Preparasi Sampel FFPE dengan Kapasitas Pemrosesan Tinggi: Ekstraksi Protein dan Pemotongan Asam Nukleat dengan Gaya Geser
Dengan ultrasonikator UIP400MTP berkapasitas pemrosesan tinggi, Hielscher Ultrasonics mengatasi tantangan preparasi jaringan yang difiksasi dengan formalin dan ditanam dalam parafin (FFPE). Pelajari bagaimana ultrasonikasi memproses sampel FFPE dalam jumlah besar untuk deparafinisasi FFPE, lisis jaringan, homogenisasi, ekstraksi protein, dan pemotongan DNA/RNA dengan gaya geser! Manfaatkan preparasi jaringan FFPE secara ultrasonik – memproses sampel dalam jumlah besar pada pelat multisumur! Dapatkan sampel berkualitas tinggi dalam jumlah besar untuk hasil penelitian yang andal! Dan yang tak kalah penting, hemat waktu dan biaya!
Preparasi Sampel FFPE Dipermudah dengan Sonikasi Berkapasitas Pemrosesan Tinggi
Fiksasi dengan formalin dan penanaman dalam parafin (FFPE) merupakan metode paling umum untuk mengawetkan dan mengarsipkan jaringan padat. Ekstraksi biomolekul dari sampel jaringan FFPE sering menghadirkan tantangan besar akibat kualitas sampel yang disimpan. Sampel ini, yang merupakan aset tak ternilai dalam biologi molekuler dan penelitian klinis, menyediakan sumber informasi biologis yang kaya untuk studi retrospektif dan validasi biomarker diagnostik. Namun, proses fiksasi dengan formalin dan penanaman dalam parafin, meskipun mempertahankan arsitektur dan morfologi jaringan, mempersulit ekstraksi asam nukleat dan protein berkualitas tinggi. Formalin menginduksi ikatan silang pada asam nukleat dan protein, yang menyebabkan fragmentasi molekuler dan modifikasi kimia. Pelajari bagaimana ultrasonikator UIP400MTP berkapasitas pemrosesan tinggi mengatasi tantangan preparasi sampel FFPE!
Ultrasonikator untuk Preparasi Sampel FFPE yang Efisien
- Alur Kerja yang Mudah Digunakan: Proses yang disederhanakan dan ramah pengguna.
- Deparafinisasi, Ekstraksi Protein, Pemotongan DNA / RNA dengan Gaya Geser
- Pemrosesan Cepat dengan Kapasitas Tinggi: Penanganan pelat multisumur yang efisien.
- Deparafinisasi Efektif: Peningkatan solubilisasi protein.
- Pelarut Nontoksik: Menghindari penggunaan pelarut organik berbahaya seperti xilena.
Sonikator UIP400MTP berkapasitas pemrosesan tinggi untuk pemrosesan sampel FFPE berkapasitas tinggi pada pelat multisumur
Kemajuan Teknik Ekstraksi Protein dari Jaringan FFPE
Hielscher Ultrasonics mengatasi tantangan preparasi sampel FFPE dengan kapasitas pemrosesan tinggi. Sonikasi menggunakan gelombang ultrasonik untuk menghasilkan getaran mekanis dan kavitasi terfokus, yang secara efektif mendisrupsi struktur seluler dan meningkatkan solubilisasi biomolekul. Teknik ini semakin populer karena kemampuannya meningkatkan efisiensi dan hasil ekstraksi asam nukleat serta protein dari jaringan FFPE, sekaligus memotong DNA dan RNA dengan gaya geser untuk preparasi pustaka. Sangat penting untuk ditekankan bahwa ultrasonikasi menggunakan sonikator pelat multisumur UIP400MTP mempertahankan integritas biomolekul ini untuk aplikasi hilir.
Pemotongan Asam Nukleat dengan Gaya Geser Menggunakan Ultrasonikasi Berkapasitas Pemrosesan Tinggi
Ultrasonikator multisumur UIP400MTP untuk penggunaan dalam lingkungan dengan kapasitas pemrosesan tinggi membawa preparasi sampel FFPE ke tingkat baru. Metode sonikasi pelat multisumur ini menyediakan solusi yang efisien dan andal untuk pemrosesan beberapa sampel secara bersamaan. Metode ini memfasilitasi ekstraksi DNA, RNA, dan protein secara cepat dan reprodusibel, yang sangat penting untuk berbagai teknik analisis, termasuk sekuensing generasi berikutnya (NGS), PCR kuantitatif, dan analisis proteomik. Optimalisasi parameter sonikasi, seperti amplitudo, durasi, dan suhu, semakin meningkatkan kualitas dan kuantitas biomolekul yang diekstraksi.
