ gəlməsinin qarşısını almaq üçün tələb olunan antimikrob agentin ən aşağı konsentrasiyasıdır, Minimum Biofilm Eradikasiya Konsentrasiyası (MBEC) isə müəyyən edilmiş biofilmin məhv edilməsi üçün lazım olan ən aşağı konsentrasiyadır. MBIC biofilmin qarşısının alınmasına diqqət yetirir, MBEC isə yetkin biofilmlərə qarşı müalicənin effektivliyini qiymətləndirir.
MBEC Təhlilləri üçün hansı Plitələr adətən istifadə olunur?
MBEC analizləri üçün adətən istifadə edilən mikrotiter plitələr adətən polistirol və ya polipropilendən hazırlanmış 96 quyulu lövhələrdir. Bu materiallar biofilmin formalaşması üçün uyğun bir səth təmin edir və analiz zamanı sınaqdan keçirilmiş antimikrob agentlərə kimyəvi cəhətdən davamlıdır. Polistirol plitələr, spektrofotometrik və ya flüoresan əsaslı ölçmələr kimi aşağı axın analizləri üçün əlverişli olan optik aydınlığına görə geniş şəkildə seçilir. Bu plitələrin dizaynına çıxarıla bilən dirək qapaqları daxildir ki, bunlar analiz üçün vacibdir, çünki biofilmlər böyümə mühiti olan quyulara batırılmış dirəklərdə əmələ gəlir. MBEC analiz protokoluna uyğun olanlar kimi standartlaşdırılmış lövhələr UIP400MTP sonikatoru və ya digər emal avadanlığı ilə reproduktivliyi və uyğunluğu təmin etmək üçün xüsusi olaraq hazırlanmışdır.
PEG-Qapaq Plitələr nədir?
PEG-qapaq plitələri, qapağın hər bir quyuya uzanan kiçik polietilen qlikol (PEG) dirəkləri və ya sancaqları ilə təchiz olunduğu xüsusi çox quyulu boşqab sistemləridir. Bu dirəklər, real biofilmin böyüməsini təqlid edərək, idarə olunan şəraitdə mikrob biofilminin formalaşması üçün bir səth təmin edir. Dizayn, quyularda böyümə mühiti və ya antimikrob agentləri olduğu halda, biofilmlərin dirəklərdə inkişaf etməsinə imkan verir, MBEC və MBIC analizlərində olduğu kimi müalicələrə biofilmin həssaslığının yüksək məhsuldarlıq testinə imkan verir.
Hielscher Ultrasonics yüksək performanslı ultrasəs homogenizatorları istehsal edir laboratoriya üçün sənaye ölçüsü.