THC Analizi için Ultrasonik Numune Hazırlama
- Ultrasonik ekstraksiyon, THC üretimi için kanıtlanmış bir yöntemdir; ancak analitik amaçlarla da kullanılabilir.
- Sonikasyon, kenevir ürünlerindeki toplam THC içeriğinin analizi için kullanılan yaygın bir numune hazırlama yöntemidir.
- TLC, GC ve HPLC analizlerinden önce numunelere ultrasonik ekstraksiyon uygulanır.
Ultrasonik THC Ekstraksiyonu
THC veya tetrahidrokannabinol (delta-9-tetrahidrokannabinol), marihuananın psikolojik etkilerinin çoğuna neden olan kimyasaldır. Kenevir türü için 400’den fazla farklı varyete bilinmektedir. Belirli kenevir varyetesine bağlı olarak, kenevirin THC içeriği 0,3 wt% kadar düşük olabilir. Diğer varyetelerde THC içeriği 20 wt% düzeyine kadar çıkabilir.
Farklı kenevir ürünleri arasında da önemli farklılıklar vardır: Marihuanadaki ortalama THC konsantrasyonu %1–5 arasında değişirken, haşişte THC içeriği %5–15 arasındadır ve haşiş yağında ortalama %20’dir. Marihuananın keyif amaçlı kullanılan dozlarındaki THC miktarı oldukça değişkendir ve marihuanadaki THC içeriği ne kadar düşükse, kullanıcının istenen etkileri yaşamak için tüketmesi gereken miktar o kadar fazladır.
Ultrasonik numune hazırlama, THC içeriğini analiz etmek için kullanılır
- keyif amaçlı kullanılan THC ürünlerinin kalite kontrolü için,
- farmasötik THC ürünlerinin kalitesinin belirlenmesi için,
- uyuşturucu amaçlı kenevir ile lif amaçlı kenevirin ayırt edilmesi için.
THC analizi için yaygın olarak şu kromatografik yöntemler kullanılır: İnce Tabaka Kromatografisi (TLC), Gaz Kromatografisi (GC) ve Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC)
TLC Analizi için Ultrasonik Numune Hazırlama Protokolü
Numune hazırlama: Numunelerin hazırlanması için kurutulmuş bitkisel materyal maserasyona tabi tutulmalı ve homojen bir toz elde edilene kadar öğütülmelidir. Ultrasonik ekstraksiyon için 500mg kenevir bitkisi tozu ve 5mL metanol-kloroform karışımı (9 : 1 oranında) bir viyalde karıştırılır. Sonikasyon için mikro uçlu bir sonikatör , VialTweeter veya ultrasonik CupHorn kullanılabilir. Sonikasyon süresi yaklaşık 5 min sürer. Ardından numuneyi en az 5 min bekletin. Berrak süpernatantı ekstraksiyon karışımıyla seyreltin (v/v: 1 : 10). Serbest THC: TLC plağına 1μL
Dekarboksilasyon: Ekstraktın 100μL’si kuruyana kadar buharlaştırılır. Kalıntı 180℃ sıcaklıkta 4 min ısıtılır. 500μL metanol-kloroform (v/v 9 : 1) ekleyin. 5 min sonikasyon uygulayın. Berrak süpernatantı ekstraksiyon karışımıyla seyreltin (v/v: 1 : 10).
Kalibrasyon: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
TLC silika jel F-254, Merck 5729
TLC tarayıcı II, CATS3 yazılımı, Camag Muttenz Elüent:
Etil asetat : Toluen : Kloroform = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Kromatografi sonrası türevlendirme: 0,1 M NaOH içinde %0,1 Fast Blue tuzu
550 nm’de dansitometri
Analiz ve ekstraksiyon için tetrahidrokannabinol (Δ9-THC)
GC Analizi için Ultrasonik Numune Hazırlama Protokolü
Numune hazırlama: Kurutulmuş bitkisel materyal maserasyona tabi tutulur ve homojen bir toz elde edilene kadar öğütülür. Ekstraksiyon için 500mg kenevir bitkisi tozu ve 10mL metanol-heksan karışımı (9 : 1 oranında) bir viyalde karıştırılır. Sonikasyon için mikro uçlu bir prob tipi ultrasonik cihaz , VialTweeter veya ultrasonik CupHorn kullanılabilir. Numuneye 15–20 min sonikasyon uygulayın. Numuneyi çalkalayın ve en az 5 min bekletin. Berrak süpernatantı ekstraksiyon karışımıyla seyreltin (v/v 1: 20).
Dekarboksilasyon: insert içinde
Enjektör sıcaklığı 250℃
Kalibrasyon: 5 ng/μL ile 250 ng/μL arası
GC: 5973 MSD ve 7683 otomatik numune örnekleyicisi ile HP 6890; enjeksiyon: 1μL, bölünmesiz çalışma süresi: 2 min.
Kolon: HP-5 MS, 30m, çap 250 μm, film kalınlığı 0,25 μm
Taşıyıcı gaz: He, 35 psi, sabit debi: 4 mL/min.
