Antimikrob təsirin qiymətləndirilməsi üçün ASTM E2799-22 protokolu

Hielscher UIP400MTP ASTM E2799-22 protokolunda ultrasəslə emal mərhələsini asanlaşdırmaq üçün hazırlanmış güclü və səmərəli çoxyuvalı lövhə sonikatorudur. UIP400MTP bütün mikrotitr lövhəsinə bərabər paylanmış ultrasəs enerjisi ötürərək hüceyrələrə zərər vermədən və nümunənin bütövlüyünü pozmadan biofilmlərin çıxıntılı qapaqlardan ardıcıl və etibarlı şəkildə ayrılmasını təmin edir. Onun çoxsaylı nümunələri emal etmək qabiliyyəti və istifadəsinin rahatlığı emal müddətini əhəmiyyətli dərəcədə azaldır və nəticələrin təkrarlana bilməsini artırır. Bu xüsusiyyətlər onu biofilmlərin həyat qabiliyyətini və antimikrob vasitələrin effektivliyini sınaqdan keçirən laboratoriyalar üçün ideal həllə çevirir.

ASTM E2799

ASTM E2799 antimikrob vasitələrin biofilmlərə qarşı effektivliyini qiymətləndirmək üçün hazırlanmış, xüsusilə Pseudomonas aeruginosa üzərində cəmlənən standartlaşdırılmış sınaq üsuludur. Biofilmlər səthlərə yapışan və antimikrob təsirlərə qarşı yüksək davamlılıq göstərən mürəkkəb mikrob icmalarıdır. Bu xüsusiyyətlər onları səhiyyə, sənaye və ətraf mühit sahələrində ciddi problemə çevirir. Bu üsul real biofilm şəraitində dezinfeksiyaedici vasitələrin sınaqdan keçirilməsi üçün etibarlı və təkrarlana bilən çərçivə təmin etmək məqsədilə biofilmin eradikasiyası üçün minimum konsentrasiya (MBEC) sınağından istifadə edir.

Ultrasəslə emal ASTM E2799-a necə töhfə verir?

Ultrasəslə emal biofilmlərin sınaq səthlərindən ayrılmasını asanlaşdıraraq və təsirdən sonra mikrobların həyat qabiliyyətinin dəqiq qiymətləndirilməsini təmin edərək ASTM E2799 protokolunda mühüm rol oynayır. Nəzarət olunan ultrasəs enerjisindən istifadə etməklə protokol hüceyrələrə zərər vermədən biofilmin səmərəli və ardıcıl şəkildə parçalanmasını təmin edir, dəqiq və təkrarlana bilən nəticələrin əldə edilməsinə imkan yaradır. Bu, ASTM E2799-u biofilm tədqiqatlarının inkişaf etdirilməsi və effektiv antimikrob strategiyaların hazırlanması üçün zəruri vasitəyə çevirir.

MBEC sınağını ASTM E2799-22-yə uyğun necə aparmaq olar

ASTM E2799-22 protokolu antimikrob vasitələrin biofilmlərə qarşı effektivliyinin qiymətləndirilməsi üçün mərhələləri müəyyənləşdirir. Hielscher UIP400MTP mikrotitr lövhə sonikatorundan istifadə edildikdə protokol biofilmlərin ayrılması üçün bu qabaqcıl ultrasəslə emal üsulunu daxil etmək məqsədilə uyğunlaşdırıla bilər. Aşağıda UIP400MTP mikrolövhə sonikatorunun istifadəsinə uyğunlaşdırılmış mərhələlərin təsviri verilir:

