Ультразвуковая отслойка клеток
Ультразвуковая отслойка клеток – это высокоэффективный и надежный метод пробоподготовки, используемый в различных областях клеточной биологии и биотехнологии. Используя ультразвуковые волны, многолуночный планшетный ультразвуковой аппарат UIP400MTP отделяет адгезивные клетки от поверхностей культур и подготавливает клеточные суспензии для последующего применения. Ультразвуковая обработка имеет ряд преимуществ по сравнению с традиционными ферментативными, химическими и механическими методами отделения, что делает ее ценным инструментом для исследователей.
Принцип ультразвуковой отслойки клеток
Ультразвуковая дислойция клеток основана на использовании мощного ультразвука для нарушения взаимодействия между клетками и субстратом, к которому они прикреплены. Ультразвуковые волны генерируют микропузырьки, акустическую кавитацию и вибрации в питательной среде, создавая механические силы, которые мягко, но эффективно вытесняют клетки. Этот процесс обычно выполняется с использованием бесконтактного ультразвукового аппарата UIP400MTP для многолуночных планшетов.
Бесконтактный ультразвуковой аппарат UIP400MTP при отслойке клеток
Отделение клеток имеет решающее значение при культивировании адгезивных клеток. Хотя трипсинизация является наиболее часто используемым методом, она может снизить жизнеспособность клеток, повреждая клеточную мембрану и внеклеточный матрикс. Чтобы повысить эффективность клеточной культуры, важно свести к минимуму это повреждение. Ультразвуковая отслойка клеток является высокоэффективным и надежным методом без использования ферментов. Это делает ультразвуковой аппарат UIP400MTP микропланшетов отличной альтернативой для отслойки клеток на основе ферментов. Ультразвуковая обработка применяет акустическую кавитацию и перемешивание в среде, не содержащей сыворотки, которая мягко вытесняет клетки, не причиняя им вреда.
Сравнение ультразвуковой отслойки клеток с традиционными методами
| Преимущества | Ультразвуковая отслойка | Ферментативная отслойка | Химический отряд |
|---|---|---|---|
| Жизнеспособность клеток | Высокий | Терпимая | Переменная |
| Скорость | Быстрый (минуты) | Умеренный (от минут до часов) | Переменная (от минут до часов) |
| Сохранение поверхностных маркеров | Отлично | Может быть изменен | Может быть изменен |
| Масштабируемость | Высокий | Терпимая | Переменная |
| Без остатков | Да | Нет (остаток фермента) | Переменная (химический остаток) |
| Стоимость оборудования | Единовременные инвестиции, отсутствие собственных расходных материалов, отсутствие повторяющихся затрат | Повторяющиеся затраты | Повторяющиеся затраты |
| Простота оптимизации | Лёгкий | Лёгкий | Переменная |
Многолуночный планшетный ультразвуковой аппарат UIP400MTP предлагает множество преимуществ для высокопроизводительной пробоподготовки, такой как отслоение клеток.
Этот ультразвуковой аппарат Hielscher сертифицирован ISO, соответствует требованиям UL, RoHs и CE. Он имеет возможность работы в режиме 24/7 для рабочих процессов с высокой пропускной способностью.
Ниже вы найдете примерную инструкцию по отслойке клеток с помощью многолуночного планшетного ультразвукового аппарата UIP400MTP.
Оборудование и материалы для ультразвуковой отслойки клеток
- Бесконтактный ультразвуковой аппарат для многолуночных планшетов UIP400MTP: Этот высокопроизводительный ультразвуковой аппарат является ключевым инструментом. Пластинчатый ультразвуковой аппарат UIP400MTP подходит для любых стандартных многолуночных и микротитровых планшетов, а также для чашек Петри. Ультразвуковые волны обеспечивают необходимую механическую энергию для отслойки клеток.
- Планшеты для клеточных культур или чашка Петри: Стандартные сосуды используются для выращивания адгезивных клеточных культур.
- Питательная среда: Жидкая среда, в которой выращиваются и поддерживаются клетки.
- Стерильный PBS (фосфатно-солевой буфер): Используется для промывки клеток перед отслоением.
