Ultratovush Ildiz Tar İzolasyonu
- Ultrasonik kavitasyon, inson yog' to'qimasidan ildiz hujayralarini izolyatsiya qilish uchun juda samarali mexanik usul.
- Ultrasonik sifatida izolyatsiya qilingan stromal qon tomir fraksiyonu (SVF) tibbiy dasturlar uchun yuqori rejeneratif salohiyatga ega.
- Hielscher ultratovush tekshiruvi ildiz hujayralarini yig'ish uchun to'g'ridan-to'g'ri va bilvosita sonicationning turli variantlarini taklif etadi.
Ildiz hujayralarining ultratovush izolyatsiyasi
Inson tanasidan olingan yog'li to'qimalardan (liposaksiya orqali) ultrasonikatsiya orqali ildiz hujayralaridan va boshqa o'sish hujayralaridan to'qimalarni olib tashlash orqali davolanadi. Hujayralarning ajratilgan qismi stromal qon tomir fraktsiyasi hujayralari (SVF) deb ataladi.
Adipoz to'qimalardan ildiz hujayralarining ultratovush izolyatsiyasi usuli faqat ultratovush asosida olingan kavitatsiyaning ish printsipiga asoslangan, ya'ni mexanik kesish. Kavitatsion kesish kuchlari yog' to'qimasini buzadi, shuning uchun ildiz hujayralari yog 'to'qimalarining tarkibidan chiqariladi. Ultrasonik ildiz hujayra izolatsiyasi kolajenaz, tripsin yoki utilizatsiya qilishdan qochib, fermentsiz usul hisoblanadi.
Olingan ildiz hujayralarini, mezenximal ildiz hujayralarini, endotelial prekursorlarni va boshqa o'sish hujayralarining turlarini ajratish uchun sonikatsiyalangan yog' to'qimasi santrifüjlanadi.
Ajratilgan ildiz hujayralari otolog transplantatsiya qilish uchun darhol ishlatilmasdan oldin hujayra sonini, hayotiyligini, endotoksinni va grammatikani o'z ichiga olgan sifati bo'yicha to'planadi va tahlil qilinadi, yoki krio saqlashda saqlanadi.
Nima uchun fermentlardan saqlanish kerak?
Ildiz hujayra izolatsiyasi uchun fermentativ hazm qilish yuqori xarajat va mumkin bo'lgan xavfsizlikka bog'liq xatar bilan birga samaradorlik bilan birga kelganligi sababli [Oberbauer va boshq. 2015], ultratovush kavitatsiyasi kabi no-enzimatik izolyatsiya usullari afzallik beriladi. Ultrasonik izolyatsiya bosqichi hujayralarni va hujayra agregatlarini mexanik ravishda yog' to'qimasidan ajratib, fermentlar hazm qilish o'rnini bosadi.
GDmini2 UP200St-TD Transducer-da (200 vatt)
- tez
- samarali
- tekrarlanabilir
- xavfsiz
- Enzimsiz
- samarali xarajat
- Steril variantlar
Adipozadan olingan ildiz hujayralari
Ildiz hujayra chiqishi
1.67-2.24 × 10 ultrasonik kavitasyon rentabellikga bilan SVF izolyatsiya usuli chop etildi7 97.1–98.9% hayotiyligi bo'lgan hujayralar [Viktor, S., 2014]. Tarkibida 2–4 million hujayradan / gramm yog 'to'qimasidan hujayrali hosilalar tarqalib ketgan yog' to'qimasida etuk adipotsitlarning ultrasonik lizisi yordamida olingan (Bright va boshq., 2014).
Ultrasonik sifatida tayyorlangan hujayralar, standart enzimatik izolyatsiya usuli bilan solishtirganda, teng darajada yuqori adipojenik va osteojenik farqliliklar salohiyatiga ega [Oberbauer va boshq. 2015].
Ildizni hujayra izolatsiyasi uchun ultratovush tizimlari
Ilova ildiz hujayralarini davolashda aniq nazorat qilish imkonini beradigan ishonchli va yuqori sifatli ishonchli ultratovush uskunalarini ta'minlash uchun bemorlarni muvaffaqiyatli davolashning asosiy omili hisoblanadi. Hielscher ultratovush tekshiruvi avtomat ultrasonik kavitatsiyani ajratish jarayonining turli xil variantlarini taklif qiladi.
