Ultraljud beredning av trombocytrikt serum
- Trombocytrik plasma (PRP) är blodplasma som har berikats med trombocyter, som används för medicinska och estetiska behandlingar.
- Ultraljud lys och konditionering är en mycket effektiv metod för att framställa blodplättsrik plasma.
- Hielscher Ultrasonics erbjuder olika ultraljudssystem som matchar kraven för blodbehandling (t.ex. för invändig och utomhus förberedelse av ett renrum).
blodplättsrikt serum
Ultraljudsbehandling är en pålitlig och enkel metod för att lysera blodplättarna i autologt blodserum för att frigöra tillväxtfaktorerna. De trombocythärledda fraktionerna – även känt som autologt konditionerat serum (ACS) – används för vävnadsreparation eller estetiska behandlingar. För att uppnå optimala resultat berikas PRP före injektion.
För att förbereda berikad plasma med celltillväxtfaktorer är ultraljudsbehandling en mycket effektiv och effektiv metod för att lysera cellmembranen och att frigöra nästan hela celltillväxtfaktorer från blodplättarna. Genom ultraljudslys och konditionering kan även antikoagulerat blod användas.
Konditionering av PRP via ultraljudsbehandling är ett bekvämt och kostnadseffektivt sätt att ge i koncentrerade tillväxtfaktorer.
Ultraljud Lysis Effekter
Ultraljudsbehandling av blodserum resulterar i en homogen lys av blodplättarna för att frigöra de instängda tillväxtfaktorerna (tillväxtfaktor AB (PDGF-AB), tillväxtfaktor AA (PDGF-AA), tillväxtfaktor BB (PDGF-BB), vaskulär endotelial tillväxtfaktor (VEGF), transformerande tillväxtfaktor β (TGF-β), epidermal tillväxtfaktor (EGF), insulinliknande tillväxtfaktor (IGF), epitelcellers tillväxtfaktor ECGF och fibroblastisk tillväxtfaktor (FGF)). Trombocyterna och deras alfa-granuler störs av ultraljudsbehandling, med hjälp av fenomenet akustisk kavitation. Användning av ultraljudskavitation för trombocytlys minskar den möjliga negativa effekten på tillväxtfaktoraktiviteten av den upprepade frys-upptiningsmetoden.
Protokoll för förberedelse av ultraljuds-PRP
Ca 16 ml färskt insamlat autologt blodprov vänds försiktigt upp och ner 8-10 gånger i ett rör så att blodet och antikoagulantia blandas väl. Därefter centrifugeras provet vid 1800 g i 20 minuter vid rumstemperatur. Efter centrifugeringen bygger blodplättarna och de mononukleära cellerna ett vitaktigt skikt i botten av plasmaskiktet, vilket är känt som trombocytrik plasma (PRP). Det övre lagret är känt som trombocytfattig plasma (PPP). De mononukleära cellerna kan avlägsnas eller stanna kvar i provet. Ofta stannar de mononukleära cellerna kvar i PRP-provet för att undvika ytterligare steg, som medför risk för kontaminering.
Notera: Ultraljudsbehandlingen av autolog PRP måste utföras under sterila förhållanden.
PRP och OPS separeras och samlas in. Till PPP tillsätts 1,5 ml 10 % kalciumkloridlösning, medan 0,5 ml 5 % etanol tillsätts till PRP. Båda suspensionerna omrörs försiktigt och får stå i 5 minuter i rumstemperatur. Slutligen tillsätts 1 ml PPP till PRP-suspensionen och får stå tills en fibrinpropp bildas.
Ultraljudsbehandling: Eftersom den bildade trombocytgelen fungerar som en reservoar för de frisatta tillväxtfaktorerna, måste fibringenelen störas för att frigöra de tillgängliga tillväxtfaktorerna. Parametrarna för ultraljud lys och tillväxtfaktor frisättning är följande: Ultraljudsbehandling med en UP200Ht eller UP200St (200W, 26kHz) med sonotrode S26d2 provet i röret. För att undvika överhettning av blodprovet kan ultraljudsbehandling utföras i pulserande cykler (t.ex. 10 sek. på, 30 sek. av). Provet bör placeras på is för kylning så att temperaturen hålls optimalt mellan 2 – 5 °C. Efter ultraljudsbehandling centrifugeras provet vid 16000 g i 5 minuter vid rumstemperatur. Supernatanten samlas in och kan förvaras vid -70°C.
Trombocytkoncentrationen i PRP-fraktionen anrikades med 1,7 – 4,5 gånger i den ultraljudsbehandlade metoden jämfört med litteraturen genomsnittliga trombocytantal i helblod.
PRP har kombinerats med fetthärledd stamcellsterapi (Ultraljudsfrisatta autologa stamceller från fettvävnad, blandat med PRP, och injiceras tillbaka i patientens vävnad för reparation).
