סטפילוקוקוס ביופילם טיפוח ופרוטוקול ניתוק

שיטות סטנדרטיות חיוניות לתוצאות מחקר אמינות. כאן תוכלו למצוא פרוטוקול טיפוח וניתוק עבור ביופילמים סטפילוקוקליים. פרוטוקול זה מתמקד בהכנת דגימות יעילה בתפוקה גבוהה באמצעות סוניק לוחות רב-באר UIP400MTP לניתוק ביופילם יעיל בעל תפוקה גבוהה בלוחות 96 בארות. הפרוטוקול מכיל גם שלבים מרכזיים לטיפוח, שטיפה והדמיה של ביופילם, תוך התמקדות במזעור השונות והבטחת יכולת השחזור.

סטפילוקוקוס ביופילם ומחקר אנטיביוטי

ביופילמים של סטפילוקוקוס ממלאים תפקיד קריטי בזיהומים מתמשכים בשל עמידותם לאנטיביוטיקה ולתגובות חיסוניות. היווצרות ביופילם מספקת סביבה מגנה לחיידקים, מה שמקשה על הטיפול בזיהומים. מחקר ביופילמים מתמקד לעתים קרובות בהבנת היווצרותם, התנהגותם ורגישותם למיקרוביאליים, עם דגש על שיטות תפוקה גבוהה לייעול תהליכי עבודה ניסיוניים.
הסוניקטור UIP400MTP Multi-Well Plate Sonicator מציע יתרון משמעותי במחקר הביופילם בכך שהוא מאפשר ניתוק מהיר ויעיל של ביופילמים מלוחות של 96 בארות. מכשיר זה מספק אנרגיה קולית אחידה לכל הבארות, ומבטיח תוצאות עקביות תוך מזעור השונות.

פרוטוקול לגידול וניתוק ביופילם סטפילוקוקוס

להלן, אנו מדריכים אותך עם הדרכה שלב אחר שלב בתהליך של טיפוח וניתוק ביופילם סטפילוקוקוס. כצעד אנליטי למופת, אנו מראים לכם כיצד לכמת באופן ספקטרופוטומטרי את הביומסה המתורבתת על ידי צביעה סגולה קריסטלית.

טיפוח סטפילוקוקוס ביופילם

החומרים הנדרשים:

• צלחות מיקרוטיטר סטריליות בעלות תחתית שטוחה 96 בארות המטופלות בתרבית רקמת פוליסטירן עם מכסים
• מרק סויה טריפטי (TSB) עם 0.25% גלוקוז
• ארון בטיחות ביולוגי

שלבים:

1. הכינו סביבת עבודה סטרילית בארון בטיחות ביולוגי כדי למזער זיהום.
2. הוסף TSB המכיל 0.25% גלוקוז לבארות צלחת microtiter. TSB ללא גלוקוז אינו תומך בדרך כלל בהיווצרות ביופילם ויש להשתמש בו רק כבקרה במידת הצורך.
3. לחסן את הבארות בזני חיידקים שהוכנו כמתואר להלן:
4. הכינו תרחיפים חיידקיים, כדי להבטיח שאין צבירי תאים קיימים על ידי הומוגניזציה של המתלים באמצעות סוניקציה או על ידי פירוק אשכולות עם מחט של 23 מד ומערבולות קצרות.
5. יש לאטום את הצלחת עם המכסה שלה ולדגור בתנאים אופטימליים להיווצרות ביופילם (למשל, 37°C למשך 24 שעות).
6. בצע את הניסוי בטריפליקט עבור כל זן חיידקי (שלוש בארות לכל זן) כדי להבטיח אמינות.
7. להקצות שש בארות לכל צלחת עבור בקרות שליליות. ניתן לבדוק עד 30 זנים לכל צלחת של 96 בארות.

הדמיה ושטיפה של ביופילם

1. לאחר הדגירה, יש להשליך את המדיום בזהירות כדי למנוע הפרעה לביופילם.
2. לשטוף כל באר ארבע פעמים עם מלוחים פיזיולוגיים כדי להסיר חיידקים פלנקטוניים.
3. בדוק את תחתית הבארות עבור כתמים לבנים המעידים על נוכחות ביופילם.