Sonikator UIP400MTP untuk pelat multisumur menawarkan keunggulan signifikan dalam fragmentasi dan pemotongan DNA serta RNA dari jaringan FFPE dengan gaya geser. Salah satu fitur unggulan sistem ini adalah kemampuannya menghasilkan fragmen DNA dan RNA dengan rentang ukuran yang sempit, dengan intensitas sonikasi yang dapat diatur secara presisi untuk memperoleh fragmen pendek berukuran 150–200 pasangan basa (bp) atau fragmen yang lebih panjang berukuran 15–20 kilopasangan basa (kbp). Keserbagunaan ini menjadikan UIP400MTP sangat diperlukan untuk aplikasi sekuensing bacaan pendek maupun bacaan panjang, yang memastikan hasil berkualitas tinggi untuk sekuensing generasi berikutnya (NGS) dan sekuensing genom utuh (WGS). Kontrol ukuran fragmen yang presisi sangat penting bagi peneliti di semua bidang genomik karena memungkinkan preparasi sampel sesuai spesifikasi.
Hubungi Kami untuk Solusi Canggih dalam Pengolahan Jaringan FFPE
Temukan sonikator pelat multisumur UIP400MTP untuk perolehan kembali biomolekul dari sampel FFPE secara efisien, dengan tetap mempertahankan integritas asam nukleat dan protein yang diekstraksi serta memastikan reproduktibilitas hasil. Teknologi ini terintegrasi secara mulus dengan alur kerja preparasi dan analisis lainnya, sehingga menyederhanakan dan meningkatkan penelitian molekuler menggunakan arsip jaringan FFPE.
Fiksatif dan Efeknya
Fiksasi merupakan langkah penting dalam preparasi sampel yang mempertahankan struktur seluler, menghentikan reaksi biokimia, dan mencegah degradasi. Berbagai fiksatif digunakan sesuai kebutuhan eksperimen tertentu. Dua fiksatif yang paling umum adalah formaldehida dan paraformaldehida, yang membentuk ikatan silang pada protein dan asam nukleat, sehingga mempertahankan morfologi serta antigenisitas sel dan jaringan. Fiksatif lain, seperti etanol, metanol, dan glutaraldehida, digunakan untuk aplikasi tertentu.
Fiksatif formaldehida dan paraformaldehida membentuk jembatan metilena di antara gugus amino, sehingga menghasilkan ikatan silang protein. Proses ini secara efektif mengimobilisasi komponen seluler, mempertahankan integritasnya selama langkah analisis berikutnya. Efek fiksatif ini dapat dipengaruhi oleh faktor seperti konsentrasi, pH, dan suhu, dan optimalisasi parameter tersebut sangat penting untuk memastikan pengawetan struktur seluler yang optimal.
Keunggulan Preparasi FFPE secara Ultrasonik
Ultrasonikasi merupakan teknik yang ampuh untuk mendisrupsi sel dan jaringan yang telah difiksasi serta mengungguli teknik konvensional. Teknik ini menawarkan beberapa keunggulan penting dibandingkan metode lisis tradisional:
- Kecepatan dan Efisiensi: Lisis ultrasonik menghasilkan disrupsi sel dan jaringan secara cepat, sehingga secara signifikan mengurangi waktu pemrosesan dibandingkan metode lisis mekanis atau kimia. Gelombang suara berfrekuensi tinggi yang dihasilkan oleh probe ultrasonik menciptakan gaya geser mekanis, yang menyebabkan disrupsi struktur seluler yang telah difiksasi. Disrupsi yang cepat dan efisien ini memungkinkan peneliti memproses sampel dalam volume besar dalam waktu singkat.
- Lembut dan Dapat Disesuaikan: Lisis ultrasonik menawarkan mekanisme disrupsi yang lembut, sehingga meminimalkan kerusakan biomolekul sensitif seperti protein, asam nukleat, dan enzim. Berbeda dengan metode mekanis yang menghasilkan panas atau gaya geser berlebihan, lisis ultrasonik menggunakan kavitasi terkontrol untuk mendisrupsi sel sambil mempertahankan integritas dan fungsi komponen intraseluler.
