Ультразвуковая экстракция коллагена
- Коллаген богат белками и широко используется в самых разных промышленных областях, например в производстве пищевых продуктов, фармацевтических препаратов, добавок и т. д.
- Обработку ультразвуком можно легко сочетать с ферментативной или кислотной экстракцией коллагена.
- Внедрение ультразвука в процесс экстракции коллагена повышает выход и ускоряет экстракцию.
Влияние ультразвука на экстракцию коллагена
Ультразвук высокой интенсивности широко используется для улучшения массопереноса в процессах, протекающих в жидкой среде, например при экстракции, в сонохимии и т. д. Экстракцию коллагена, также известную как выделение коллагена, можно значительно улучшить с помощью ультразвуковой обработки. Обработка ультразвуком способствует расщеплению коллагенового субстрата и раскрывает коллагеновые фибриллы, облегчая тем самым ферментативный гидролиз или кислотную обработку.
Ферментативная экстракция с применением ультразвука
Обработка ультразвуком известна своей способностью повышать активность ферментов. Этот эффект основан на ультразвуковом диспергировании и деагломерации агрегатов пепсина. Равномерно диспергированные ферменты обладают большей площадью поверхности для массопереноса, что связано с более высокой активностью ферментов. Кроме того, мощные ультразвуковые волны раскрывают коллагеновые фибриллы, благодаря чему высвобождается коллаген.
Экстракция пепсином с применением ультразвука: Пепсин в сочетании с обработкой ультразвуком увеличивает выход коллагена на величину до приблизительно 124% и значительно сокращает время экстракции по сравнению с обычным гидролизом пепсином. Анализ методом кругового дихроизма, атомно-силовая микроскопия и FTIR подтвердили, что обработка ультразвуком не повлияла на тройную спиральную структуру извлечённого коллагена и она осталась неповреждённой. (Li et al. 2009) Это делает экстракцию пепсином с применением ультразвука весьма практичной для пищевой промышленности, обеспечивая более высокую степень извлечения белка при значительно меньшей продолжительности обработки.
В сравнительном исследовании экстракции коллагена из сухожилий крупного рогатого скота с применением ультразвука и без него ультразвуковая обработка (20kHz, импульсный режим 20/20 sec.) продемонстрировала более высокий выход и эффективность. Обычную экстракцию проводили с использованием пепсина в уксусной кислоте в течение 48 часов. Ультразвуковую экстракцию проводили в тех же условиях, но продолжительность воздействия ультразвука (от 3 до 24 h) и пепсина (от 24 до 45 часов) варьировали, при этом общая продолжительность обработки составляла 48 часов. Экстракция с совместным применением ультразвука и пепсина показала более высокую эффективность извлечения коллагена: выход достигал 6,2%, тогда как при обычной экстракции он составлял 2,4%. Наилучшие результаты были достигнуты при продолжительности ультразвуковой экстракции 18 h. Извлечённый коллаген имел неповреждённую непрерывную спиральную структуру, хорошую растворимость и достаточно высокую термическую стабильность. Это означает, что экстракция с совместным применением ультразвука и пепсина повысила эффективность извлечения природного коллагена без ухудшения качества полученного коллагена. (Ran and Wang 2014)
Кислотная экстракция с применением ультразвука
В исследовании Kim et al. (2012) экстракция кислоторастворимого коллагена из кожи японского морского окуня (Lateolabrax japonicus) показала увеличение выхода и сокращение времени экстракции после ультразвуковой обработки на частоте 20 kHz в 0,5 M уксусной кислоте. Экстракция с применением ультразвука не изменила основные компоненты коллагена, а именно цепи α1, α2 и β.
Ультразвуковая экстракция белка из яичной скорлупы
Ферментативные гидролизаты, предварительно обработанные ультразвуком, обладали лучшими функциональными свойствами. При ультразвуковой экстракции функциональных белковых гидролизатов из скорлупы куриных яиц улучшаются растворимость, эмульгирующие, пенообразующие и водоудерживающие свойства.
Подскорлупная оболочка яиц является широко доступным природным ресурсом и состоит примерно из 64 белков, включая коллаген типов I, V и X, лизоцим, остеопонтин и сиалопротеин. Это делает яичную скорлупу интересным сырьём для экстракции белков. Ультразвуковая экстракция позволяет значительно улучшить высвобождение белка и его функциональные свойства, обеспечивая быстрый, эффективный и экономичный процесс.
