Cell Scraping-i UIP400MTP Yüksək Ötürmə Sonicatoru ilə əvəz edin
Multi-omics analizi üçün çox quyulu lövhələrdən yapışan hüceyrə xətlərinin ayrılması və çıxarılması laboratoriyalarda gündəlik işdir. UIP400MTP çox quyulu boşqab sonikatorundan istifadə edərək yüksək məhsuldarlıqlı hüceyrə ayrılması, RNT, ümumi lipidlərin və ümumi qütb metabolitlərinin daha yüksək məhsuldarlığına səbəb olan əl ilə hüceyrə qırıntılarını əvəz edir. Yeni üsul Hielscher UIP400MTP sonikatorunu Beckman Coulter i7 maye ilə işləmə iş stansiyası ilə birləşdirir, RNT, metabolit və lipid çıxarılması üçün hüceyrələrin yüksək məhsuldarlıq, təkrarlanan və səmərəli işlənməsinə imkan verir. Təqdim olunan üsul, müxtəlif hüceyrə tipləri və eksperimental şəraitdə üstün təkrarlanma və məhsuldarlığa nail olmaqla ənənəvi əllə hüceyrə kazıma üsullarından üstündür.
Microplate Sonicator UIP400MTP ilə Hüceyrə Dekolmanını sadələşdirin
Yapışqan hüceyrə mədəniyyəti sistemləri toksikoloji və biotibbi tədqiqatlarda mühüm rol oynayır. Bu kontekstdə, Cruchley-Fuge et al. (2024) kimyəvi təhlükənin qiymətləndirilməsi üçün omik texnologiyalarından istifadəyə yönəlmiş PrecisionTox layihəsində əhəmiyyətli bir problemi həll etdi. Layihə müxtəlif kimyəvi maddələrlə işlənmiş minlərlə nümunənin yüksək məhsuldarlıqlı analizini nəzərdə tuturdu. Bu tələbi ödəmək üçün tədqiqatçılar UIP400MTP sonikatorunu maye xromatoqrafiya-kütləvi spektrometriya (LC-MS) analizi üçün müəyyən edilmiş ikifazalı ekstraksiya protokolları ilə birləşdirən avtomatlaşdırılmış iş axını hazırladılar. Onların tədqiqatı UIP400MTP Çox Quyu Plitə Sonikatorunun əl ilə qırıntı və digər ənənəvi üsullarla müqayisədə yapışan hüceyrələri ayırmaqda effektivliyini qiymətləndirir.
İstənilən standart mikroplatadan yapışan hüceyrə mədəniyyətlərinin ayrılması – UIP400MTP sonikatoru ilə yüksək məhsuldarlıqda
Multi-Omics-in sadələşdirilməsi: UIP400MTP ilə avtomatik yapışan hüceyrə çıxarılması
Birmingem Universitetindən Laura Cruchley-Fuge-nin tədqiqat qrupu üç insan hüceyrə xəttindən istifadə etdi: HepG2 (qaraciyər xərçəngi hüceyrələri), HepaRG (differensiallaşmış hepatositlərə bənzər hüceyrələr) və H295R (adrenal xərçəng hüceyrələri). Bu hüceyrələr 24 quyu və 96 quyu boşqablarda becərilmiş və aflatoksin B1 və forskolin kimi sınaq kimyəvi maddələrinə məruz qalmışdır.
Eksperimental Dizayn:
- Mərhələ 1: UIP400MTP sonikatorunun güc parametrlərinin optimallaşdırılması və əl ilə hüceyrə qırıntıları və səsli su vannaları ilə müqayisə. HepG2 hüceyrələri RNT, metabolit və lipidlərin bərpasını qiymətləndirmək üçün istifadə edilmişdir.
- Mərhələ 2: UIP400MTP-nin Beckman Coulter i7 sistemindən istifadə edərək ikifazalı hasilat iş axınına inteqrasiyası. Doğrulama HepaRG və H295R hüceyrələrindən istifadə edilməklə aparılmışdır.
Ekstraksiya iş prosesi: İş axını çox quyulu lövhələrdə kimyəvi təsirləri, UIP400MTP istifadə edərək hüceyrənin ayrılmasını və Bligh vasitəsilə ikifazalı çıxarılmasını əhatə edirdi. & Dyer (B&D) üsul. LC-MS analizi lipofil və qütb birləşmələri üçün Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 istifadə edərək həyata keçirilib. B&D metodu, lipidlərin miqdarının təyini üçün qızıl standartdır, metanol, xloroform və su ilə iki mərhələli ekstraksiyanı, sonra isə xloroform fazasında lipidlərin miqdarının təyin edilməsini nəzərdə tutur.
UIP400MTP mikroplate sonikatoru çox quyulu lövhələrdən və Petri qablarından yapışan hüceyrə xətlərinin ayrılmasını asanlaşdırır.
Nəticələr:
- Mərhələ 1: Optimal sonikasiya şərtləri 60% gücdə müəyyən edilmişdir.
