Hüceyrələrin qaşınaraq ayrılmasını yüksək emal məhsuldarlığına malik UIP400MTP sonikatoru ilə əvəz edin
Multiomiks analizi üçün adheziv hüceyrə xətlərinin çoxyuvalı planşetlərdən ayrılması və ekstraksiyası laboratoriyalarda gündəlik görülən işdir. Çoxyuvalı planşet sonikatoru UIP400MTP ilə yüksək emal məhsuldarlığında hüceyrə ayrılması hüceyrələrin əl ilə qaşınaraq ayrılmasını əvəz edir və RNA, ümumi lipidlər və ümumi polyar metabolitlərin daha yüksək çıxımına gətirib çıxarır. Yeni üsul Hielscher UIP400MTP sonikatorunu Beckman Coulter i7 maye emalı iş stansiyası ilə birləşdirərək RNA, metabolit və lipid ekstraksiyası üçün hüceyrələrin yüksək emal məhsuldarlığı ilə, təkrarlana bilən və səmərəli şəkildə işlənməsini təmin edir. Təqdim olunan üsul müxtəlif hüceyrə növlərində və eksperimental şəraitlərdə daha üstün təkrarlanma qabiliyyəti və çıxım əldə etməklə hüceyrələrin əl ilə qaşınaraq ayrılmasının ənənəvi üsullarını üstələyir.
UIP400MTP mikroplanşet sonikatoru ilə hüceyrələrin ayrılmasını asanlaşdırın
Adheziv hüceyrə kulturası sistemləri toksikoloji və biotibbi tədqiqatlarda mühüm rol oynayır. Bu kontekstdə Cruchley-Fuge və həmmüəllifləri (2024) kimyəvi təhlükələrin qiymətləndirilməsi üçün omiks texnologiyalarından istifadəyə yönəlmiş PrecisionTox layihəsində əhəmiyyətli bir problemi həll etdilər. Layihə müxtəlif kimyəvi maddələrlə işlənmiş minlərlə nümunənin yüksək emal məhsuldarlığı ilə analizini hədəfləyirdi. Bu tələbatı qarşılamaq üçün tədqiqatçılar UIP400MTP sonikatorunu maye xromatoqrafiyası–kütlə spektrometriyası (LC-MS) analizi üçün müəyyənləşdirilmiş ikifazalı ekstraksiya protokolları ilə birləşdirən avtomatlaşdırılmış iş prosesi hazırladılar. Onların tədqiqatı adheziv hüceyrələrin ayrılmasında UIP400MTP çoxyuvalı planşet sonikatorunun effektivliyini əl ilə qaşıma və digər ənənəvi üsullarla müqayisədə qiymətləndirir.
Adheziv hüceyrə kulturalarının istənilən standart mikroplanşetdən ayrılması – UIP400MTP sonikatoru ilə yüksək emal məhsuldarlığında
Multiomiks proseslərinin asanlaşdırılması: UIP400MTP ilə adheziv hüceyrələrin avtomatlaşdırılmış ekstraksiyası
Birmingem Universitetindən Laura Cruchley-Fuge-nin tədqiqat qrupu üç insan hüceyrə xəttindən istifadə etdi: HepG2 (qaraciyər xərçəngi hüceyrələri), HepaRG (diferensiasiya olunmuş hepatositəbənzər hüceyrələr) və H295R (böyrəküstü vəzi xərçəngi hüceyrələri). Bu hüceyrələr 24-yuvalı və 96-yuvalı planşetlərdə yetişdirildi və aflatoksin B1 və forskolin kimi sınaq kimyəvi maddələrinin təsirinə məruz qoyuldu.
Eksperimentin planı:
- Mərhələ 1: UIP400MTP sonikatorunun güc parametrlərinin optimallaşdırılması və hüceyrələrin əl ilə qaşınaraq ayrılması və ultrasəs su vannaları ilə müqayisə. RNA, metabolit və lipidlərin çıxarılma dərəcəsini qiymətləndirmək üçün HepG2 hüceyrələrindən istifadə edildi.
- Mərhələ 2: Beckman Coulter i7 sistemindən istifadə etməklə UIP400MTP sonikatorunun ikifazalı ekstraksiya iş prosesinə inteqrasiyası. Validasiya HepaRG və H295R hüceyrələrindən istifadə etməklə aparıldı.
Ekstraksiya iş prosesi: İş prosesi çoxyuvalı planşetlərdə kimyəvi maddələrin təsirinə məruz qoymanı, UIP400MTP ilə hüceyrələrin ayrılmasını və Bligh & Dyer (B&D) üsulu ilə ikifazalı ekstraksiyanı əhatə edirdi. Lipofil və polyar birləşmələr üçün LC-MS analizi Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 cihazından istifadə etməklə aparıldı. Lipidlərin kəmiyyət təyini üçün qızıl standart olan B&D üsulu metanol, xloroform və su ilə iki mərhələli ekstraksiyanı, ardınca isə xloroform fazasında lipidlərin kəmiyyət təyinini nəzərdə tutur.
