פרוטוקול ASTM E2799-22 להערכה אנטי-מיקרוביאלית
Hielscher UIP400MTP הוא סוניק לוחות רב באר רב עוצמה ויעיל שנועד לייעל את שלב הסוניקציה בפרוטוקול ASTM E2799-22. על ידי אספקת אנרגיה על-קולית אחידה על פני כל לוח המיקרוטיטר, UIP400MTP מבטיח ניתוק עקבי ואמין של ביופילמים ממכסי יתדות מבלי לפגוע בתאים או להתפשר על שלמות הדגימה. יכולת התפוקה הגבוהה שלו ותפעולו הידידותי למשתמש מפחיתים באופן משמעותי את זמן העיבוד תוך שיפור יכולת השחזור, מה שהופך אותו לפתרון אידיאלי עבור מעבדות המבצעות בדיקות כדאיות ביופילם ובדיקות יעילות מיקרוביאלית.
ASTM E2799
ASTM E2799 היא שיטת בדיקה מתוקננת שנועדה להעריך את היעילות של חומרים אנטי-מיקרוביאליים נגד ביופילמים, במיוחד תוך התמקדות ב-Pseudomonas aeruginosa. ביופילמים הם קהילות מיקרוביאליות מורכבות הנצמדות למשטחים ומציגות עמידות מוגברת לטיפולים אנטי-מיקרוביאליים, מה שהופך אותם לאתגר משמעותי בהקשרים בריאותיים, תעשייתיים וסביבתיים. שיטה זו משתמשת בבדיקת Minimum Biofilm Eradication Concentration (MBEC) כדי לספק מסגרת אמינה וניתנת לשחזור לבדיקת חומרי חיטוי בתנאי ביופילם מציאותיים.
UIP400MTP סוניק צלחת 96 באר לסינון בתפוקה גבוהה
כיצד סוניקציה תורמת ל-ASTM E2799?
סוניקציה ממלאת תפקיד קריטי בפרוטוקול ASTM E2799 בכך שהיא מקלה על ניתוק ביופילמים ממשטחי בדיקה, ומבטיחה הערכה מדויקת של כדאיות מיקרוביאלית לאחר הטיפול. על ידי שימוש באנרגיה על-קולית מבוקרת, הפרוטוקול משיג שיבוש ביופילם יעיל ועקבי מבלי לפגוע בתאים, ומאפשר תוצאות מדויקות וניתנות לשחזור. זה הופך את ASTM E2799 לכלי חיוני לקידום מחקר ביופילם ופיתוח אסטרטגיות אנטי-מיקרוביאליות יעילות.
כיצד להפעיל את בדיקת MBEC בהתאם ל- ASTM E2799-22
פרוטוקול ASTM E2799-22 מתאר את השלבים להערכת היעילות של חומרים אנטי-מיקרוביאליים נגד ביופילמים. בעת שימוש בסוניקטור לוח המיקרוטיטר של Hielscher UIP400MTP, ניתן להתאים את הפרוטוקול לשילוב שיטת סוניקציה מתקדמת זו לניתוק ביופילם. להלן תיאור השלבים המותאמים לשימוש בסוניקטור microplate UIP400MTP:
- הכנת ביופילמים
הכינו צלחת מיקרוטיטר סטרילית בת 96 בארות עם מכסי יתדות ניתקים.
לחסן את הבארות עם תרחיף חיידקי סטנדרטי במדיום גידול מתאים.
הניחו את מכסה היתדות על הצלחת, וודאו שהיתדות שקועות במלואן בתרחיף החיידקי.
לדגור על הצלחת בתנאים מבוקרים (למשל, טמפרטורה וזמן) כדי לאפשר היווצרות ביופילם על היתדות. - טיפול בחומרים אנטי-מיקרוביאליים
לאחר היווצרות ביופילם, החלף את המדיום בתווך טרי המכיל את חומרי הבדיקה האנטי-מיקרוביאליים בריכוזים שונים.
חבר מחדש את מכסה היתד ודגר בתנאים המפורטים בעיצוב הבדיקה. - הכנה לניתוק ביופילם
לאחר הטיפול, שטפו את מכסה היתד על ידי טבילתו בתמיסת שטיפה סטרילית כדי להסיר שאריות חומרים אנטי-מיקרוביאליים ותאים פלנקטוניים שהודבקו באופן רופף. - יחידת ביופילם באמצעות הסוניק UIP400MTP
הכינו צלחת מיקרוטיטר טרייה בת 96 בארות המכילה מצע התאוששות (למשל, מרק מנטרל).
נתק את הביופילמים על ידי הנחת מכסה היתד לתוך הבארות של צלחת מדיום ההתאוששות.
הכנס את הצלחת לסוניקטור UIP400MTP, ודא שהמכסה והצלחת מיושרים כראוי.
הגדר את הסוניקטור למשרעת של 70%-80% ובצע סוניקציה למשך 3-4 דקות במצב מחזור, כדי להבטיח ניתוק ביופילם עקבי ללא ליזה של תאים. - הערכת כדאיות הביופילם
לאחר סוניקציה, לעבד את מדיום השחזור המכיל תאי ביופילם מנותקים באמצעות טכניקות מיקרוביולוגיות או אנליטיות סטנדרטיות, כגון:- ספירת יחידות יוצרות מושבה (CFU): בצע דילול סדרתי וצלחת על אגר לספירת תאים בת קיימא.