Fırın: 100℃ sıcaklıkta 1min.; 15℃ /min. sıcaklık artışıyla 280℃ sıcaklığa çıkış; 280℃ sıcaklıkta 5 min. MSD: TARAMA: m/e 35 – 550
HPLC Analizi için Ultrasonik Numune Hazırlama Protokolü
Numune hazırlama (GC için hazırlamaya benzer şekilde): Kurutulmuş bitkisel materyal maserasyona tabi tutulur ve homojen bir toz elde edilene kadar öğütülür. Ekstraksiyon için 500mg kenevir bitkisi tozu ve 10mL metanol-heksan karışımı (9 : 1 oranında) bir viyalde karıştırılır. Sonikasyon için mikro uçlu bir prob tipi sonikatör , VialTweeter veya ultrasonik CupHorn kullanılabilir. Numuneye 15–20 min sonikasyon uygulayın. Numuneyi çalkalayın ve en az 5 min bekletin. Berrak süpernatantı ekstraksiyon karışımıyla seyreltin (v/v 1: 20).
VialTweeter ile ultrasonik numune hazırlama
Ön kolon: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Kolon: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Elüent: izokratik %36 TEAP 25 mmol/L, %64 asetonitril; 210nm’de miktar tayini
Kalibrasyon: 0,001 – 0,10 μg/μL
Kalibrasyon: 0,01 – 0,50 μg/μL
Alıkonma süresi: CBD için: 6,2 min.; CBN için: 8,0 min.; THC için: 9,4 min.; THC-A için: 11,0 min
LOD: CBD %0,5, CBN %0,5, THC %0,15, THC-A %1
UP200St ile mikro uç kullanılarak numune sonikasyonu
Literatür/Kaynaklar
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): THC içeren kenevir otunun adli kimyasal analizleri. DC’den GC aracılığıyla HPLC yöntemine. Applica 2006.
Bilinmesi Gerekenler
Marihuana dişi Cannabis bitkisinin kurutulmuş çiçeklerinden ve bunların altında yer alan yaprak ve saplardan oluşur. Bu, en yaygın tüketilen formdur ve yaklaşık %3 ile %20 arasında THC içerir. Marihuananın özel, yoğun ıslah edilmiş formları %30’dan fazla THC içeriğine ulaşır. Marihuana, THC içeren diğer tüm kenevir ürünü çeşitlerinin kaynak materyalidir. En bol bulunan kannabinoid olan tetrahidrokannabinolik asidi (THCA) psikoaktif THC’ye dönüştürmek için bir dekarboksilasyon süreci başlatılmalıdır. Bu nedenle, dekarboksilasyona neden olmak için kenevir ve ekstraktları ısıtılmalı veya susuzlaştırılmalıdır.
Kief kenevir yapraklarından ve çiçeklerinden elenerek elde edilen, trikomlar bakımından zengin bir tozu ifade eder. Toz halinde tüketilir veya sıkıştırılarak haşiş kalıplarında kullanılır.
Haşiş veya hash, preslenmiş kieften ya da bitkinin yüzeyinden kazınarak top haline getirilen reçineden üretilen konsantre bir reçine kalıbı veya topudur. Saflığına ve kaynağına bağlı olarak siyahtan altın kahverengiye kadar çeşitli renklerde bulunur. Ağız yoluyla tüketilebilir veya örneğin pipo, nargile, bong, su filtreli pipo ya da buharlaştırıcıda, sıcak bıçak kullanılarak, sarma sigara halinde, kenevir çiçekleri veya tütünle karıştırılarak ya da şişe aracılığıyla dumanı çekilerek içilebilir veya yiyeceklerde bileşen olarak kullanılabilir.
Kenevir tentürü kannabinoidlerin alkol içindeki ekstraktını ifade eder. Tentürü oluşturmak için kannabinoidler, yüksek alkol dereceli içkiler (çoğunlukla tahıl alkolü) kullanılarak kenevir bitkisinden ekstrakte edilir.
Haşiş yağı çözücü ekstraksiyonuyla üretilen ve sertleşmiş veya viskoz bir kütle haline getirilen reçinemsi bir kannabinoid matrisidir. Haşiş yağı, yüksek düzeyde psikoaktif bileşik içermesi nedeniyle en güçlü kenevir ürünlerinden biridir. Bütan ve süperkritik karbondioksit kullanılarak ekstrakte edilen haşiş yağının kullanımı son zamanlarda giderek daha popüler hale gelmiştir.
İnfüzyonlar bir kenevir infüzyonu üretmek için kullanılabilecek çok çeşitli uçucu olmayan çözücüler bakımından birbirinden farklılık gösteren çeşitli kenevir infüzyonlarını ifade eder. Böyle bir infüzyon hazırlamak için kenevir bitkisi materyali bir çözücüyle karıştırılır, ardından bitkideki yağları çözücüye aktarmak için preslenir ve süzülür. Kakao yağı, sütten elde edilen tereyağı, yemeklik yağ, gliserin ve cilt nemlendiricileri yaygın olarak kullanılan çözücülerdir.
Tıbbi marihuana Cannabis bitkisinin hekim tarafından önerilen bir bitkisel tedavi olarak kullanılmasının yanı sıra sentetik THC ve kannabinoidlerin kullanımını ifade eder. Bu kullanım genellikle reçete gerektirir ve dağıtım çoğunlukla yerel yasaların belirlediği bir çerçevede yapılır. Çeşitli araştırmalar, kenevir veya türevlerinin kullanımının örneğin kemoterapinin neden olduğu bulantı ve kusmaya, nöropatik ağrıya ve multipl skleroza karşı etkili olduğunu göstermiştir.