Ультразвуковые процессы: от лабораторного до промышленного масштаба
Щелочная экстракция с применением ультразвука
для извлечения и солюбилизации этих белков
При экстракции белка из подскорлупной оболочки яиц ультразвуковая щелочная обработка обеспечила выход солюбилизированного белка, близкий к 100% от общего содержания белка в подскорлупной оболочке. Ультразвуковая кавитация отделяла крупные скопления белков от подскорлупной оболочки и облегчала солюбилизацию её компонентов. Обработка ультразвуком не повредила структуру и свойства белка, и они сохранились в неизменном виде. Антиоксидантные свойства белков были одинаковыми при щелочной обработке с применением ультразвука и при обычной экстракции.
Ультразвуковая экстракция желатина
Замороженную и высушенную на воздухе кожу минтая обрабатывали холодным солевым раствором, щелочными и кислотными растворами для отделения коллагеновой ткани и извлечения желатина посредством денатурации коллагена при 45°C в течение четырёх часов, используя обработку мощным ультразвуком в качестве вспомогательного средства процесса. Оценивали выход желатина, pH, прозрачность, прочность геля и вязкоупругие свойства, а также распределение молекулярной массы, определённое методом PAGE-SDS. В качестве контроля использовали желатин, извлечённый на водяной бане при 45°C в течение четырёх часов. Обработка мощным ультразвуком повысила выход экстракции на 11,1% по сравнению с контролем, тогда как прочность геля снизилась на 7%. Температура гелеобразования желатина, извлечённого с помощью ультразвука, также была ниже (4,2°C). Такое поведение связано с различиями в распределении молекулярной массы полипептидных клубков в желатинах. Экстракцию мощным ультразвуком можно использовать для увеличения извлечения желатина из замороженной и высушенной на воздухе рыбьей кожи. (Olson et al. 2005)
Промышленные ультразвуковые системы
Hielscher Ultrasonics поставляет мощные ультразвуковые системы лабораторного, настольного и промышленного масштаба. Для обеспечения оптимальных результатов экстракции надёжную обработку ультразвуком в сложных условиях можно проводить непрерывно. Все промышленные ультразвуковые процессоры способны обеспечивать очень высокие амплитуды. Непрерывная работа с амплитудами до 200µm легко осуществима в режиме 24/7. Для ещё более высоких амплитуд доступны ультразвуковые сонотроды, изготовленные по индивидуальному заказу. Прочность ультразвукового оборудования Hielscher позволяет работать в режиме 24/7 при высоких нагрузках и в сложных условиях.
Свяжитесь с нами сегодня и сообщите требования к вашему процессу! Мы будем рады порекомендовать подходящую ультразвуковую систему для вашего процесса!
Мощные ультразвуковые гомогенизаторы Hielscher доступны для процессов любого масштаба – от лаборатории до производства.
Литература и источники
- Álvarez, Carlos; Lélu, Pauline; Lynch, Sarah A.; Tiwari, Brijesh K. (2018): Оптимизированное извлечение белка из целой скумбрии с использованием последовательной кислотной/щелочной экстракции методом изоэлектрической солюбилизации и осаждения (ISP) с применением ультразвука. LWT – Food Science and Technology, том 88, February 2018. 210–216.
- Jain, Surangna; Kumar Anal, Anil (2016): Оптимизация извлечения функциональных белковых гидролизатов из подскорлупной оболочки куриных яиц (ESM) посредством экстракции с применением ультразвука (UAE) и ферментативного гидролиза. LWT – Food Science and Technology, том 69, June 2016. 295–302.
- Kim, H.K.; Kim, Y.H.; Kim, Y.J.; Park, H.J.; Lee, N.H. (2012): Влияние ультразвуковой обработки на экстракцию коллагена из кожи морского окуня Lateolabrax japonicus. Fisheries Science, том 78, выпуск 78; 2013. 485–490.
- Li, Defu; Mu, Changdao; Cai, Sumei; Lin, Wei (2016): Ультразвуковое облучение при ферментативной экстракции коллагена. Ultrasonics Sonochemistry, том 16, выпуск 5; 2009. 605–609.
