Ultraljudsbaserad beredning av trombocytrikt serum

• Trombocytrik plasma (PRP) är blodplasma som har berikats med trombocyter och som används för medicinska och estetiska behandlingar.
• Ultraljudslys och konditionering är en mycket effektiv metod för att bereda trombocytrik plasma.
• Hielscher Ultrasonics erbjuder olika ultraljudssystem som uppfyller kraven för blodbehandling (t.ex. för beredning i och utanför ett renrum).

Trombocytrikt serum

Ultraljudsbehandling är en tillförlitlig och enkel metod för att lysera trombocyterna i autologt blodserum för att frigöra tillväxtfaktorerna. De trombocythärledda fraktionerna – även kända som autologt konditionerat serum (ACS) – används för vävnadsreparation eller estetiska behandlingar. För att uppnå optimala resultat berikas PRP före injektion.
För att bereda plasma berikad med celltillväxtfaktorer är ultraljudsbehandling en mycket effektiv och resurseffektiv metod för att lysera cellmembranen och frigöra nästan samtliga celltillväxtfaktorer från trombocyterna. Med ultraljudslys och konditionering kan även antikoagulerat blod användas.
Konditionering av PRP genom ultraljudsbehandling är ett enkelt och kostnadseffektivt sätt att erhålla koncentrerade tillväxtfaktorer.

Ultraljudslys av trombocytrik plasma (PRP)

Effekter av ultraljudslys

Ultraljudsbehandling av blodserum ger en homogen lys av trombocyterna för att frigöra de inneslutna tillväxtfaktorerna (tillväxtfaktor AB (PDGF-AB), tillväxtfaktor AA (PDGF-AA), tillväxtfaktor BB (PDGF-BB), vaskulär endotelial tillväxtfaktor (VEGF), transformerande tillväxtfaktor β (TGF-β), epidermal tillväxtfaktor (EGF), insulinliknande tillväxtfaktor (IGF), epitelcellstillväxtfaktor ECGF och fibroblasttillväxtfaktor (FGF)). Trombocyterna och deras alfagranula sönderdelas genom ultraljudsbehandling med hjälp av fenomenet akustisk kavitation. Användning av ultraljudskavitation för trombocytlys minskar den möjliga negativa påverkan på tillväxtfaktorernas aktivitet som metoden med upprepad frysning och upptining kan ha.

Protokoll för ultraljudsbaserad PRP-beredning

Cirka 16mL nytaget autologt blodprov vänds försiktigt 8–10 gånger i ett rör så att blodet och antikoagulantia blandas väl. Därefter centrifugeras provet vid 1800 g i 20 min vid rumstemperatur. Efter centrifugeringen bildar trombocyterna och de mononukleära cellerna ett vitaktigt skikt längst ned i plasmaskiktet, vilket kallas trombocytrik plasma (PRP). Det övre skiktet kallas trombocytfattig plasma (PPP). De mononukleära cellerna kan avlägsnas eller lämnas kvar i provet. Ofta lämnas de mononukleära cellerna kvar i PRP-provet för att undvika ytterligare steg som medför risk för kontaminering.
Observera: Ultraljudsbehandlingen av autolog PRP måste utföras under sterila förhållanden.
PRP och PPP separeras och samlas upp. Till PPP tillsätts 1,5mL 10% kalciumkloridlösning, medan 0,5mL 5% etanol tillsätts till PRP. Båda suspensionerna omskakas försiktigt och får stå i 5 min vid rumstemperatur. Slutligen tillsätts 1mL PPP till PRP-suspensionen, som får stå tills ett fibrinkoagel bildas.
Ultraljudsbehandling: Eftersom den bildade trombocytgelen fungerar som en reservoar för de frigjorda tillväxtfaktorerna måste fibringelen sönderdelas för att frigöra de tillgängliga tillväxtfaktorerna. Parametrarna för ultraljudslys och frisättning av tillväxtfaktorer är följande: Ultraljudsbehandla provet i röret med en UP200Ht eller UP200St (200W, 26kHz) med sonotroden S26d2. För att undvika överhettning av blodprovet kan ultraljudsbehandlingen utföras i pulscykler (t.ex. 10 sek. på, 30 sek. av). Provet bör placeras på is för kylning så att temperaturen optimalt hålls mellan 2–5°C. Efter ultraljudsbehandlingen centrifugeras provet vid 16 000 g i 5 min. vid rumstemperatur. Supernatanten samlas upp och kan förvaras vid -70°C.
Trombocytkoncentrationen i PRP-fraktionen ökade 1,7–4,5 gånger med ultraljudsmetoden jämfört med det genomsnittliga trombocytantalet i helblod enligt litteraturen.

PRP har kombinerats med behandling med stamceller från fettvävnad (autologa stamceller som frigjorts från fettvävnad med ultraljud, blandats med PRP och injicerats tillbaka i patientens vävnad för reparation).

Ultraljudsutrustning

Hielscher Ultrasonics är expert på avancerad och tillförlitlig ultraljudsteknik. Våra ultraljudsapparater används världen över för lys, extraktion och provberedning – både direkt och indirekt. Autoklaverbara såväl som engångsbaserade tillbehör säkerställer en kontamineringsfri behandling av autologa blodprover. De flesta av våra system kan användas för ultraljudslys av stamceller och PRP, vilket gör våra ultraljudsapparater ännu mer ekonomiskt effektiva.
Tabellen nedan visar våra ultraljudsapparater som är lämpliga för beredning av trombocytrik plasma samt den rekommenderade provvolymen för respektive apparat. Större ultraljudsapparater och kundanpassade system finns också tillgängliga.

Kontakta oss i dag! Vi hjälper dig gärna att hitta den optimala ultraljudsapparaten!