To'g'ridan-to'g'ri sonication
To'g'ridan-to'g'ri sonikatsiyalash orqali ildiz hujayrasini izolyatsiya qilish jarayoni uchun ultratovush shoxi (sonotrode, ultratovush uchi / prob) yog'ning yog 'to'qimalariga kiritiladi. Sonotrode orqali, ultratovush to'lqinlar to'g'ridan-to'g'ri otolog yog'ga ulanadi, shunda ultratovush kavitasyonu ildiz hujayralari va stromal hujayralarni qoldiq to'qimalardan chiqaradi. Hielscher ultrasonik protsessorlari Uf200 ः t va UP200St sonotrode S26d14 bilan autolog ildiz hujayralarini davolash uchun keng tarqalgan tizimlar ishlatiladi. To'g'ridan-to'g'ri sonikatsiyalash orqali SVFning izolatsiyasi asosan toza xonada foydalanish uchun javob beradi.
bilvosita sonikatsiya
Ildiz hujayralari autolog ilovalar uchun qo'llanilganligi sababli, jarayonning shafqatsizligi juda muhimdir. Shunday qilib, Hielscher kabi bilvosita sonication bir necha variantlar ishlab chiqardi GDmini2, VialTweeter va boshqa maxsus tizimlar. Bevosita sonikatsiya orqali ultratovush to'lqinlari devor qutisidan yog' to'qimalariga qo'shiladi. Stromal tomirlar fraktsiyasi (SVF) ultratovushli kavitatsiya bilan to'g'ridan-to'g'ri sonikatsiya paytida xuddi shu kabi yog 'to'qimasidan ajralib chiqadi.
Bilvosita sonikatsiya jarayoni hujayralarni yopiq idishda ishlov berish uchun afzalliklarni taqdim etadi ifloslanishsiz sharoitlar chunki ultratovush shoxni (sonotrode) kiritish orqali o'zaro kontaminatsiyalash xavfi yo'q qilinadi. Hujayra izolyatsiyasi steril jarayon sharoitlarini ta'minlaydigan yopiq tizimda amalga oshiriladi.
Hielscherning raqamli ultrasonik apparatlari sensorli displey yoki brauzer boshqaruvi orqali to'liq nazorat qilinishi mumkin. Sonikatsiya tartiblari intuitiv menyu orqali oldindan o'rnatilishi mumkin. Ultrasonik qurilmalar avtomatik ma'lumot yozish bilan jihozlangan (barcha sonikatsiya protseduralari ma'lumotlar SD-kartada saqlanadi). Ultrasonik quvvat manbai hujayra izolyatsiya protokoliga to'liq moslanishi mumkin.
Adabiyotlar / manbalar
- Oberbauer, Eleni; Steffenhagen, Kerolin; Wurzer, Christoph; Jabroil, nasroniy; Redl, Xaynts; Wolbank, Syuzanna (2015): Yog'li to'qimalardan olingan hujayralar uchun fermentativ va ferment bo'lmagan izolyatsiya tizimlari: hozirgi holati. Hujayralarni tiklash (2015) 4: 7.
Bilishingiz kerak bo'lgan dalillar
ildiz hujayralari
Ildiz hujayralari bir xil turdagi vaqtinchalik hujayralarni ishlab chiqarishga qodir bo'lgan juda ko'p hujayrali organizmning ajratilmagan xujayralari. Ular hayotning va rivojlanishning boshlang'ich davrida tanadagi turli xil hujayralar turlarini rivojlantirish uchun ajoyib salohiyatga ega. Ildiz hujayralarining eng ajralib turadigan xususiyati hujayra bo'linishi va ularning funktsiyalari bilan to'qima yoki organga xos hujayralarga aylanish qobiliyati bilan o'zlarini yangilash imkoniga ega. Pluripotent ildiz hujayralari endoderm (ichki oshqozon oshqozoni, oshqozon-ichak trakti, o'pka), mezoderm (mushak, suyak, qon, urogenital) yoki ektoderm (epidermal to'qimalar va asab tizimi) uchta hujayrali hujayradan ajralib chiqish potentsialiga ega.
Ba'zi a'zolarda, masalan, ichak va suyak iligi kabi, ildiz hujayralari muntazam ravishda yupqaroq yoki shikastlangan to'qimalarni ta'mirlash va almashtirish uchun bo'linadi. Boshqa organlarda, masalan, oshqozon osti bezi va yurak, ildiz hujayralari faqat maxsus sharoitlarda bo'linadi.