- Keserbagunaan: Lisis ultrasonik dapat diterapkan pada sampel dengan berbagai fiksatif, sehingga memungkinkan peneliti bekerja dengan beragam sampel yang telah difiksasi. Baik menggunakan formaldehida, paraformaldehida, maupun fiksatif alternatif, lisis ultrasonik secara konsisten menghasilkan disrupsi yang efisien, sehingga memastikan perolehan kembali komponen seluler yang optimal.
- Hasil dan Kualitas Tinggi: Lisis ultrasonik memfasilitasi perolehan komponen seluler utuh dalam jumlah tinggi berkat kemampuannya mendisrupsi sel dan jaringan yang telah difiksasi secara merata. Hal ini memungkinkan aplikasi hilir seperti analisis protein, ekstraksi asam nukleat, dan uji enzimatik menghasilkan hasil yang andal dan reprodusibel.
- Kompatibilitas dengan Otomatisasi: Lisis ultrasonik dapat dengan mudah diintegrasikan ke dalam sistem otomatis, sehingga memungkinkan pemrosesan sampel dengan kapasitas tinggi. Kompatibilitas ini memungkinkan peneliti menyederhanakan alur kerja dan meningkatkan produktivitas, terutama dalam studi berskala besar.
Sonikator pelat 96 sumur UIP400MTP untuk sonikasi pelat mikrotiter dan multisumur
Lisis ultrasonik telah merevolusi disrupsi sel dan jaringan yang telah difiksasi, dengan menawarkan banyak keunggulan dibandingkan metode lisis tradisional. Kecepatan, efisiensi, selektivitas, keserbagunaan, hasil yang tinggi, dan kompatibilitasnya dengan otomatisasi menjadikannya alat yang sangat diperlukan dalam penelitian biologi molekuler dan bioteknologi. Dengan menyediakan sonikator tanpa kontak maupun sonikator tipe probe, Hielscher Ultrasonics menawarkan homogenizer ultrasonik yang paling sesuai untuk aplikasi ilmu hayati Anda. Baik Anda ingin memproses satu sampel, beberapa sampel, maupun sampel dalam jumlah sangat besar secara bersamaan, kami akan menawarkan sonikator terbaik yang sesuai dengan kebutuhan penelitian dan diagnostik Anda.
Baca selengkapnya tentang sonikator tanpa kontak Hielscher untuk preparasi multisampel dan preparasi dengan kapasitas pemrosesan sampel yang tinggi!
- investasi satu kali
- gunakan bahan habis pakai Anda sendiri
- tanpa biaya berulang untuk aksesori dan bahan habis pakai khusus produsen
- kapasitas pemrosesan tinggi
- kontrol presisi
- teknologi mutakhir
- keandalan & ketangguhan
- kontrol proses yang presisi dan dapat disesuaikan
- kelas industri: dapat dioperasikan terus-menerus 24/7
- mudah dan aman dioperasikan
- perawatan minimal
Baca selengkapnya tentang aplikasi sonikator dalam ilmu hayati!
Sonikator pelat UIP400MTP untuk semua pelat 96 sumur, pelat mikrotiter, dan pelat multisumur.
Desain, Manufaktur, dan Konsultasi – Kualitas Buatan Jerman
Ultrasonikator Hielscher dikenal memiliki standar kualitas dan desain tertinggi. Ketangguhan dan kemudahan pengoperasian memungkinkan integrasi ultrasonikator kami ke fasilitas industri secara lancar. Kondisi berat dan lingkungan yang menuntut dapat ditangani dengan mudah oleh ultrasonikator Hielscher.
Hielscher Ultrasonics merupakan perusahaan bersertifikasi ISO dan memberikan perhatian khusus pada ultrasonikator berkinerja tinggi yang dilengkapi teknologi mutakhir dan kemudahan penggunaan. Tentu saja, ultrasonikator Hielscher mematuhi CE dan memenuhi persyaratan UL, CSA, serta RoHs.
Hubungi Kami! / Tanyakan kepada Kami!