UIP400MTP, əl ilə qırıntı və səs vannaları ilə müqayisədə müstəsna təkrarlanma qabiliyyəti ilə ən yüksək RNT bərpasını verdi.
Qütb metabolitlərinin bərpası üsullar arasında ardıcıl idi, lipidlərin bərpası isə UIP400MTP ilə xüsusilə üstün idi. - Mərhələ 2: HepaRG və H295R hüceyrələrinin yoxlanılması, sıx qruplaşdırılmış PCA balları ilə göstərildiyi kimi, lipidomika və metabolomika məlumatlarında yüksək təkrarlanma qabiliyyətini nümayiş etdirdi.
Aflatoksin B1 və forskolin müalicələri metodun həssaslığını və etibarlılığını vurğulayaraq nəzarətdən effektiv şəkildə fərqləndirildi.
Mikroplitə sonikator UIP400MTP yüksək məhsuldarlıqlı hüceyrə ayrılması üçün
“Hielscher UIP400MTP sonication cihazı, RNT, ümumi lipidlər və ümumi qütb metabolitlərinin daha yüksək məhsuldarlığına səbəb olan əl ilə hüceyrə qırıntılarının "qızıl standartına" yüksək keyfiyyətli və təkrarlana bilən alternativ yanaşma təqdim edir.” (Cruchley-Fuge et al., 2024)
Cruchley-Fuge et al. yapışan hüceyrə emalı üçün UIP400MTP sonikatorunun üstünlüklərini vurğulayın. Əllə kazımağı əvəz etməklə, bu üsul təkrar istehsal qabiliyyətini, məhsuldarlığı və məhsuldarlığı artırır və onu PrecisionTox kimi genişmiqyaslı tədqiqatlar üçün əvəzolunmaz bir vasitə halına gətirir. UIP400MTP-nin avtomatlaşdırılmış iş axınlarına inteqrasiyası nəinki dəyişkənliyi azaldır, həm də əmək tutumlu prosesləri sadələşdirir, yüksək keyfiyyətli multi-omik məlumatların əldə edilməsinə imkan verir.
Cruchley-Fuge və başqalarının işi. (2024) multi-omik analiz üçün yapışan hüceyrə mədəniyyətlərinin işlənməsini asanlaşdırır və asanlaşdırır. UIP400MTP sonikatorunun avtomatlaşdırılmış iş axınları ilə inteqrasiyası nümunənin ardıcıl və səmərəli hazırlanmasını təmin edərək onu yüksək məhsuldarlıqlı toksikoloji tədqiqatlar üçün ideal hala gətirir.
UIP400MTP ultrasəs vannası deyil. Bu fokuslanmış sonikasiya üçün yüksək intensivlikli kubok buynuzudur. Bu güclü kontaktsız sonikator standart quyu boşqabınızın bütün quyularında vahid sonikasiya təmin edir. Siz amplituda, güc və impuls üzərində dəqiq nəzarətə sahibsiniz. Daxili taymer və temperatur zondu ardıcıl nəticələr təmin edir. UIP400MTP nömrəli sonikator nümunələri su hamamı ilə soyuyur (xarici soyuducu isteğe bağlıdır).
Dizayn, İstehsalat və Konsaltinq – Keyfiyyətli Almaniya istehsalı
Hielscher ultrasəs cihazları ən yüksək keyfiyyət və dizayn standartları ilə tanınır. Sağlamlıq və asan əməliyyat ultrasəs aparatlarımızın sənaye obyektlərinə rahat inteqrasiyasına imkan verir. Kobud şərtlər və tələbkar mühitlər Hielscher ultrasəs cihazları tərəfindən asanlıqla idarə olunur.
Hielscher Ultrasonics, ISO sertifikatlı bir şirkətdir və ən müasir texnologiya və istifadəçi dostu olan yüksək performanslı sonikatorlara xüsusi diqqət yetirir. Əlbəttə ki, Hielscher ultrasəs cihazları CE-yə uyğundur və UL, CSA və RoHs tələblərinə cavab verir.
Hüceyrə qırıntıları olmadan yüksək məhsuldarlıqlı hüceyrə ayrılması – UIP400MTP sonikatoru laboratoriya işini asanlaşdırır.
Ədəbiyyat / İstinadlar
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- Dreyer J., Ricci G., van den Berg J., Bhardwaj V., Funk J., Armstrong C., van Batenburg V., Sine C., VanInsberghe M.A., Marsman R., Mandemaker I.K., di Sanzo S., Costantini J., Manzo S.G., Biran A., Burny C., Völker-Albert M., Groth A., Spencer S.L., van Oudenaarden A., Mattiroli F. (2024): Acute multi-level response to defective de novo chromatin assembly in S-phase. Molecular Cell 2024.