- מדידות צפיפות אופטית (OD):השתמש בניתוח ספקטרופוטומטרי כדי להעריך את צפיפות התא.
- מבחני כדאיות מבוססי פלואורסצנטיות: כימות תאים חיים ומתים באמצעות צבעים פלואורסצנטיים.
- ניתוח נתונים
השווה את נתוני הכדאיות של ביופילמים מטופלים ולא מטופלים כדי לקבוע את היעילות של חומרים אנטי-מיקרוביאליים.
חשב את ריכוז מיגור הביופילם המינימלי (MBEC) בהתבסס על הריכוז הדרוש לסילוק תאי ביופילם בני קיימא. - בקרת איכות
הבטח תנאי סוניקציה עקביים על ידי כיול קבוע של UIP400MTP ואימות שתהליך ניתוק הביופילם אינו גורם לליזה או הרס משמעותיים של התא.
כלול בקרות מתאימות, כגון ביופילמים לא מטופלים וחסרים בינוניים בלבד, כדי לאמת את התוצאות.
תאי הביופילם שנוצרו על הסיכות נעקרו על ידי סוניקציה (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Germany, UIP250MTP) למשך 5 דקות בצלחות בנות 96 בארות שהכילו מדיום תרבית טרי להתאוששות התאים.
(תמונה ומחקר: ©de Oliveira et al., 2016)
על-ידי שילוב UIP400MTP בזרימת העבודה של ASTM E2799-22, תהליך ניתוק הביופילם ממוטב עבור עקביות, יעילות ויישומים בעלי תפוקה גבוהה.
ספרות / מקורות
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- ASTM E2799-22 Standard Test Method for Testing Disinfectant Efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC Assay
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
שאלות נפוצות
מה זה ASTM E2799?
ASTM E2799 היא שיטת בדיקה סטנדרטית שנקבעה על ידי ASTM International לבדיקת יעילות חומרי חיטוי נגד ביופילם Pseudomonas aeruginosa באמצעות בדיקת MBEC. השיטה נמצאת בשימוש נרחב להערכת היווצרות ביופילם, יעילות מיקרוביאלית ואינטראקציות בין פני השטח של חומרים, ומאפשרת השוואות סטנדרטיות במחקר הקשור לביופילם.
מה ההבדל בין ASTM E2799-22 לבין ASTM E2799-11, ASTM E2799-12 ו-ASTM E2799-17?
ASTM E2799 היא שיטת בדיקה מתוקננת המעריכה את היעילות של חומרי חיטוי נגד ביופילמים של Pseudomonas aeruginosa באמצעות בדיקת MBEC (ריכוז מיגור מינימלי של ביופילם). שיטה זו עברה מספר תיקונים כדי לשפר את דיוקה וישימותה.
- ASTM E2799-11: זה היה הפרסום הראשוני של התקן, הקובע את הנהלים הבסיסיים להערכת יעילות חיטוי נגד ביופילמים P. aeruginosa באמצעות בדיקת MBEC.
- ASTM E2799-12: מהדורה זו שילבה עדכונים טכניים קלים כדי לשפר את הבהירות ולטפל באי-בהירות שזוהתה בגירסת 2011.
- ASTM E2799-17: בעדכון זה בוצעו שינויים משמעותיים יותר בפרוטוקול, כולל התאמות בתהליך גידול הביופילם, יישום הטיפול ונהלי הניטרול, במטרה לשפר את יכולת השחזור וההתאמה להתקדמות במחקר הביופילם.
- ASTM E2799-22: העדכון האחרון משקף את ההבנה המדעית העדכנית ביותר ואת ההתקדמות הטכנולוגית במחקרי ביופילם. הוא כולל מתודולוגיות מעודנות לגידול, טיפול וניתוח של ביופילם, כדי להבטיח ששיטת הבדיקה תישאר רלוונטית ויעילה להערכות יעילות החיטוי הנוכחיות.
כל גרסה של ASTM E2799 נעשתה כדי לשפר את האמינות, השחזור והרלוונטיות של השיטה, ולהבטיח שהיא תישאר עדכנית עם התקדמות מדעית וטכנולוגית בתחום מחקר הביופילם.
מה ההבדל בין מבחני MBEC ו- MBIC?
ההבדל העיקרי בין MBEC (ריכוז ביעור ביופילם מינימלי) לבין MBIC (ריכוז מעכב ביופילם מינימלי) טמון במיקוד שלהם:
מבחני MBEC למדוד את הריכוז הנמוך ביותר של סוכן מיקרוביאלי הדרוש כדי לחסל לחלוטין ביופילמים שנוצרו מראש, להעריך את היכולת של חומר להרוג מיקרואורגניזמים מוטמעים ביופילם.
מבחני MBIC לקבוע את הריכוז הנמוך ביותר של סוכן מיקרוביאלי המונע היווצרות ראשונית של ביופילמים, להעריך את יכולתו לעכב את התפתחות ביופילם.
שתי הבדיקות חיוניות להבנת היעילות של אנטי-מיקרוביאלים נגד ביופילמים, אך הן מכוונות לשלבים שונים של מחזור החיים של הביופילם.
למד כיצד הסוניקטור UIP400MTP microplate משמש לפירוק ביופילם במבחני MBIC!
מיקרו-פלטה סוניקטורס חדשה לפירוק ביופילמים עקשניים
Hielscher Ultrasonics מייצרת הומוגנייזרים קוליים בעלי ביצועים גבוהים מ המעבדה ל גודל תעשייתי.