Rezenerativ va estetik tibbiyotda ko'plab terapevtik dasturlar uchun yuqori salohiyatga ega bo'lgan mezenkimal stromal / ildiz hujayralari (MSC) asosan suyak iligida joylashgan bo'lib, ular boshqa to'qimalardan (masalan, xaftaga, yog'da, mushak hujayralarida) xavfsiz holatga keltirilishi mumkin, ham. Mezenkimal ildiz hujayralari prototipik kattalar ildiz hujayralari sifatida qabul qilinadi, ular o'zlarining yangilanish imkoniyatlariga ega.
Ildizli hujayra tadqiqotlari va davolashlari to'qimalarni va organlarni transplantatsiya qilish uchun (to'qimalarni muhandislik) ishlab chiqarish uchun ishlatiladi. Ildiz hujayralarini qo'llash uchun boshqa tibbiyot joylari miya kasalligini (masalan, Parkinson va Altsgeymer kasalligi), hujayra etishmovchiligini davolashda, qon kasalliklarida (masalan, leykemiya), qo'shma va xaftaga nasli (masalan, osteoartrit) va kosmetik davolanishlarda (masalan, qarish uchun qarish davolanishi). Umuman olganda, ildiz hujayralari taxminan kattaligiga ega. 15-25 mikron diametrda.
Mezenkimal ildiz hujayralari (MKK) osteoblastlar (suyak xujayralari), kondrositlar (xaftaga xujayralari), miyosit (mushak xujayralari) va adipotsitlar (yog 'xujayralari), shu jumladan turli xil hujayra turlariga ajralib chiqish qobiliyatiga ega multipotent stromal hujayralardir.
Stromal qon tomir fraktsiyasi (SVF)
Stromal qon tomir fraktsiyasi (SVF) inson organizmidagi adipoz to'qimalardan liposaksiya yo'li bilan chiqarilishi mumkin bo'lgan lipoopiratning bir komponentidir. Lipoaspirat hujayralarning heterojen aralashmasidan tashkil topgan va ko'p hujayrali hujayralarga ajratish qobiliyati kabi suyak iligi ildiz hujayralari bilan o'xshashlik ko'rsatadigan adipozadan olingan ildiz hujayralari (ASC yoki ADSC) sifatida ma'lum bo'lgan ildiz hujayralarining yuqori tarkibiga ega.
SVFning heterojen populyatsiyasi endotel hujayralari, eritrotsitlar, fibroblastlar, limfotsitlar, monositlar / makrofaglar va boshqalar qatorida, shuningdek, adipozadan olingan ildiz hujayralarining muhim qismini o'z ichiga oladi.
Adipozadan olingan stromal / ildiz hujayralari (ASC)
Adipozadan olingan stromal / ildiz hujayralari (ASC / ADSC) epidermal o'sish omili (EGF), qon tomir endotelial o'sish omili (VEGF), asosiy fibroblast o'sish faktor (bFGF), keratinotsit o'sish omili (KGF) (TGF-b), insulin o'sishi omili (IGF) va miya manbalaridan kelib chiqqan neyrotrofik omil (BDNF), trombotsitlangan o'sish omili (PDGF), gepatotsitlar o'sish omili (HGF). ACS nafaqat o'sish omillarini qoldiribgina qolmay, ular fm bilan bog'liq tirozin kinaz 3 (Flt-3) ligandini, granulotsit-koloni stimulyatsiya qiluvchi omilni (G-CSF), granulotsitlar makrofag-koloni stimulyatsiya qiluvchi omilni (GM-CSF), makrofagni IL-6, IL-7, IL-8, IL-11 va IL-12, leykemiya inhibitör faktor (LIF) va shish paydo nekroz omil-alfa kabi interleykin (IL) (TNF-a).
Ildiz hujayralarining turlari chiqarilishi
Odamlardan autolog yoshi kattalar quyidagi manbalardan olinishi mumkin:
- Suyak iligi, hosilni yig'ib olishni talab qiladi, ya'ni suyakka burg'ulash.
- Lifosaksiya bilan ekstraktsiyani talab qiluvchi adipoz to'qimalari (lipidlar xujayralari).
- AERFERES orqali ekstraktsiya qilishni talab qiluvchi qon, bu erda donordan qon birdan o'tib ketadi “diyaliz” ildiz hujayralari ekstrakte qilingan mashina, boshqa qon komponentlarini donorga qaytarib beriladi.