- Olson, D.A., Avena Bustillos, R.D., Olsen, C.W., Chiou, B., Yee, E., Bower, C.K., Bechtel, P.J., Pan, Z., Mc Hugh, T.H. (2005): Оценка мощного ультразвука как вспомогательного средства при экстракции рыбного желатина. Тезисы доклада № 71C-26. Ежегодная конференция IFT. July 2005. Новый Орлеан, LA.
- Ran, X.G.; Wang, L.Y. (2014): Совместное применение ультразвуковой обработки и обработки пепсином для экстракции коллагена из побочных продуктов мясной промышленности. Journal of the Science of Food and Agriculture 94(3), 2014. 585–590.
- Schmidt, M.M.; Dornelles, R.C.P.; Mello, R.O.; Kubota, E.H.; Mazutti, M.A.; Kempka, A.P.; Demiate, I.M. (2016): Процесс экстракции коллагена. International Food Research Journal 23(3), 2016. 913–922.
- Siritientong, Tippawan; Bonani, Walter; Motta, Antonella; Migliaresi, Claudio; Aramwit, Pornanong (2016): Влияние штамма шелкопряда Bombyx mori и продолжительности экстракции на молекулярные и биологические характеристики серицина. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, том 80, выпуск 2, 2016. 241–249.
- Zeng, J.N.; Jiang, B.Q.; Xiao, Z.Q., Li, S.H. (2011): Экстракция коллагена из рыбьей чешуи с помощью папаина при предварительной ультразвуковой обработке. Advanced Materials Research, том 366, 2011. 421–424.
Полезные сведения
Коллаген
Коллаген является основным структурным белком внеклеточного пространства в различных соединительных тканях животных. Как основной компонент соединительной ткани, он является самым распространённым белком у млекопитающих,[1] составляя от 25% до 35% общего содержания белка в организме. Коллаген состоит из аминокислот, закрученных вместе в тройные спирали, которые образуют удлинённые фибриллы. Наибольшее количество коллагена содержится в волокнистых тканях, таких как сухожилия, связки и кожа. Различают три типа коллагена:
Коллаген типа I: составляет 90% белка в коже, волосах, ногтях, органах, костях и связках
Коллаген типа II: составляет 50–60% белка в хрящах и 85–90% коллагена в суставном хряще
Коллаген типа III: обеспечивает белками волокнистый белок в костях, хрящах, дентине, сухожилиях и других соединительных тканях
Коллаген в организме
Каждый из трёх типов коллагена состоит из разных белков, выполняющих различные функции в организме. Коллаген типов I и III является основным компонентом кожи, мышц, костей, волос и ногтей. Он необходим для их здоровья, роста и восстановления. Коллаген типа II преимущественно содержится в хрящах и суставах.
Коллаген типов I и III содержит 19 аминокислот, которые считаются незаменимыми аминокислотами. Они вырабатываются фибробластами (клетками соединительной ткани) и остеобластами (клетками, формирующими кости). К наиболее важным белкам коллагена типов I и III относятся глицин, пролин, аланин и гидроксипролин. Тип III представляет собой волокнистый склеропротеин.
Глицин – аминокислота, содержание которой в коллагене наиболее высоко. Пролин – заменимая аминокислота, которая может синтезироваться из глицина и способствует функционированию суставов и сухожилий. Гидроксипролин – аминокислота, которая способствует стабильности коллагена. Аланин – аминокислота, важная для биосинтеза белков.
Как и коллаген типов I и III, коллаген типа II образует фибриллы. Эта фибриллярная сеть коллагена важна для хряща, поскольку она обеспечивает удержание протеогликанов. Кроме того, она придаёт ткани прочность на растяжение.
Источники и применение
Коллаген – волокнистый белок, который в большом количестве присутствует в соединительной ткани млекопитающих, например крупного рогатого скота и свиней. Большую часть коллагена извлекают
из кожи и костей свиней, а также из сырья, полученного от крупного рогатого скота. Альтернативными источниками для экстракции коллагена являются рыба и птица. Коллаген широко используется в пищевых продуктах, пищевых добавках, фармацевтических препаратах и медицинских средствах, косметике и других продуктах. Экстракция коллагена – развивающаяся отрасль, поскольку этот белок может заменять синтетические вещества в различных промышленных процессах.