UIP400MTP mikroplanşet sonikatoru adheziv hüceyrə xətlərinin çoxyuvalı planşetlərdən və Petri qablarından ayrılmasını asanlaşdırır
Nəticələr:
- Mərhələ 1: Optimal sonikasiya şəraiti 60% gücdə müəyyən edildi.
UIP400MTP əl ilə qaşıma və ultrasəs vannaları ilə müqayisədə müstəsna təkrarlanma qabiliyyəti ilə RNA-nın ən yüksək çıxarılma dərəcəsini təmin etdi.
Polyar metabolitlərin çıxarılma dərəcəsi üsullar arasında uyğun idi, lipidlərin çıxarılma dərəcəsi isə UIP400MTP ilə nəzərəçarpacaq dərəcədə üstün idi. - Mərhələ 2: HepaRG və H295R hüceyrələri üzərində validasiya lipidomika və metabolomika məlumatlarının yüksək təkrarlanma qabiliyyətini göstərdi; bunu sıx qruplaşmış PCA göstəriciləri təsdiqlədi.
Aflatoksin B1 və forskolinlə işlənmiş nümunələr nəzarət nümunələrindən effektiv şəkildə fərqləndirildi və bu, üsulun həssaslığını və etibarlılığını vurğuladı.
UIP400MTP mikroplanşet sonikatoru hüceyrələrin yüksək emal məhsuldarlığı ilə ayrılması üçün
“Hielscher UIP400MTP sonikasiya cihazı hüceyrələrin əl ilə qaşınaraq ayrılmasının “qızıl standart”ına yüksək keyfiyyətli və təkrarlana bilən alternativ yanaşma təqdim edir və RNA, ümumi lipidlər və ümumi polyar metabolitlərin daha yüksək çıxımına gətirib çıxarır.” (Cruchley-Fuge və həmmüəllifləri, 2024)
Cruchley-Fuge və həmmüəllifləri adheziv hüceyrələrin işlənməsi üçün UIP400MTP sonikatorunun üstünlüklərini vurğulayırlar. Əl ilə qaşımanı əvəz etməklə bu üsul təkrarlanma qabiliyyətini, emal məhsuldarlığını və çıxımı artırır və onu PrecisionTox kimi genişmiqyaslı tədqiqatlar üçün əvəzsiz alətə çevirir. UIP400MTP sonikatorunun avtomatlaşdırılmış iş proseslərinə inteqrasiyası dəyişkənliyi azaltmaqla yanaşı, çox əmək tələb edən prosesləri də asanlaşdıraraq yüksək keyfiyyətli multiomiks məlumatlarının əldə edilməsini təmin edir.
Cruchley-Fuge və həmmüəlliflərinin (2024) işi multiomiks analizi üçün adheziv hüceyrə kulturalarının işlənməsini asanlaşdırır və daha səmərəli edir. UIP400MTP sonikatorunun avtomatlaşdırılmış iş prosesləri ilə inteqrasiyası nümunələrin sabit və səmərəli hazırlanmasını təmin edərək onu yüksək emal məhsuldarlığı tələb edən toksikoloji tədqiqatlar üçün ideal dərəcədə uyğun edir.
Layihələndirmə, istehsal və məsləhət xidmətləri – Almaniyada istehsal olunan keyfiyyət
Hielscher ultrasonikatorları ən yüksək keyfiyyət və layihələndirmə standartları ilə tanınır. Möhkəmlik və asan istismar ultrasonikatorlarımızın sənaye müəssisələrinə rahat inteqrasiyasına imkan verir. Hielscher ultrasonikatorları sərt şəraitdə və yüksək tələblər qoyan mühitlərdə asanlıqla işləyir.
Hielscher Ultrasonics ISO sertifikatlı şirkətdir və ən müasir texnologiya və istifadə rahatlığı ilə seçilən yüksək məhsuldarlıqlı sonikatorlara xüsusi diqqət yetirir. Əlbəttə, Hielscher ultrasonikatorları CE tələblərinə uyğundur və UL, CSA və RoHs tələblərinə cavab verir.
Hüceyrələri qaşımadan yüksək emal məhsuldarlığı ilə ayırma – UIP400MTP sonikatoru laboratoriya işini asanlaşdırır.
Ədəbiyyat / İstinadlar
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- Dreyer J., Ricci G., van den Berg J., Bhardwaj V., Funk J., Armstrong C., van Batenburg V., Sine C., VanInsberghe M.A., Marsman R., Mandemaker I.K., di Sanzo S., Costantini J., Manzo S.G., Biran A., Burny C., Völker-Albert M., Groth A., Spencer S.L., van Oudenaarden A., Mattiroli F. (2024): Acute multi-level response to defective de novo chromatin assembly in S-phase. Molecular Cell 2024.
- Mochizuki, Chika; Taketomi, Yoshitaka; Irie, Atsushi; Kano, Kuniyuki; Nagasaki, Yuki; Miki, Yoshimi; Ono, Takashi; Nishito, Yasumasa; Nakajima, Takahiro; Tomabechi, Yuri; Hanada, Kazuharu; Shirouzu, Mikako; Watanabe, Takashi; Hata, Kousuke; Izumi, Yoshihiro; Bamba, Takeshi; Chun, Jerold; Kudo, Kai; Kotani, Ai; Murakami, Makoto (2024): Secreted phospholipase PLA2G12A-driven lysophospholipid signaling via lipolytic modification of extracellular vesicles facilitates pathogenic Th17 differentiation. BioRxiv 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics. 2024.