Ultrasonikator UIP400MTP: Preparasi sampel FFPE dengan kapasitas pemrosesan tinggi pada pelat multisumur
Pertanyaan yang Sering Diajukan
Di bawah ini, kami menjawab pertanyaan yang sering diajukan terkait preparasi jaringan FFPE dan ultrasonikasi sampel FFPE.
Bagaimana jaringan FFPE dipreparasi?
Langkah-Langkah Preparasi Jaringan FFPE: Penanganan dan pemrosesan jaringan segar secara cermat sangat penting untuk menghasilkan sampel FFPE berkualitas tinggi. Memastikan terpeliharanya arsitektur seluler, asam nukleat, dan protein sangat penting untuk analisis hilir yang akurat. Setiap langkah – mulai dari pengambilan hingga penanaman – memerlukan presisi untuk mempertahankan integritas sampel bagi berbagai analisis, termasuk pemeriksaan histologis, imunohistokimia, dan studi molekuler. Jika dilakukan dengan benar, proses fiksasi dan penanaman ini memastikan jaringan yang diawetkan mencerminkan kondisi in vivo secara akurat, sehingga memungkinkan hasil diagnostik dan penelitian yang andal.
Kami memandu Anda melalui 6 langkah utama proses penanaman sampel jaringan FFPE.
- Pengambilan Jaringan
Biopsi dari mamalia hidup dan kultur jaringan sama-sama merupakan sumber yang dapat digunakan untuk memperoleh jaringan segar bagi preparasi sampel FFPE.
Penting untuk menggunakan teknik aseptik: Gunakan instrumen dan sarung tangan steril untuk menghindari kontaminasi. Idealnya, ambil jaringan di lingkungan steril, seperti ruang operasi atau kabinet aliran laminar.
Karena spesimen sangat rapuh, penanganan yang hati-hati sangat penting: Minimalkan penundaan pemrosesan dan segera mulai pemrosesan jaringan berikutnya setelah eksisi. Hal ini sangat penting untuk mencegah autolisis dan degradasi. Simpan jaringan pada suhu ruang; hindari pembekuan karena dapat menyebabkan pembentukan kristal es dan kerusakan jaringan. - Fiksasi Jaringan
Pertama, jaringan diberi perlakuan dengan larutan fiksatif: Gunakan formalin berpenyangga netral (NBF) 10%, yang setara dengan formaldehida 4% dalam air, dengan penyangga hingga pH netral.
Rendam jaringan sepenuhnya dalam formalin. Pastikan rasio volume fiksatif terhadap jaringan minimal 10:1. Waktu fiksasi biasanya berkisar antara 6 hingga 24 jam, bergantung pada jenis dan ukuran jaringan. Penting agar fiksatif dapat menembus jaringan secara menyeluruh. Namun, fiksasi berlebihan dapat menyebabkan ikatan silang yang mempersulit pemulihan antigen, sedangkan fiksasi yang kurang dapat menyebabkan pengawetan jaringan yang buruk. - Pemangkasan Jaringan
Kedua, pangkas jaringan hingga ketebalan sekitar 3–5 mm agar fiksatif dapat menembus secara memadai. Pastikan orientasi jaringan tepat untuk mencakup struktur histologis yang relevan. Hal ini memudahkan proses ekstraksi saat jaringan kemudian digunakan untuk analisis. - Pemrosesan Sampel yang Telah Difiksasi
Sekarang, jaringan yang telah difiksasi harus didehidrasi: Setelah fiksasi, jaringan perlu didehidrasi untuk memastikan penetrasi lilin parafin secara menyeluruh. Lewatkan jaringan melalui serangkaian etanol dengan konsentrasi bertingkat (70%, 80%, 90%, dan 100%) untuk menghilangkan air.
Penjernihan dengan xilena: Lilin parafin tidak larut dalam air, tetapi larut dalam xilena. Oleh karena itu, air dalam jaringan harus diganti dengan xilena. Namun, xilena sendiri tidak larut dalam air tetapi larut dalam alkohol, sehingga diperlukan langkah perantara ketika air terlebih dahulu diganti dengan alkohol. Rendam jaringan dalam xilena atau pengganti xilena untuk menghilangkan etanol dan mempersiapkan jaringan untuk infiltrasi parafin.
