Preparação de amostras por ultra-sons para análise de THC
- A extração por ultra-sons é um método comprovado para a produção de THC, mas também pode ser utilizado para fins analíticos.
- A ultrassonografia é um método comum de preparação de amostras utilizado para a análise do teor total de THC em produtos de canábis.
- As amostras são submetidas a extração por ultra-sons antes da análise por TLC, GC e HPLC.
Extração ultra-sónica de THC
O THC, ou tetrahidrocanabinol (delta-9-tetrahidrocanabinol), é a substância química que provoca a maior parte dos efeitos psicológicos da marijuana. No caso da espécie canábis, são conhecidas mais de 400 variedades diferentes. Dependendo da variedade específica de canábis, esta pode ter apenas 0,3% em peso de THC. Noutras variedades, o teor de THC pode atingir os 20% em peso.
Além disso, os diferentes produtos de canábis variam significativamente: Assim, a concentração média de THC na marijuana varia entre 1 e 5%; no haxixe, o teor de THC situa-se entre 5 e 15% e no óleo de haxixe, em média, 20%. O THC em doses recreativas de marijuana é muito variável e quanto mais baixo for o teor de THC na marijuana, mais o utilizador tem de consumir para sentir os efeitos desejados.
A preparação de amostras por ultra-sons é utilizada para analisar o teor de THC
- para o controlo da qualidade dos produtos de THC para fins recreativos,
- para a determinação da qualidade dos produtos farmacêuticos à base de THC,
- para a distinção entre cânhamo para droga e cânhamo para fibras.
Para a análise do THC, são normalmente utilizados os seguintes métodos cromatográficos: Cromatografia de Camada Fina (TLC), Cromatografia Gasosa (GC) e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC)
Protocolo de preparação de amostras por ultra-sons para análise TLC
Preparação das amostras: Para a preparação das amostras, o material vegetal seco deve ser macerado e triturado até se obter um pó homogéneo. Para a extração por ultra-sons, 500 mg do pó da planta de cannabis e 5 ml de mistura de metanol e clorofórmio (proporção de 9: 1) são misturados num frasco. A sonicação pode ser aplicada utilizando um Ultrasonicador com micro ponta, o VialTweeter ou o ultrassom CupHorn. O tempo de ultra-sons é de cerca de 5 minutos. Em seguida, deixar a amostra repousar durante pelo menos 5 minutos. Diluir o sobrenadante claro com a mistura de extração (v/v: 1 : 10). THC livre: 1μL na placa de TLC
Descarboxilação: 100μL do extrato são evaporados até à secura. O resíduo é aquecido a 180 ℃ durante 4 min. Adicione 500μL de metanol-clorofórmio (v / v 9: 1). Sonicar durante 5 min. Diluir o sobrenadante claro com a mistura de extração (v/v: 1 : 10).
Calibração: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
TLC sílica gel F-254, Merck 5729
TLC scanner II, software CATS3, Camag Muttenz Eluens:
Etilacetato : Toluol : Clorofórmio = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Derivatização pós-cromatográfica: Fast Blue Salt 0,1% em NaOH 0,1 M
Densitometria a 550 nm
Tetrahidrocanabinol (Δ9-THC) para análise e extração
Protocolo de preparação de amostras por ultra-sons para análise GC
Preparação da amostra: O material vegetal seco é macerado e triturado até se obter um pó homogéneo. Para a extração, 500 mg do pó da planta de cannabis e 10 ml de mistura de metanol e hexano (proporção de 9 : 1) são misturados num frasco. A sonicação pode ser aplicada utilizando um dispositivo ultrassónico do tipo sonda com micro ponta, o VialTweeter ou o ultrassom CupHorn. Sonicar a amostra durante 15-20 minutos. Agitar a amostra e deixá-la repousar durante pelo menos 5 minutos. Diluir o sobrenadante claro com a mistura de extração (v/v 1: 20).
Descarboxilação: na inserção
Temperatura do injetor 250℃
Calibração: 5 ng/μL a 250 ng/μL
GC: HP 6890 com 5973 MSD e 7683 injeção de amostrador automático: 1μL, tempo de splitless: 2 min.
Coluna: HP-5 MS, 30m, diâmetro 250 μm, espessura da película 0,25 μm
Gás portador: He, 35 psi, fluxo constante: 4 mL/min.
