Preparação ultrassónica de amostras para análise de THC
- A extração ultrassónica é um método comprovado para a produção de THC, mas também pode ser utilizada para fins analíticos.
- A sonicação é um método comum de preparação de amostras utilizado para analisar o teor total de THC em produtos de canábis.
- A extração ultrassónica é aplicada às amostras antes da análise por TLC, GC e HPLC.
Extração ultrassónica de THC
O THC, ou tetrahidrocanabinol (delta-9-tetrahidrocanabinol), é a substância química que causa a maioria dos efeitos psicológicos da marijuana. São conhecidas mais de 400 variedades diferentes de canábis. Dependendo da variedade específica de canábis, esta pode conter apenas 0,3 wt% de THC. Noutras variedades, o teor de THC pode atingir até 20 wt%.
Os diferentes produtos de canábis também variam significativamente: a concentração média de THC na marijuana varia entre 1 e 5%; no haxixe, o teor de THC situa-se entre 5 e 15% e, no óleo de haxixe, é, em média, de 20%. O THC nas doses recreativas de marijuana é muito variável e, quanto menor for o teor de THC na marijuana, maior será a quantidade que o utilizador terá de consumir para sentir os efeitos desejados.
A preparação ultrassónica de amostras é utilizada para analisar o teor de THC
- para o controlo da qualidade de produtos de THC para uso recreativo,
- para a determinação da qualidade de produtos farmacêuticos de THC,
- para a distinção entre cânhamo destinado à produção de droga e cânhamo destinado à produção de fibra.
Para a análise de THC, utilizam-se habitualmente os seguintes métodos cromatográficos: cromatografia em camada fina (TLC), cromatografia gasosa (GC) e cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC)
Protocolo de preparação ultrassónica de amostras para análise por TLC
Preparação das amostras: para preparar as amostras, o material vegetal seco deve ser macerado e moído até se obter um pó homogéneo. Para a extração ultrassónica, misturam-se num frasco 500mg de pó da planta de canábis e 5mL de uma mistura de metanol-clorofórmio (proporção de 9 : 1). A sonicação pode ser realizada utilizando um sonicador com microponta, o VialTweeter ou o dispositivo ultrassónico CupHorn. O tempo de sonicação é de aprox. 5 min. Em seguida, deixe a amostra repousar durante pelo menos 5 min. Dilua o sobrenadante límpido com a mistura de extração (v/v: 1 : 10). THC livre: 1μL na placa de TLC
Descarboxilação: evaporam-se 100μL do extrato até à secura. O resíduo é aquecido a 180℃ durante 4 min. Adicione 500μL de metanol-clorofórmio (v/v 9 : 1). Submeta a amostra a sonicação durante 5 min. Dilua o sobrenadante límpido com a mistura de extração (v/v: 1 : 10).
Calibração: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
Gel de sílica para TLC F-254, Merck 5729
Scanner de TLC II, software CATS3, Camag Muttenz Eluente:
Acetato de etilo : Tolueno : Clorofórmio = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Derivatização pós-cromatográfica: sal Fast Blue a 0,1% em NaOH 0,1 M
Densitometria a 550 nm
Tetrahidrocanabinol (Δ9-THC) para análise e extração
Protocolo de preparação ultrassónica de amostras para análise por GC
Preparação das amostras: o material vegetal seco é macerado e moído até se obter um pó homogéneo. Para a extração, misturam-se num frasco 500mg de pó da planta de canábis e 10mL de uma mistura de metanol-hexano (proporção de 9 : 1). A sonicação pode ser realizada utilizando um dispositivo ultrassónico de sonda com microponta, o VialTweeter ou o dispositivo ultrassónico CupHorn. Submeta a amostra a sonicação durante 15–20 min. Agite a amostra e deixe-a repousar durante pelo menos 5 min. Dilua o sobrenadante límpido com a mistura de extração (v/v 1: 20).
Descarboxilação: no inserto
Temperatura do injetor 250℃
Calibração: 5 ng/μL a 250 ng/μL
GC: HP 6890 com 5973 MSD e amostrador automático 7683; injeção: 1μL, tempo sem divisão de fluxo: 2 min.
Coluna: HP-5 MS, 30m, diâmetro 250 μm, espessura do filme 0,25 μm
Gás de arraste: He, 35 psi, caudal constante: 4 mL/min.