- Пробирки для сбора: Для сбора оторвавшейся клеточной суспензии.
Протокол ультразвуковой отслойки с помощью пластинчатого ультразвукового аппарата UIP400MTP
- Подготовка
– Убедитесь, что все оборудование чистое и стерильное, чтобы предотвратить загрязнение.
– Предварительно подогрейте питательную среду и PBS до соответствующей температуры (обычно 37°C). - Промывка клеток
– Аспирируйте питательную среду из колбы или планшета для клеточных культур.
– Аккуратно промойте клетки стерильным PBS, чтобы удалить остатки среды и оторвавшиеся клетки. - Ультразвуковая обработка
– Добавьте в колбу или тарелку небольшой объем PBS или свежей питательной среды, чтобы покрыть монослой клетки.
– Поместите чашку или тарелку Петри в ультразвуковую UIP400MTP аппарат.
– Обрабатывайте ультразвуком в течение определенного времени, обычно от нескольких секунд до нескольких минут, в зависимости от типа клетки и силы прикрепления. - Сбор клеточной суспензии
– После ультразвуковой обработки понаблюдайте за клетками под микроскопом, чтобы убедиться в отслойке.
– Аккуратно пипетируйте клеточную суспензию, чтобы собрать оторвавшиеся клетки.
– Переложите суспензию в сборную трубку. - Обработка после отслойки
– Центрифугируйте клеточную суспензию, если необходимо концентрировать клетки.
– Повторно суспендируйте клетки в свежей питательной среде или буфере для последующего применения.
Примечания: Параметры (такие как время и интенсивность ультразвука) должны быть оптимизированы для различных типов клеток, чтобы избежать их повреждения. Некоторые чувствительные типы клеток могут быть более чувствительными к ультразвуковой обработке, требующей тщательной оптимизации.
Практическое применение ультразвуковой отслойки клеток
Ультразвуковая отслойка клеток применяется в различных исследовательских и клинических условиях:
- Проточная цитометрия: Подготовка одноклеточных суспензий к анализу.
- Подсчет клеток и анализ жизнеспособности: Отделение ячеек для точного подсчета и оценки жизнеспособности.
- Субкультурация: Перенос клеток из одного культурального сосуда в другой.
- Эксперименты по молекулярной биологии: Выделение клеток для экстракции ДНК, РНК и белков.
Почему я должен заменить соскоб клеток на отслойку клеток с помощью ультразвукового аппарата UIP400MTP Microplate?
Замена соскоба клеток на отслойку клеток с помощью ультразвукового аппарата UIP400MTP микропланшетов дает исследователям ряд преимуществ. В отличие от ручного соскабливания, точно контролируемая ультразвуковая обработка с помощью UIP400MTP обеспечивает равномерное и бережное отделение клеток, сводя к минимуму механические повреждения и сохраняя жизнеспособность клеток. UIP400MTP обеспечивает точный контроль параметров ультразвуковой обработки, обеспечивая равномерную обработку во всех скважинах и устраняя различия между образцами. Этот метод быстрее, эффективнее и масштабируемее, что делает его идеальным для приложений с высокой пропускной способностью, сохраняя при этом воспроизводимость и целостность чувствительных клеточных культур. Со сравнительным исследованием можно ознакомиться здесь!
96-луночный планшетный ультразвуковой аппарат UIP400MTP для ультразвуковой обработки микротитровых и многолуночных планшетов
96-луночный ультразвуковой аппарат UIP400MTP: Пропускающая ультразвук жидкость окружает все лунки и обеспечивает равномерную ультразвуковую обработку каждого образца ультразвуком
Распространенные типы клеток для ультразвуковой отслойки клеток
- Фибробласты:
Обычно используется в тканевой инженерии и исследованиях заживления ран.
Адгезивные клетки, требующие отслойки для пассирования и экспериментов. - Эпителиальные клетки:
Используется в исследованиях тканевых барьеров, исследованиях рака и тестировании лекарств.