- Mochizuki, Chika; Taketomi, Yoshitaka; Irie, Atsushi; Kano, Kuniyuki; Nagasaki, Yuki; Miki, Yoshimi; Ono, Takashi; Nishito, Yasumasa; Nakajima, Takahiro; Tomabechi, Yuri; Hanada, Kazuharu; Shirouzu, Mikako; Watanabe, Takashi; Hata, Kousuke; Izumi, Yoshihiro; Bamba, Takeshi; Chun, Jerold; Kudo, Kai; Kotani, Ai; Murakami, Makoto (2024): Secreted phospholipase PLA2G12A-driven lysophospholipid signaling via lipolytic modification of extracellular vesicles facilitates pathogenic Th17 differentiation. BioRxiv 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics. 2024.
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
Tez-tez soruşulan suallar
Hüceyrə Dekolmanı nədir?
Tədqiqatda hüceyrənin ayrılması bir mədəniyyət qabının və ya substratın səthindən yapışan hüceyrələrin ayrılması prosesinə aiddir. Bu, adətən analiz, subkulturasiya və ya kriokonservasiya kimi aşağı axın tətbiqləri üçün hüceyrələri toplamaq üçün edilir. Hüceyrə növündən və tədqiqat tələblərindən asılı olaraq enzimatik üsullardan (məsələn, tripsin), kimyəvi maddələrdən (məsələn, EDTA), mexaniki üsullardan (məsələn, kazıma) və ya sonikasiya kimi fiziki üsullardan istifadə etməklə ayrıla bilər.
Yapışqan hüceyrələri necə ayırmaq olar?
Sonikasiyadan istifadə edərək yapışan hüceyrələrin ayrılması nəzarət olunan bir mühitdə hüceyrə səthinin yapışmasını pozmaq üçün fokuslanmış ultrasəs dalğalarının tətbiqini əhatə edir. Xüsusilə, UIP400MTP mikroplitə sonikatoru hüceyrələr və mədəniyyət səthi arasındakı bağları pozan lokallaşdırılmış mexaniki vibrasiya yaratmaqla buna nail olur. Əsas addımlara aşağıdakılar daxildir:
- Hazırlanması: Hüceyrələr çox quyulu lövhələrdə yetişdirilir və eksperimental dizaynın bir hissəsi kimi xüsusi kimyəvi maddələrə məruz qala bilər.
- Sonikasiya: Sonicator UIP400MTP, hüceyrələrə zərər vermədən və ya biomolekulun bütövlüyünü pozmadan effektiv ayrılmağı təmin etmək üçün optimallaşdırılmış parametrlərlə (məsələn, 60% güc) proqramlaşdırılmışdır.
- Temperatur nəzarəti: Proses zamanı istilik səbəb olduğu hüceyrə və ya molekulyar deqradasiyanın qarşısını almaq üçün cihaz temperatur sabitliyini saxlayır.
- Ayrılmadan sonrakı: Ayrılan hüceyrələr Bligh kimi aşağı axın çıxarma protokollarına məruz qalır & RNT, lipidlər və metabolitlərin bərpası üçün ikifazalı Dyer üsulu.
Bu üsul avtomatlaşdırılmasına, təkrar istehsalına və yüksək məhsuldarlıqlı nümunələri səmərəli şəkildə emal etmək qabiliyyətinə görə əl ilə qırıntıdan üstündür.
Zərərsiz Hüceyrə Dekolmanı nədir?
Zərərsiz hüceyrə qopması hüceyrənin canlılığını, bütövlüyünü və ya funksionallığını pozmadan yapışan hüceyrələrin substratdan ayrılması prosesinə aiddir. Nəzarət olunan sonikasiya və ya fermentsiz məhlullar kimi yumşaq üsullardan istifadə etməklə əldə edilir.
Hüceyrələrin məhv edilməsinin qarşısını almaq hüceyrələri qorumaq üçün vacibdir’ multi-omik analiz, funksional analizlər və ya terapevtik istifadə kimi dəqiq aşağı axın tətbiqləri üçün vacib olan struktur və molekulyar xüsusiyyətlər. Zədələnmiş hüceyrələr hüceyrədaxili məzmunu buraxa bilər, potensial olaraq eksperimental nəticələri çaşdıra və ya nümunə keyfiyyətinə xələl gətirə bilər.
Fermentsiz Hüceyrə Dekolmanının Üstünlüyü Nədir?
Fermentsiz hüceyrə ayrılması bir sıra üstünlüklər təklif edir, o cümlədən hüceyrə səthi zülallarını və reseptorlarını qorumaq, hüceyrənin canlılığını qorumaq və biomolekullara potensial enzimatik zərərin qarşısını almaq. Bu yanaşma, fermentativ dəyişikliklərin məlumatların keyfiyyətinə və ya eksperimental nəticələrə xələl gətirə biləcəyi axın sitometriyası, proteomika və ya funksional analizlər kimi həssas aşağı axın tətbiqləri üçün xüsusilə faydalıdır. Bundan əlavə, fermentsiz üsullar tez-tez daha çox təkrarlanır və yüksək məhsuldarlıqlı iş axınları üçün uyğunlaşdırıla bilər.
Hielscher Ultrasonics yüksək performanslı ultrasəs homogenizatorları istehsal edir laboratoriya üçün sənaye ölçüsü.