1. Biofilmlərin hazırlanması
   Ayrıla bilən çıxıntılı qapağı olan steril 96 yuvalı mikrotitr lövhəsi hazırlayın.
   Yuvaları uyğun qidalı mühitdə standartlaşdırılmış bakterial suspenziya ilə inokulyasiya edin.
   Çıxıntılı qapağı lövhənin üzərinə qoyun və çıxıntıların bakterial suspenziyaya tamamilə batdığından əmin olun.
   Çıxıntılarda biofilmin əmələ gəlməsinə imkan vermək üçün lövhəni nəzarət olunan şəraitdə (məsələn, temperatur və müddət) inkubasiya edin.
2. Antimikrob vasitələrlə təsir
   Biofilm əmələ gəldikdən sonra mühiti müxtəlif konsentrasiyalarda sınaq antimikrob vasitələrini ehtiva edən təzə mühitlə əvəz edin.
   Çıxıntılı qapağı yenidən yerinə qoyun və sınaq dizaynında göstərilən şəraitdə inkubasiya edin.
3. Biofilmin ayrılmasına hazırlıq
   Təsirdən sonra qalıq antimikrob vasitələri və zəif yapışmış planktonik hüceyrələri uzaqlaşdırmaq üçün çıxıntılı qapağı steril yuma məhluluna batırmaqla yuyun.
4. UIP400MTP sonikatorundan istifadə etməklə biofilmin ayrılması
   Bərpa mühitini (məsələn, neytrallaşdırıcı bulyon) ehtiva edən təzə 96 yuvalı mikrotitr lövhəsi hazırlayın.
   Çıxıntılı qapağı bərpa mühiti olan lövhənin yuvalarına yerləşdirməklə biofilmləri ayırın.
   Lövhəni UIP400MTP sonikatoruna daxil edin və qapaqla lövhənin düzgün uyğunlaşdığından əmin olun.
   Hüceyrə lizisi olmadan biofilmin ardıcıl şəkildə ayrılmasını təmin etmək üçün sonikatoru 70%-80% amplitudaya quraşdırın və dövrü rejimdə 3-4 dəqiqə ərzində ultrasəslə emal edin.
5. Biofilmin həyat qabiliyyətinin qiymətləndirilməsi
   Ultrasəslə emaldan sonra ayrılmış biofilm hüceyrələrini ehtiva edən bərpa mühitini aşağıdakılar kimi standart mikrobioloji və ya analitik üsullarla emal edin:
   • Koloniya əmələ gətirən vahidlərin (CFU) sayılması: Ardıcıl durulaşdırmalar aparın və canlı hüceyrələrin sayılması üçün aqar üzərinə əkin.
   • Optik sıxlıq (OD) ölçmələri: Hüceyrə sıxlığını qiymətləndirmək üçün spektrofotometrik analizdən istifadə edin.
   • Flüoressensiyaya əsaslanan həyat qabiliyyəti sınaqları: Flüoressent boyalardan istifadə edərək canlı və ölü hüceyrələrin miqdarını müəyyən edin.
6. Məlumatların təhlili
   Antimikrob vasitələrin effektivliyini müəyyən etmək üçün təsirə məruz qalmış və qalmamış biofilmlərin həyat qabiliyyətinə dair məlumatları müqayisə edin.
   Canlı biofilm hüceyrələrini məhv etmək üçün tələb olunan konsentrasiyaya əsasən biofilmin eradikasiyası üçün minimum konsentrasiyanı (MBEC) hesablayın.
7. Keyfiyyətə nəzarət
   UIP400MTP sonikatorunu müntəzəm kalibrləməklə və biofilmin ayrılması prosesinin əhəmiyyətli hüceyrə lizisinə və ya məhvinə səbəb olmadığını yoxlamaqla ultrasəslə emal şəraitinin sabitliyini təmin edin.
   Nəticələri təsdiqləmək üçün təsirə məruz qalmamış biofilmlər və yalnız mühitdən ibarət boş nümunələr kimi müvafiq nəzarət nümunələrini daxil edin.

Çıxıntılarda əmələ gəlmiş biofilm hüceyrələri hüceyrələrin bərpası üçün təzə qidalı mühit olan 96 yuvalı lövhələrdə 5 dəqiqə ərzində ultrasəslə emal (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Germany, UIP250MTP) vasitəsilə ayrıldı.
(Şəkil və tədqiqat: ©de Oliveira et al., 2016)

UIP400MTP sonikatorunun ASTM E2799-22 iş prosesinə inteqrasiyası biofilmin ayrılması prosesini ardıcıllıq, səmərəlilik və çoxsaylı nümunələrin emalını tələb edən tətbiqlər baxımından optimallaşdırır.