Ultraljudsutrustning
Hielscher Ultrasonics är expert på sofistikerad och pålitlig ultraljudsteknik. Våra ultraljudsenheter används över hela världen för lys, extraktion och provberedning – genom direkt och indirekt. Kan tas bort i autoklavering samt engångs Tillbehör säkerställer en fri från föroreningar Behandling av autologa blodprover. De flesta av våra system kan användas för ultraljudslys av stamceller och PRP, vilket gör våra ultraljudsenheter ekonomiskt ännu mer effektiva.
Denna tabell nedan listar våra ultraljudsenheter, som är lämpliga för framställning av blodplättsrik plasma, respektive deras rekommenderade provvolym. Större ultraljudsapparater och anpassade system finns också tillgängliga.
Apparat | Effekt [W] | Frekvens [kHz] | Typ | Volym [ml] | ||
---|---|---|---|---|---|---|
VialTweeter | 200 | 26 | fristående | 0.5 | – | 1.5 |
UP50H | 50 | 30 | handhållen eller stativmonterad | 0.01 | – | 250 |
UP100H | 100 | 30 | handhållen eller stativmonterad | 0.01 | – | 500 |
UP200Ht | 200 | 26 | handhållen eller stativmonterad | 0.1 | – | 1000 |
UP200St | 200 | 26 | Stativmonterad | 0.1 | – | 1000 |
UP400St | 400 | 24 | Stativmonterad | 5.0 | – | 2000 |
UP200St-SonoStep | 200 | 26 | fristående | 30 | – | 500 |
GDmini2 | 200 | 26 | Flödescell utan kontaminering |
Kontakta oss idag! Vi hjälper dig gärna att hitta den optimala ultraljudsapparaten!
Kontakta oss! / Fråga oss!
Litteratur/Referenser
- Fortunato, T. M.; Beltrami, kap.; Emanueli, C.; De Bank, P.A:; Pula, G. (2016): Trombocytlysatgel och endoteliala stamceller stimulerar mikrovaskulär nätverksbildning in vitro: vävnadstekniska konsekvenser. Sci. Rep. 6, 2016.
- Hamid, M.S.A.; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): Trombocytrik plasma (PRP) för akut muskelskada: En systematisk genomgång. PLOS ONE Volym 9, Utgåva 2, 2014.
Fakta som är värda att veta
Trombocytrik plasma
Trombocytrik plasma innehåller tillväxtfaktor AB (PDGF-AB), trombocythärledd tillväxtfaktor AA (PDGF-AA), trombocythärledd tillväxtfaktor BB (PDGF-BB), vaskulär endotelial tillväxtfaktor (VEGF), transformerande tillväxtfaktor β (TGF-β), epidermal tillväxtfaktor (EGF), insulinliknande tillväxtfaktor (IGF), epitelcellers tillväxtfaktor ECGF och fibroblastisk tillväxtfaktor (FGF), som är viktiga stimulantia för celltillväxt och förnyelse.
Autologt konditionerat serum (ACS)
Autolog konditionerad plasma (ACP) är en blodplättsrik plasma som utvinns från autologt blod och som används för att stödja regenerering vid en mängd olika ortopediska tillstånd och kirurgiska ingrepp. Konditionerat serum framställs genom att separera plasman från de andra blodkomponenterna (t.ex. erytrocyter) och koncentrera den. ACP är en trombocytrik plasma (PRP). PRP är ett samlingsnamn för en typ av plasma som innehåller en betydligt högre koncentration av trombocyter jämfört med helblod. Det utvinns ur helblod. Huvudkomponenterna i ACP inkluderar trombocyter (blodplättar) och flera tillväxtfaktorer som spelar en viktig roll i läkningsprocessen. Till skillnad från andra blodplättsrika plasmaformuleringar kännetecknas ACP av en låg koncentration av vita blodkroppar såsom neutrofila granulocyter som kan vara skadliga för läkningsprocessen när de förekommer i höga koncentrationer.
trombocytrika plasmainjektioner
Trombocytrik plasma används som injektion inom regenerativ medicin samt vid kosmetiska ingrepp. Tillämpningen av PRP lovar en betydande acceleration av muskelläkning och muskelåterhämtning. Dessutom används det framgångsrikt för att behandla inflammation, artrit, smärta, sår, långsam läkning av öppna sår och allvarliga hudbrännskador. PRP innehåller en hög nivå av tillväxtfaktorer, som stimulerar och skyddar de läkande cellerna så att den skadade vävnaden repareras.
För kosmetiska behandlingar har PRP visat sig vara effektivt för att stimulera hårväxt, hudförnyelse (även känd som vampyrbehandling).
Trombocythärledda tillväxtfaktorer (PDGF)
Termen trombocythärledd tillväxtfaktor (PDGF) avser faktorerna PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C och PDGF-D. Det är ett signalnätverk av fyra ligander (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C och PDGF-D) och två receptorer, PDGFR-alfa och PDGFR-beta.
Tillväxtfaktorer, eller proteiner, reglerar celltillväxt och delning. Som den huvudsakliga mitogenen som finns i däggdjursserum, som frisätts från blodplättar under koagelbildning, spelar den en viktig roll i blodkärlsbildning (angiogenes), tillväxten av blodkärl från redan existerande blodkärlsvävnad.