96 yuvalı lövhə sonikatoru UIP400MTP ilə MBEC sınağı protokolu

MBEC sınağı çıxıntılı qapaqlarda əmələ gələn biofilmləri aradan qaldırmaq üçün lazım olan antimikrob maddə konsentrasiyasını müəyyən etmək məqsədilə istifadə olunur. Biofilmin canlılığını qiymətləndirmək üçün əvvəlcə biofilmlər 96 yuvalı lövhənin çıxıntılı qapaqlarından ayrılmalıdır. Ultrasəslə emal bu ayırma üçün ən etibarlı və səmərəli üsuldur. Çoxyuvalı lövhə sonikatoru UIP400MTP sınaq lövhələrini maksimum səmərəlilik və rahatlıqla emal etmək üçün xüsusi olaraq hazırlanıb və yüksək nümunə emalı məhsuldarlığı ilə aparılan MBEC sınaqlarını sadələşdirir və sürətləndirir.

Biofilmin ayrılması üçün ultrasəslə emal

Ultrasəslə emal biofilmin eradikasiyası üçün minimum konsentrasiya (MBEC) sınaqlarında mühüm mərhələdir və biofilm hüceyrələrinin yapışdıqları səthdən səmərəli şəkildə ayrılmasını təmin edir. Biofilmlər hüceyrəxarici matriks daxilində yerləşən, təbiətən strukturlaşmış mikroorqanizm birlikləridir; bu isə onları planktonik hüceyrələrlə müqayisədə antimikrob maddələrə əhəmiyyətli dərəcədə daha davamlı edir. MBEC sınaqları zamanı ultrasəslə emal ultrasəs dalğaları vasitəsilə idarə olunan kavitasiya yaradır, biofilm matriksini parçalayır və onun daxilindəki hüceyrələri suspenziyaya buraxır. Bu mərhələ biofilm hüceyrələrinin bərpa mühitində bərabər paylanmasını təmin edərək qidalı mühitə əkmə, durulaşdırma və ya spektrofotometrik üsullarla canlılığın dəqiq qiymətləndirilməsini asanlaşdırır. Biofilm lazımi qaydada ayrılmadıqda matriksin qalıq komponentləri hüceyrələri qoruya bilər və antimikrob təsirin effektivliyinin olduğundan aşağı qiymətləndirilməsinə səbəb ola bilər. Buna görə də ultrasəslə emal sınaqdan keçirilən maddələrin həqiqi eradikasiya potensialını əks etdirən etibarlı və təkrarlana bilən MBEC qiymətlərinin əldə edilməsi üçün əvəzolunmazdır. Çoxyuvalı lövhə sonikatoru UIP400MTP sınaq lövhələrində nümunələrin asanlıqla və yüksək məhsuldarlıqla hazırlanmasına imkan verir.

Biofilmin eradikasiyası üçün minimum konsentrasiya (MBEC) sınağı protokolu

Mərhələ 1: Biofilmin əmələ gəlməsi

1. Bakterial suspenziyanı hazırlayın:
   Bakteriyaları uyğun qidalı mühitlərdə loqarifmik böyümə fazasına qədər yetişdirin.
   Bakterial kulturanı müəyyən edilmiş optik sıxlığa qədər durulaşdırın (məsələn, OD600 ~0,1).
2. 96 yuvalı lövhəyə inokulyasiya edin:
   Standart 96 yuvalı mikrotitr lövhəsinin hər yuvasına bakterial suspenziya (məsələn, 150–200 µL) əlavə edin.
3. Çıxıntılı qapağı yerləşdirin:
   Çıxıntıların səthlərində biofilmin əmələ gəlməsi üçün çıxıntılı qapağı inokulyasiya edilmiş lövhənin üzərinə yerləşdirin.
4. Lövhəni inkubasiya edin:
   Biofilmin böyüməsini təşviq etmək üçün sistemi uyğun temperaturda (məsələn, 37°C) 24–48 saat çalxalamadan inkubasiya edin.

Mərhələ 2: Antimikrob maddələrlə emal

• Antimikrob məhlulları hazırlayın:
  Təzə qidalı mühitlərdə müxtəlif konsentrasiyalı antimikrob məhlullar hazırlayın.
  Biofilmləri antimikrob maddələrin təsirinə məruz qoyun:
  Çıxıntılı qapağı bakterial kulturadan çıxarın və planktonik hüceyrələri uzaqlaşdırmaq üçün steril fizioloji məhlulda və ya PBS-də yaxalayın.
  Çıxıntılı qapağı antimikrob məhlullar olan yeni 96 yuvalı lövhəyə yerləşdirin.
• Lövhəni inkubasiya edin:
  Antimikrob maddələrə məruz qalmanı təmin etmək üçün müəyyən edilmiş müddət ərzində (məsələn, 24 saat) inkubasiya edin.