Требуют отстраненности для анализа и субкультивирования. - Эндотелиальные клетки:
Имеет важное значение для сосудистых исследований и исследований ангиогенеза.
Адгезивные клетки, которые нуждаются в отслойке для анализов in vitro. - Стволовые клетки:
В том числе мезенхимальные стволовые клетки и индуцированные плюрипотентные стволовые клетки.
Требуют щадящих методов отслойки для поддержания жизнеспособности и плюрипотентности. - Линии раковых клеток:
Широко используется в исследованиях рака и разработке лекарств.
Адгезивные клетки, требующие регулярной отслойки для экспериментальной манипуляции. - Гепатоциты:
Используется в исследованиях функции печени и исследованиях метаболизма лекарств.
Требуют отслойки для моделей и анализов in vitro. - Кератиноциты:
Преобладающий тип клеток в эпидермисе и обычно используется в исследованиях кожи, исследованиях заживления ран и косметических тестах.
Как и другие адгезивные клетки, кератиноциты растут прикрепленными к поверхности культуральных колб или планшетов и должны быть отделены для различных экспериментальных процедур, включая пассирование, анализ и субкультивирование. - Макрофаги:
Часто требуют отслойки при культивировании in vitro.
Макрофаги представляют собой адгезивные клетки, которые обычно прикрепляются к поверхности колб или планшетов для культур. Чтобы собрать их для последующих применений, таких как анализ, субкультурирование или эксперименты, их необходимо отделить от поверхности культуры.
Литература / Литература
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- UIP400MTP-Multi-well-Plate-Sonicator-Infographic
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
Факты, которые стоит знать
Что такое клеточная отслойка?
Отслойка клеток — это процесс отделения адгезивных клеток от поверхности их культурального сосуда, что позволяет собрать их и подготовить к дальнейшим экспериментальным процедурам или анализу. Это может быть достигнуто с помощью ферментативных, химических, механических или ультразвуковых методов.
Что такое диссоциация клеток?
Клеточная диссоциация — это процесс расщепления клеточных агрегатов или тканей на отдельные, жизнеспособные клетки. Это достигается за счет нарушения внеклеточного матрикса и межклеточных спаек с помощью ферментативных, механических (например, ультразвуковая) или химических методов. Диссоциация клеток необходима для различных применений, включая первичную клеточную культуру, анализ одиночных клеток и приготовление клеточных суспензий для экспериментов и терапевтического использования.
В чем разница между адгезивной клеточной культурой и биопленкой?
Адгезивная клеточная культура относится к росту клеток, обычно эукариотических, которые прикрепляются к субстрату в контролируемой лабораторной среде, полагаясь на питательные вещества, поступающие через питательную среду. В отличие от этого, биопленка представляет собой сложное природное микробное сообщество, которое прилипает к поверхности и заключено во внеклеточный матрикс, при этом клетки демонстрируют коллективное поведение, химические градиенты и повышенную устойчивость к внешним стрессам. В то время как адгезивные клеточные культуры являются искусственными и используются в исследовательских целях, биопленки представляют собой динамичные экосистемы, встречающиеся в естественной или искусственной среде.
Ультразвуковая обработка с помощью UIP400MTP является высокоэффективным, не требующим ферментов методом отделения адгезивных клеток и вытеснения биопленок. Узнайте больше о преимуществах смещения биопленки с микропланшетов и чашек Петри с помощью многолуночного ультразвуковика UIP400MTP!
Каковы преимущества ультразвуковой отслойки клеток?
- Бережно относится к клеткам: Ультразвуковая отслойка менее жесткая по сравнению с ферментативными методами (такими как трипсинизация) и механическим соскобливанием, сохраняя жизнеспособность клеток и поверхностные маркеры.
- Быстро и эффективно: Процесс быстрый, часто занимает всего несколько минут, и позволяет эффективно отделять клетки даже от больших поверхностей культур.
- Масштабируемость: Подходит как для небольших лабораторных применений, так и для более крупных биотехнологических процессов.
- Без остатков ферментов: Устраняет необходимость в ферментах, снижая риск изменения белков клеточной поверхности или внесения загрязняющих веществ.