ניתוק ביופילם באמצעות סוניקטור לוחות רב-באר UIP400MTP

הגדרת המכשיר ופרמטרים:

• UIP400MTP סוניק צלחת רב באר
• הגדרות הפעלה: משרעת 60%, מצב מחזור עם 60 שניות הפעלה / 30 שניות כיבוי

שלבים:

1. הניחו את צלחת המיקרוטיטר השטופה על משטח UIP400MTP.
2. בצע סוניקציה של הדגימות בהגדרות המומלצות (60% משרעת, 60 שניות הפעלה, 30 שניות כבוי). התאימו את ההגדרות לזן החיידקים.
3. התחל את תהליך הסוניקציה כדי לנתק את הביופילם. הגלים העל-קוליים משבשים את מטריצת הביופילם, ומשחררים את החיידקים הדבקים.
4. UIP400MTP מבטיח חשיפה אחידה בכל הבארות לתוצאות ניתוק עקביות.

שלב אנליטי: כימות של ביומסה של סטפילוקוקוס מנותק באמצעות קריסטל סגול (CV)

החומרים הנדרשים:

• 0תמיסת 0.1% קריסטל סגול (CV)
• 95% אתנול או 30% חומצה אצטית (למסיסות)
• קורא Microplate מסוגל לקרוא ב 570 ננומטר
• צלחות מיקרוטיטר סטריליות לצביעה

שלבים:

1. הכנת צלחת צביעה: מעבירים 100 μL של תרחיף הביופילם המנותק מכל באר של הצלחת הסוניקית לבארות תואמות של צלחת מיקרוטיטר נקייה וסטרילית בת 96 בארות. זה מבטיח סביבה ברורה ואחידה לכתמים.
2. צביעת הביופילם המנותק: יש להוסיף 150 μL של תמיסה סגולה גבישית 0.1% לכל באר המכילה את מתלה הביופילם המנותק. פיפטה עדינה כדי להבטיח ערבוב אחיד של מתלה הביופילם וסגול קריסטל.
3. דגירה: אפשרו לצלחת לדגור בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות כדי לאפשר לסגול הגבישי להכתים את הביומסה ביעילות.
4. שטיפה: לאחר הדגירה, יש להשליך בזהירות את התמיסה הסגולה הגבישית מהבארות מבלי להפריע לביומסה. שטפו היטב שלוש פעמים במי מלח פיזיולוגיים סטריליים כדי להסיר כתם לא קשור.
5. ייבוש: תנו לצלחת להתייבש באוויר בטמפרטורת החדר או מתחת למכסה מנוע סטרילי. הימנע חימום, שכן זה עלול לשנות את התוצאות.
6. מסיסות: הוסף 200 μL של 95% אתנול (או 30% חומצה אצטית, בהתאם לנוהלי מעבדה סטנדרטיים) לכל באר כדי להמיס את סגול הגביש הכבול. מערבבים בעדינות על ידי ליטוף או ניעור הצלחת במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.
7. מדידה: מדוד את הצפיפות האופטית (OD) של תמיסת הגביש הסגול המסיס ב-570 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-לוחות.
8. ניתוח נתונים: הפחת את הערך הממוצע OD570 של בקרות שליליות (בארות עם TSB אך ללא חיסון חיידקי) מבארות ניסוי כדי לקחת בחשבון צביעת רקע. הקלט ונתח את הנתונים.

הערה: בצע את הניסוי בשלשה עבור כל תנאי כדי להבטיח יכולת שחזור. יש להקפיד על טיפול נאות בסגול קריסטל ובאתנול, תוך הקפדה על פרוטוקולי בטיחות וסילוק.
 

היתרונות העיקריים של UIP400MTP במבט חטוף:

• עיבוד בתפוקה גבוהה: תוכנן במיוחד עבור לוחות מרובי בארות, ומאפשר לך לעבד דגימות מרובות בו זמנית.
• פיזור אולטראסוני אחיד: מבטיח עוצמה קולית שווה על פני בארות, ומספק תוצאות עקביות בכל הדגימות.
• השתמש בכל צלחת סטנדרטית: UIP400MTP יכול להתמודד עם כל צלחות מרובה בארות סטנדרטיות, צלחות פטרי ומתלים צינור. אין צורך בצלחות קנייניות יקרות!
• ממשק ידידותי למשתמש: קל להתקנה ולשליטה, מה שהופך אותו לכלי מצוין להגדלת הפרודוקטיביות במעבדה. הגדרות ניתנות לתכנות ואוטומציה מקלות על סטנדרטיזציה של תהליכים!