Mərhələ 3: 96 yuvalı lövhə sonikatoru UIP400MTP ilə ultrasəslə emal

Ultrasəslə emal mərhələsi canlılığı qiymətləndirmək məqsədilə biofilmlərin çıxıntılı qapaqlardan ayrılması üçün həlledici əhəmiyyət daşıyır. UIP400MTP sonikatoru üçün bu addımları izləyin:

1. Sistemi hazırlayın:
   Yeni 96 yuvalı lövhənin hər yuvasını bərpa mühiti ilə (məsələn, neytrallaşdırıcı bulyon və ya təzə böyümə mühiti) doldurun.
2. Çıxıntılı qapağı köçürün:
   Çıxıntılı qapağı antimikrob emal lövhəsindən çıxarın.
   Qalıq antimikrob maddələri uzaqlaşdırmaq üçün çıxıntılı qapağı steril fizioloji məhlulda və ya PBS-də yaxalayın.
3. Lövhəni və sonikatoru yerləşdirin:
   Çıxıntılı qapağı bərpa mühiti olan lövhəyə yerləşdirin.
   Bərpa mühiti olan lövhəni UIP400MTP sonikatorunun platformasına yerləşdirin və lövhənin mərkəzdə və sabit olduğuna əmin olun.
4. Ultrasəslə emal parametrlərini tənzimləyin:
   UIP400MTP cihazında ultrasəslə emal parametrlərini təyin edin (Parametrlər biofilmə uyğun tənzimlənə bilər):
   Amplituda: 70–100%.
   Ultrasəslə emal müddəti: dövri rejimdə 1–3 dəqiqə (biofilmin davamlılığına uyğun tənzimləyin).
5. Ultrasəslə emal edin:
   Ultrasəslə emal prosesini başladın. Ultrasəs titrəyişləri biofilmləri çıxıntıların səthlərindən ayıraraq bərpa mühitinə keçirəcək.
6. Prosesi izləyin:
   Yuvalardakı nümunələrin temperaturunu izləmək üçün qoşula bilən temperatur sensorundan istifadə edin. Soyutma üçün UIP400MTP laboratoriya soyuducusuna qoşula bilər.
7. Ultrasəslə emaldan sonrakı əməliyyatlar:
   Bərpa mühitini (artıq ayrılmış biofilmləri ehtiva edir) sonrakı təhlil üçün dərhal yeni steril lövhəyə köçürün.

(A) Tərkibində 2% qlükoza əlavə edilmiş TSB olan, biofilmin əmələ gəlməsi, hüceyrələrin bərpası və
MIC və MBCB-nin təyini üçün istifadə edilən lövhə; (B) Stafilokok biofilmlərinin əmələ gəlməsi üçün çıxıntılı qapaq. MIC və MBCB-nin təyini; (B) Stafilokok biofilmlərinin əmələ gəlməsi üçün çıxıntılı qapaq.
Çıxıntılarda əmələ gəlmiş biofilm hüceyrələri hüceyrələrin bərpası üçün təzə kultura mühiti olan 96 yuvalı lövhələrdə 5 min müddətində ultrasəslə emal (Hielscher Ultrasound Technology) vasitəsilə ayrılmışdır.
(Şəkil və tədqiqat: ©de Oliveira et al., 2016)

Mərhələ 4: Canlılığın qiymətləndirilməsi

Ayrılmış biofilmləri qidalı mühitə əkin və yetişdirin:

1. Koloniya əmələ gətirən vahidləri (CFU) saymaq üçün bərpa mühitini ardıcıl olaraq durulaşdırın və aqar üzərinə əkin.
   Alternativ olaraq, kolorimetrik və ya flüoressensiyaya əsaslanan canlılıq sınağından istifadə edin.
2. Nəticələri qeydə alın:
   MBEC-ni biofilmin aşkar edilə bilən canlılığını aradan qaldıran ən aşağı antimikrob maddə konsentrasiyası kimi müəyyən edin.

Layihələndirmə, istehsal və məsləhət xidmətləri – Almaniya istehsalı keyfiyyət

Hielscher ultrasəs cihazları ən yüksək keyfiyyət və dizayn standartları ilə tanınır. Möhkəmlik və asan idarəetmə ultrasəs cihazlarımızın sənaye müəssisələrinə rahat inteqrasiyasına imkan verir. Hielscher sonikatorları sərt şəraitin və yüksək tələblər qoyan mühitlərin öhdəsindən asanlıqla gəlir.

Hielscher Ultrasonics ISO sertifikatlı şirkətdir və ən müasir texnologiyaya və istifadə rahatlığına malik yüksək məhsuldarlıqlı ultrasəs cihazlarına xüsusi diqqət yetirir. Əlbəttə, Hielscher ultrasəs cihazları CE tələblərinə uyğundur və UL, CSA və RoHs tələblərinə cavab verir.

MBEC sınağı vasitəsilə dezinfeksiyaedici maddələrin Pseudomonas aeruginosa biofilminə qarşı effektivliyini yoxlamaq üçün ASTM E2799 protokolu zamanı nümunə hazırlama mərhələsi kimi biofilmin ayrılmasında UIP400MTP cihazından necə istifadə edildiyini burada oxuyun.