ASTM E2799-22 Antimikrobiyal Qiymətləndirmə Protokolu

Hielscher UIP400MTP, ASTM E2799-22 protokolunda sonikasiya addımını asanlaşdırmaq üçün nəzərdə tutulmuş güclü və səmərəli çox quyulu plitə sonikatorudur. UIP400MTP bütün mikrotiter lövhəsi boyunca vahid ultrasəs enerjisini çatdırmaqla hüceyrələrə zərər vermədən və ya nümunənin bütövlüyünü pozmadan biofilmlərin dirək qapaqlarından ardıcıl və etibarlı şəkildə ayrılmasını təmin edir. Onun yüksək məhsuldarlıq qabiliyyəti və istifadəçi dostu işləməsi emal müddətini əhəmiyyətli dərəcədə azaldır, eyni zamanda təkrarlanma qabiliyyətini artırır, bu da onu biofilmin canlılıq testləri və antimikrob effektivlik testləri aparan laboratoriyalar üçün ideal həll yoluna çevirir.

ASTM E2799

ASTM E2799, xüsusilə Pseudomonas aeruginosa üzərində fokuslanaraq, antimikrob agentlərin biofilmlərə qarşı effektivliyini qiymətləndirmək üçün nəzərdə tutulmuş standartlaşdırılmış test üsuludur. Biofilmlər səthlərə yapışan və antimikrobiyal müalicələrə yüksək müqavimət göstərən mürəkkəb mikrob icmalarıdır ki, bu da onları səhiyyə, sənaye və ətraf mühit kontekstlərində mühüm problemə çevirir. Bu üsul real biofilm şəraitində dezinfeksiyaedici maddələrin sınaqdan keçirilməsi üçün etibarlı və təkrarlana bilən çərçivə təmin etmək üçün Minimum Biofilmin Silinmə Konsentrasiyası (MBEC) analizindən istifadə edir.

Sonication ASTM E2799-a necə kömək edir?

Sonication ASTM E2799 protokolunda biofilmlərin sınaq səthlərindən ayrılmasını asanlaşdırmaqla, müalicədən sonra mikrob canlılığının dəqiq qiymətləndirilməsini təmin etməklə mühüm rol oynayır. Nəzarət olunan ultrasəs enerjisindən istifadə edərək, protokol hüceyrələrə zərər vermədən səmərəli və ardıcıl biofilmin pozulmasına nail olur, dəqiq və təkrarlana bilən nəticələr verir. Bu, ASTM E2799-u biofilm tədqiqatını inkişaf etdirmək və effektiv antimikrobiyal strategiyalar hazırlamaq üçün vacib bir vasitə halına gətirir.

ASTM E2799-22-yə uyğun olaraq MBEC Təhlilini necə yerinə yetirmək olar

ASTM E2799-22 protokolu antimikrob agentlərin biofilmlərə qarşı effektivliyinin qiymətləndirilməsi üçün addımları təsvir edir. Hielscher UIP400MTP mikrotiter plitə sonikatorundan istifadə edərkən, protokol biofilmin ayrılması üçün bu qabaqcıl sonication metodunu daxil etmək üçün uyğunlaşdırıla bilər. Aşağıda UIP400MTP mikroplitə sonikatorundan istifadə etmək üçün hazırlanmış addımların təsviri verilmişdir:

1. Biofilmlərin hazırlanması
   Sökülə bilən qapaqları olan 96 quyulu steril mikrotitr boşqab hazırlayın.
   Quyuları uyğun inkişaf mühitində standartlaşdırılmış bakterial suspenziya ilə aşılayın.
   Mıxın qapağını boşqabın üzərinə qoyun, dirəklərin bakterial suspenziyaya tam batırılmasını təmin edin.
   Dirəklərdə biofilmin əmələ gəlməsinə imkan vermək üçün lövhəni idarə olunan şəraitdə (məsələn, temperatur və vaxt) inkubasiya edin.
2. Antimikrobiyal agentlərlə müalicə
   Biofilm əmələ gəldikdən sonra mühiti müxtəlif konsentrasiyalarda test antimikrob agentləri olan təzə mühitlə əvəz edin.
   Mıxın qapağını yenidən bağlayın və sınaq dizaynında göstərilən şərtlər altında inkubasiya edin.
3. Biofilm Dekolmanı üçün hazırlıq
   Müalicədən sonra qalıq antimikrob maddələri və boş yapışmış planktonik hüceyrələri çıxarmaq üçün qapağı steril yaxalama məhluluna batıraraq yaxalayın.
4. UIP400MTP Sonicator istifadə edərək Biofilm Dekolmanı
   Tərkibində bərpaedici mühit (məsələn, neytrallaşdırıcı bulyon) olan təzə 96 quyu mikrotitr boşqab hazırlayın.
   Bərpa mühiti boşqabının quyularına mıx qapağını qoyaraq biofilmləri ayırın.
   Qapağın və boşqabın düzgün düzülməsini təmin edərək, lövhəni UIP400MTP sonikatoruna daxil edin.
   Hüceyrə lizisi olmadan ardıcıl biofilmin ayrılmasını təmin etmək üçün sonikatoru 70%-80% amplituda təyin edin və tsikl rejimində 3-4 dəqiqə sonikasiya edin.
5. Biofilmin canlılığının qiymətləndirilməsi
   Sonikasiyadan sonra, standart mikrobioloji və ya analitik üsullardan istifadə edərək, ayrılmış biofilm hüceyrələri olan bərpa mühitini emal edin, məsələn:
   • Koloniya əmələ gətirən vahidin (CFU) sayları: Canlı hüceyrələrin siyahıya alınması üçün agarda seriyalı seyreltmələr və boşqab yerinə yetirin.
   • Optik sıxlığın (OD) ölçülməsi: Hüceyrə sıxlığını qiymətləndirmək üçün spektrofotometrik analizdən istifadə edin.
   • Floresensiya əsaslı canlılıq analizləri: Floresan boyalardan istifadə edərək canlı və ölü hüceyrələrin miqdarını müəyyənləşdirin.
6. məlumatların təhlili
   Antimikrob agentlərin effektivliyini müəyyən etmək üçün müalicə olunmuş və müalicə olunmamış biofilmlərin canlılıq məlumatlarını müqayisə edin.
   Canlı biofilm hüceyrələrini aradan qaldırmaq üçün tələb olunan konsentrasiyaya əsaslanaraq minimum biofilm eradikasiya konsentrasiyasını (MBEC) hesablayın.
7. keyfiyyətə nəzarət
   UIP400MTP-ni müntəzəm olaraq kalibrləmək və biofilmin ayrılması prosesinin əhəmiyyətli hüceyrə lizisi və ya məhvi ilə nəticələnmədiyini yoxlamaqla ardıcıl sonikasiya şərtlərini təmin edin.
   Nəticələri təsdiqləmək üçün təmizlənməmiş biofilmlər və yalnız orta ölçülü blanklar kimi müvafiq nəzarət vasitələri daxil edin.

Sancaqlar üzərində əmələ gələn biofilm hüceyrələri sonikasiya (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Almaniya, UIP250MTP) vasitəsilə hüceyrələrin bərpası üçün təzə mədəniyyət mühiti olan 96 quyuluq boşqablarda 5 dəqiqə ərzində yerindən çıxarıldı.
(Şəkil və tədqiqat: ©de Oliveira et al., 2016)

UIP400MTP-ni ASTM E2799-22 iş axınına inteqrasiya etməklə, biofilmin ayrılması prosesi ardıcıllıq, səmərəlilik və yüksək məhsuldarlıq tətbiqləri üçün optimallaşdırılır.