Forno: 100℃ por 1min.; aumento de temperatura de 15℃ /min. para 280℃; 280℃ por 5 min. MSD: SCAN: m/e 35 – 550
Protocolo de preparação de amostras por ultra-sons para análise por HPLC
Preparação da amostra (análoga à preparação para GC): O material vegetal seco é macerado e triturado até se obter um pó homogéneo. Para a extração, são misturados num frasco 500 mg do pó da planta de cannabis e 10 ml de uma mistura de metanol e hexano (proporção de 9 : 1). A sonicação pode ser aplicada utilizando um ultrassom de tipo sonda com micro ponta, o VialTweeter ou o ultrassom CupHorn. Sonicar a amostra durante 15-20 minutos. Agitar a amostra e deixá-la repousar durante pelo menos 5 minutos. Diluir o sobrenadante claro com a mistura de extração (v/v 1: 20).
VialTweeter para preparação de amostras por ultra-sons
Pré-coluna: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Coluna: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Eluente: isocrático 36% TEAP 25 mmol/L, 64% acetonitrilo quantificação a 210nm
Calibração: 0,001 – 0,10 μg/μL
Calibração: 0,01 - 0,50 μg/μL
Tempo de retenção: para o CBD: 6,2 min; para o CBN: 8,0 min; para o THC: 9,4 min; para o THC-A: 11,0 min
LOD: CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St com micro-ponta para a sonicação de amostras
Literatura/Referências
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Análises químicas forenses do THC haltigem Hanfkraut. Do DC via GC para o método HPLC. Aplicação 2006.
Fatos, vale a pena conhecer
marijuana consiste nas flores secas e nas folhas e caules adjacentes da planta feminina da canábis. Esta é a forma mais consumida e contém cerca de 3% a 20% de THC. Formas específicas de marijuana, altamente cultivadas, atingem um teor de THC superior a 30%. A marijuana é a matéria-prima de todas as outras variedades de produtos de canábis que contêm THC. Para converter o canabinóide mais abundante, o ácido tetrahidrocanabinólico (THCA), no THC psicoativo, é necessário iniciar um processo de descarboxilação. Por conseguinte, a cannabis e os seus extractos devem ser aquecidos ou desidratados para provocar a descarboxilação.
Kief refere-se a um pó, rico em tricomas, que é peneirado das folhas e flores de canábis. É consumido em pó ou comprimido e utilizado em bolos de haxixe.
haxixe ou haxixe é um bolo ou bola de resina concentrada que é produzida a partir de kief prensado ou da resina que é raspada da superfície da planta e enrolada em bolas. Apresenta-se em várias cores, do preto ao castanho dourado, dependendo da pureza e da fonte. Pode ser consumida por via oral ou fumada, por exemplo, num cachimbo, narguilé, bongo, borbulhador, vaporizador, com uma faca quente, fumada em charros, misturada com botões de canábis ou tabaco, fumada em garrafas ou utilizada como ingrediente em alimentos.
Tintura de cannabis refere-se ao extrato de canabinóides em álcool. Os canabinóides são extraídos da planta de canábis utilizando bebidas espirituosas de elevada pureza (sobretudo álcool de cereais) para criar a tintura.
óleo de haxixe é uma matriz resinosa de canabinóides produzida por extração com solventes, formada numa massa endurecida ou viscosa. O óleo de haxixe é um dos produtos de canábis mais potentes devido ao seu elevado nível de compostos psicoactivos. A utilização de óleo de haxixe extraído com butano e dióxido de carbono supercrítico ganhou recentemente uma popularidade crescente.
Infusões referem-se a diferentes tipos de infusões de cannabis que diferem entre si pela grande variedade de solventes não voláteis que podem ser utilizados para produzir uma infusão de cannabis. Para preparar tal infusão, a matéria vegetal de canábis é misturada com um solvente e, em seguida, prensada e filtrada para transferir os óleos da planta para o solvente. A manteiga de cacau, a manteiga láctea, o óleo de cozinha, a glicerina e os hidratantes para a pele são solventes habitualmente utilizados.
marijuana medicinal refere-se à utilização da planta da canábis como terapia à base de plantas recomendada por um médico, bem como de THC e canabinóides sintéticos. Esta utilização exige geralmente uma receita médica e a distribuição é normalmente efectuada num quadro definido pela legislação local. Vários estudos de investigação demonstraram que a utilização da canábis ou dos seus derivados actua, por exemplo, contra as náuseas e os vómitos induzidos pela quimioterapia, a dor neuropática e a esclerose múltipla.