Infiltrasi menggunakan parafin: Tanam jaringan dalam lilin parafin cair, dengan memastikan infiltrasi sempurna. Langkah ini biasanya melibatkan beberapa kali penggantian parafin untuk memastikan impregnasi menyeluruh. - Penanaman Jaringan
Pada langkah ini, jaringan dicetak menjadi blok jaringan: Tempatkan jaringan dalam cetakan dengan orientasi yang diinginkan dan tuangkan parafin cair di atasnya. Biarkan parafin memadat dengan mendinginkannya pada suhu ruang atau di atas pelat dingin. - Pengirisan dan Pemasangan
Mikrotomi: Untuk mengiris jaringan yang telah ditanam, gunakan mikrotom untuk memotong irisan tipis (biasanya 4–5 mikrometer) dari blok parafin. Kemudian sampel dipasang dengan menempatkan irisan pada kaca objek untuk pewarnaan dan analisis mikroskopis selanjutnya.
Terakhir, periksa kualitas histologi: Evaluasi irisan pertama di bawah mikroskop untuk memastikan fiksasi dan pemrosesan yang tepat. Sesuaikan protokol sesuai kebutuhan berdasarkan jenis jaringan dan kualitas yang diamati.
Jaringan FFPE dapat digunakan untuk memperoleh kembali RNA, DNA, dan protein serta menemukan tanda-tanda kanker atau penyakit lainnya. Jaringan ini dapat disimpan selama bertahun-tahun dan merupakan bagian penting dari pemanfaatan sampel jaringan oleh peneliti dan dokter untuk diagnosis dan penelitian.
Apa saja masalah dan tantangan umum pada jaringan FFPE?
Sampel jaringan yang difiksasi dengan formalin dan ditanam dalam parafin (FFPE) banyak digunakan dalam penelitian dan diagnostik, tetapi menghadirkan beberapa tantangan dan masalah umum:
- Degradasi Biomolekul: Fiksasi berkepanjangan dapat menyebabkan degradasi DNA, RNA, dan protein, sehingga mempersulit ekstraksi asam nukleat atau protein berkualitas tinggi untuk aplikasi hilir. Fiksasi yang tepat (menghindari fiksasi yang kurang maupun berlebihan) sangat penting untuk pengawetan jaringan.
- Penutupan Antigen: Proses fiksasi dapat menutupi situs antigenik, sehingga mengurangi efektivitas pengikatan antibodi dalam imunohistokimia dan pengujian imunologis lainnya. Hal ini sering memerlukan pemulihan antigen, yaitu prosedur untuk membuka kembali epitop yang tertutup dan memulihkan pengikatan epitop dengan antibodi. Namun, antigenisitas tidak selalu dapat dipulihkan sepenuhnya.
- Kualitas Fiksasi yang Bervariasi: Perbedaan waktu dan kondisi fiksasi dapat menyebabkan kualitas sampel yang tidak konsisten, sehingga memengaruhi reproduktibilitas dan keterbandingan hasil. Gunakan protokol fiksasi yang andal dan hindari fiksasi yang kurang maupun berlebihan.
- Kerusakan dan Fragmentasi DNA: Fiksasi sampel FFPE dengan formalin dapat menyebabkan berbagai jenis kerusakan DNA, termasuk deaminasi sitosin (mutasi C menjadi T), kerusakan oksidatif (misalnya, 8-okso-guanina yang menyebabkan mutasi G menjadi T), serta gangguan fisik seperti putusnya satu untai, celah, dan situs abasik yang menghambat aktivitas DNA polimerase. Proses fiksasi dengan formalin dapat menyebabkan fragmentasi DNA, sehingga mempersulit analisis genetik dan genomik seperti PCR dan sekuensing.
- Kualitas RNA: RNA yang diekstraksi dari jaringan FFPE sering terfragmentasi dan termodifikasi secara kimia, sehingga menyulitkan pelaksanaan analisis transkriptomik berkualitas tinggi.
- Modifikasi Protein: Formalin dapat menginduksi modifikasi kimia pada protein, sehingga memengaruhi struktur dan fungsinya serta dapat mengganggu analisis proteomik.
- Artefak Pemrosesan Sampel: Selama proses penanaman dan pengirisan, tegangan mekanis dan panas dapat menimbulkan artefak serta menyebabkan kerusakan lebih lanjut pada jaringan.
- Variabilitas Antarbatch: Variasi protokol fiksasi dan penanaman antarbatch dapat menyebabkan variabilitas hasil yang signifikan, sehingga mempersulit perbandingan antarstudi.