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
Tez-tez verilən suallar
Hüceyrələrin ayrılması nədir?
Tədqiqatlarda hüceyrələrin ayrılması adheziv hüceyrələrin kultura qabının və ya substratın səthindən ayrılması prosesini bildirir. Bu, adətən analiz, subkultivasiya və ya kriokonservasiya kimi sonrakı tətbiqlər üçün hüceyrələri toplamaq məqsədilə həyata keçirilir. Hüceyrə növündən və tədqiqatın tələblərindən asılı olaraq ayrılma fermentativ üsullarla (məsələn, tripsin), kimyəvi reagentlərlə (məsələn, EDTA), mexaniki üsullarla (məsələn, qaşıma) və ya sonikasiya kimi fiziki üsullarla təmin edilə bilər.
Adheziv hüceyrələr necə ayrılır?
Sonikasiya ilə adheziv hüceyrələrin ayrılması nəzarət olunan mühitdə hüceyrə ilə səth arasındakı adheziyanı pozmaq üçün fokuslanmış ultrasəs dalğalarının tətbiqini nəzərdə tutur. Konkret olaraq, UIP400MTP mikroplanşet sonikatoru hüceyrələrlə kultura səthi arasındakı bağları qıran lokal mexaniki titrəyişlər yaradaraq bunu həyata keçirir. Əsas mərhələlərə aşağıdakılar daxildir:
- Hazırlıq: Hüceyrələr çoxyuvalı planşetlərdə yetişdirilir və eksperimentin planının bir hissəsi kimi müəyyən kimyəvi maddələrin təsirinə məruz qoyula bilər.
- Sonikasiya: UIP400MTP sonikatoru hüceyrələrə zərər vermədən və biomolekulların bütövlüyünü pozmadan effektiv ayrılmanı təmin etmək üçün optimallaşdırılmış parametrlərlə (məsələn, 60% güc) proqramlaşdırılır.
- Temperaturun idarə olunması: Cihaz proses zamanı istiliyin səbəb olduğu hüceyrə və ya molekul deqradasiyasının qarşısını almaq üçün temperaturun sabitliyini qoruyur.
- Ayrılmadan sonra: Ayrılmış hüceyrələrdən RNA, lipidlər və metabolitləri əldə etmək üçün onlara Bligh & Dyer ikifazalı üsulu kimi sonrakı ekstraksiya protokolları tətbiq olunur.
Bu üsul avtomatlaşdırılması, təkrarlanma qabiliyyəti və nümunələri yüksək emal məhsuldarlığı ilə səmərəli şəkildə işləmək imkanına görə əl ilə qaşımanı üstələyir.
Hüceyrələrin zədələnmədən ayrılması nədir?
Hüceyrələrin zədələnmədən ayrılması adheziv hüceyrələrin həyat qabiliyyətini, bütövlüyünü və ya funksionallığını pozmadan substratdan ayrılması prosesini bildirir. Bu, nəzarət olunan sonikasiya və ya fermentsiz məhlullar kimi yumşaq üsullarla həyata keçirilir.
Hüceyrələrin məhv olmasının qarşısını almaq onların struktur və molekulyar xüsusiyyətlərini qorumaq üçün həlledici əhəmiyyət daşıyır; bu xüsusiyyətlər multiomiks analizi, funksional sınaqlar və ya terapevtik istifadə kimi sonrakı tətbiqlərin dəqiqliyi üçün vacibdir. Zədələnmiş hüceyrələr hüceyrədaxili möhtəviyyatı xaric edə bilər və bu, eksperimental nəticələrin şərhini çətinləşdirə və ya nümunənin keyfiyyətini poza bilər.
Hüceyrələrin fermentsiz ayrılmasının üstünlüyü nədir?
Hüceyrələrin fermentsiz ayrılması hüceyrə səthi zülallarının və reseptorlarının qorunması, hüceyrələrin həyat qabiliyyətinin saxlanması və biomolekullara mümkün fermentativ zərərin qarşısının alınması daxil olmaqla bir sıra üstünlüklər təqdim edir. Bu yanaşma fermentativ dəyişikliklərin məlumatların keyfiyyətini və ya eksperimentin nəticələrini poza biləcəyi axın sitometriyası, proteomika və ya funksional sınaqlar kimi həssas sonrakı tətbiqlər üçün xüsusilə faydalıdır. Bundan əlavə, fermentsiz üsullar çox vaxt daha yaxşı təkrarlanma qabiliyyətinə malikdir və yüksək emal məhsuldarlığı tələb edən iş proseslərinə uyğunlaşdırıla bilər.
Hielscher Ultrasonics yüksək məhsuldarlıqlı ultrasəs homogenizatorlarını laboratoriya ölçüsündən başlayaraq sənaye ölçüsünədək istehsal edir.