Forno: 100℃ durante 1min.; aumento da temperatura de 15℃ /min. até 280℃; 280℃ durante 5 min. MSD: VARRIMENTO: m/e 35 – 550
Protocolo de preparação ultrassónica de amostras para análise por HPLC
Preparação das amostras (análoga à preparação para GC): o material vegetal seco é macerado e moído até se obter um pó homogéneo. Para a extração, misturam-se num frasco 500mg de pó da planta de canábis e 10mL de uma mistura de metanol-hexano (proporção de 9 : 1). A sonicação pode ser realizada utilizando um sonicador de sonda com microponta, o VialTweeter ou o dispositivo ultrassónico CupHorn. Submeta a amostra a sonicação durante 15–20 min. Agite a amostra e deixe-a repousar durante pelo menos 5 min. Dilua o sobrenadante límpido com a mistura de extração (v/v 1: 20).
VialTweeter para preparação ultrassónica de amostras
Pré-coluna: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Coluna: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Eluente: isocrático, 36% de TEAP 25 mmol/L, 64% de acetonitrilo; quantificação a 210nm
Calibração: 0,001 – 0,10 μg/μL
Calibração: 0,01 – 0,50 μg/μL
Tempo de retenção: para CBD: 6,2 min.; para CBN: 8,0 min.; para THC: 9,4 min.; para THC-A: 11,0 min
LOD: CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St com microponta para sonicação de amostras
Bibliografia/Referências
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Forensisch chemische Analysen von THC haltigem Hanfkraut. Von der DC via GC zur HPLC-Methode. Applica 2006.
Informações úteis
Marijuana consiste nas flores secas e nas folhas e caules que as sustentam da planta fêmea de Cannabis. Esta é a forma mais consumida e contém aprox. 3% a 20% de THC. Formas específicas de marijuana obtidas através de seleção intensiva atingem um teor de THC superior a 30%. A marijuana é a matéria-prima de todas as outras variedades de produtos de canábis que contêm THC. Para converter o canabinoide mais abundante, o ácido tetrahidrocanabinólico (THCA), em THC psicoativo, é necessário iniciar um processo de descarboxilação. Por isso, a canábis e os seus extratos devem ser aquecidos ou desidratados para provocar a descarboxilação.
Kief designa um pó rico em tricomas, obtido por peneiração das folhas e flores de canábis. É consumido em pó ou comprimido e utilizado em placas de haxixe.
Haxixe ou hash é uma placa ou bola de resina concentrada, produzida a partir de kief prensado ou da resina raspada da superfície da planta e moldada em bolas. Apresenta várias cores, do preto ao castanho-dourado, consoante a pureza e a origem. Pode ser consumido por via oral ou fumado, por exemplo, num cachimbo, cachimbo de água, bong, cachimbo de água com borbulhador ou vaporizador, utilizando uma faca quente, fumado em charros, misturado com flores de canábis ou tabaco, fumado através de uma garrafa ou utilizado como ingrediente em alimentos.
Tintura de canábis designa o extrato de canabinoides em álcool. Os canabinoides são extraídos da planta de canábis utilizando bebidas espirituosas de elevado teor alcoólico (sobretudo álcool de cereais) para produzir a tintura.
Óleo de haxixe é uma matriz resinosa de canabinoides produzida por extração com solvente, que assume a forma de uma massa endurecida ou viscosa. O óleo de haxixe é um dos produtos de canábis mais potentes devido ao seu elevado teor de composto psicoativo. A utilização de óleo de haxixe extraído com butano e dióxido de carbono supercrítico tem vindo recentemente a ganhar popularidade.
Infusões designam diferentes tipos de infusões de canábis, que se distinguem entre si pela ampla variedade de solventes não voláteis que podem ser utilizados para produzir uma infusão de canábis. Para preparar uma infusão deste tipo, o material vegetal de canábis é misturado com um solvente e, em seguida, prensado e filtrado para transferir os óleos da planta para o solvente. A manteiga de cacau, a manteiga de leite, o óleo alimentar, a glicerina e os hidratantes para a pele são solventes habitualmente utilizados.
Marijuana medicinal designa a utilização da planta de Cannabis como terapia à base de plantas recomendada por um médico, bem como de THC e canabinoides sintéticos. Esta utilização exige geralmente uma receita médica, e a distribuição é habitualmente efetuada num enquadramento definido pela legislação local. Vários estudos de investigação demonstraram que a utilização de canábis ou dos seus derivados atua contra, por exemplo, náuseas e vómitos induzidos pela quimioterapia, dor neuropática e esclerose múltipla.