- Masalah Penyimpanan: Penyimpanan blok FFPE dalam jangka panjang dapat menyebabkan degradasi tambahan dan hilangnya integritas asam nukleat seiring waktu, sehingga memengaruhi kelayakan sampel arsip untuk studi retrospektif.
Ikatan Silang: Fiksasi dengan formalin menyebabkan pembentukan ikatan silang pada protein dan asam nukleat, yang dapat menghambat analisis molekuler serta memengaruhi akurasi imunohistokimia dan pengujian lainnya.
Penggunaan protokol yang dioptimalkan, penanganan sampel secara hati-hati, dan penerapan teknik canggih membantu meningkatkan kualitas serta keandalan data yang diperoleh dari jaringan FFPE.
Apa perbedaan antara jaringan FFPE dan jaringan beku?
Jaringan FFPE (difiksasi dengan formalin dan ditanam dalam parafin) diawetkan menggunakan formalin untuk memfiksasi jaringan, kemudian ditanam dalam lilin parafin, sehingga memungkinkan penyimpanan jangka panjang pada suhu ruang sambil mempertahankan morfologi jaringan. Sebaliknya, jaringan beku diawetkan secara cepat melalui pembekuan, yang lebih baik dalam mempertahankan integritas asam nukleat dan protein, tetapi memerlukan penyimpanan pada suhu sangat rendah.
Bahan kimia apa yang digunakan untuk penanaman FFPE?
Bahan kimia yang digunakan untuk penanaman FFPE biasanya mencakup formalin untuk fiksasi dan lilin parafin untuk penanaman. Untuk penanaman FFPE, jaringan biasanya difiksasi menggunakan formalin berpenyangga netral (FA) 10% (v/v) atau larutan formaldehida (PFA) 4% (w/v) yang baru dibuat dari bubuk paraformaldehida. Formalin, yaitu larutan formaldehida dalam air, diberi penyangga hingga pH netral untuk mempertahankan morfologi jaringan dan mencegah pembentukan ikatan silang berlebihan. Larutan berbasis paraformaldehida juga memberikan fiksasi yang efektif dengan membentuk ikatan silang pada protein, sehingga menstabilkan struktur jaringan untuk penanaman selanjutnya dalam lilin parafin. Bahan kimia ini sangat penting untuk mempertahankan integritas dan morfologi jaringan selama proses fiksasi dan penanaman.
Bagaimana parafin dihilangkan dari sampel FFPE?
Untuk menghilangkan parafin dari sampel FFPE, irisan jaringan biasanya menjalani serangkaian pencucian dengan xilena, diikuti rehidrasi melalui serangkaian alkohol dengan konsentrasi bertingkat dan terakhir air. Karena xilena sangat toksik dan menimbulkan risiko kesehatan seperti gangguan pernapasan, iritasi kulit, serta potensi efek jangka panjang akibat paparan berulang, penghilangan parafin secara ultrasonik mulai menjadi alternatif yang menjanjikan di banyak laboratorium. Metode ini menggunakan gelombang ultrasonik intens untuk menghilangkan parafin secara efisien dan aman tanpa memerlukan pelarut toksik seperti xilena, sehingga mengurangi risiko bagi personel laboratorium dan menciptakan lingkungan kerja yang lebih aman.
Berapa lama saya harus memfiksasi jaringan untuk memperoleh kualitas sampel FFPE yang baik?
Rekomendasi umum mengenai durasi fiksasi biasanya menyarankan fiksasi sampel jaringan dalam formalin selama 24 hingga 48 jam. Durasi ini umumnya cukup untuk mempertahankan morfologi jaringan dan struktur seluler sambil meminimalkan fiksasi berlebihan, yang dapat menyebabkan pembentukan ikatan silang berlebihan serta degradasi asam nukleat dan protein. Namun, waktu fiksasi optimal dapat bervariasi bergantung pada ukuran dan jenis jaringan, dengan sampel yang lebih kecil atau lebih rapuh memerlukan waktu fiksasi lebih singkat. Sangat penting untuk memastikan fiksasi yang memadai guna mencegah autolisis dan degradasi jaringan, sekaligus menghindari fiksasi berkepanjangan yang dapat mempersulit analisis molekuler hilir.