מיצוי מטריצה חוץ-תאית עם UIP400MTP הסוניקטור 96 בארות

שיטות מיצוי מסורתיות של מטריצה חוץ-תאית (EM) כוללות לעתים קרובות שלבים מרובים כדי לשבש את מטריצת הביופילם. עם זאת, טכניקות אלה יכולות לגזול זמן רב ולא עקביות, מה שמוביל לשונות בתוצאות. עם UIP400MTP הסוניקטור בעל 96 הקידוחים, תהליך מיצוי הקרינה האלקטרומגנטית מקל באופן משמעותי, ומספק שיבוש ביופילם יעיל, מדויק ואחיד ביותר בפורמטים בעלי תפוקה גבוהה. UIP400MTP משתמש באולטרסאונד ממוקד כדי ליצור קוויטציה מבוקרת, תוך פירוק יעיל של מטריצת הביופילם תוך שמירה על הכדאיות והשלמות של תאים משובצי ביופילם. השימוש UIP400MTP משפר את יכולת השחזור והדיוק של בדיקות במורד הזרם, כגון ניתוחים מטבוליים ופרוטאומיים, בדיקות כדאיות ומחקרי רגישות מיקרוביאלית. על ידי ייעול מיצוי EM, UIP400MTP מאפשר לחוקרים להשיג תוצאות עקביות ואיכותיות, ומציע תובנות עמוקות יותר על דינמיקה של ביופילם ואינטראקציות עם סוכנים חיצוניים.

מיצוי מטריצה חוץ-תאית

מטריצה חוץ-תאית (EM) היא מרכיב קריטי של ביופילמים שנוצרו על ידי מיקרואורגניזמים כגון קנדידה אלביקנס. ה- EM, המורכב מרב-סוכרים, חלבונים, שומנים ו- DNA חוץ-תאי, מספק שלמות מבנית, מתווך היצמדות למשטחים ותורם באופן משמעותי לעמידות מיקרוביאלית. חילוץ וניתוח הקרינה האלקטרומגנטית חיוניים להבנת הביולוגיה של ביופילם, להבהרת מנגנונים של עמידות לתרופות ולזיהוי מטרות טיפוליות חדשות.

פרוטוקול למיצוי מטריצה חוץ-תאית (EM) מביופילמים קנדידה אלביקנס באמצעות UIP400MTP

פרוטוקול זה מתמקד בחילוץ המטריצה החוץ תאית (EM) של ביופילמים סטטיים של קנדידה אלביקנס. שילוב הסוניקטור UIP400MTP שיחליף שלבים מסורתיים מבוססי גירוד או אנזימים לשיפור היעילות והשחזור.

חומרים דרושים

הוראות שלב אחר שלב לחילוץ EM

1. היווצרות ביופילם סטטי
   עבור ביופילמים סטטיים, חסן C. albicans לתוך בארות של צלחת 96 בארות באמצעות מדיום RPMI-1640. כל באר צריכה להכיל נפח אחיד של חיסון (למשל, 200 מיקרוליטר לכל באר).
   יש לדגור על הצלחת בטמפרטורה של 37°C בתנאים סטטיים למשך 24 שעות כדי לאפשר היווצרות ביופילם על משטחי הבאר.
2. הכנת ביופילם למיצוי
   לאחר הדגירה, שאפו בעדינות והשליכו את המדיום המשומש מכל באר מבלי להפריע לביופילם.
   שטפו כל באר בזהירות עם PBS סטרילי (למשל, 200 μL) כדי להסיר תאים מחוברים באופן רופף ופסולת פלנקטונית. חזור על שלב זה פעמיים.
   הוסף PBS טרי או את מאגר המיצוי (למשל, 200 μL) לכל באר כדי להתכונן לסוניקציה.
3. סוניקציה עם UIP400MTP
   הניחו את צלחת 96 הקידוחים המכילה PBS או חיץ חילוץ במגש הסוניקטור UIP400MTP. כדי למקם את צלחת רב באר כראוי, בצע את ההוראות של המדריך.
   בצע סוניקציה למשך 5-6 דקות במצב עדין (משרעת של 60%, מצב פולס), מה שמבטיח שיבוש אחיד של מבנה הביופילם ושחרור רכיבי EM.
   השתמש בבקרת טמפרטורה של הסוניקטור UIP400MTP (חיישן טמפרטורה והגדרות) כדי למנוע חימום מוגזם או נזק לדגימה.
4. טיפול בשרף חילופי קטיונים (CER)
   מעבירים את הנוזל הסוניק מכל באר לצלחת חדשה בת 96 בארות.
   הוסף נפח כפול של מתלה CER (מוכן PBS או חיץ) לכל באר (למשל, נפח כולל של 400 μL לכל באר).
   אטמו את הצלחת ודגרו עליה על שייקר צלחת או מסובב ב-400 סל"ד למשך 3 שעות כדי לאפשר קשירה ובידוד של רכיבי EM.
5. הפרדה וסינון
   צנטריפוגה את הצלחת ב 2,000 × גרם במשך 10 דקות כדי להפריד את השרף והתאים מן supernatant.
   העבירו בזהירות את הסופרנאטנט המכיל EM מכל באר לצלחת חדשה בת 96 בארות.
   סנן את הסופרנאטנט דרך מסנן 0.22 מיקרומטר באמצעות מערכת סעפת ואקום מבוססת צלחת או שווה ערך כדי לקבל תמצית EM נקייה.
6. ניתוח של EM
   השתמש בטכניקות כגון UPLC-Q-TOF-MS עבור פרופיל מטבוליטים לא ממוקד, או השתמש בבדיקות ספציפיות (למשל, BCA עבור חלבונים, טריגליצרידים וערכות כימות פחמימות) כדי לאפיין רכיבי EM.

מיצוי מטריצה חוץ-תאית בתפוקה גבוהה

היעילות הגבוהה של מיצוי מטריצה חוץ-תאית (EM) עם הסוניקטור UIP400MTP חוללה מהפכה בהכנת הדגימות לבדיקות הדורשות ניתוח מדויק של תכונות ביופילם. UIP400MTP משתמש בגלים על-קוליים כדי לשבש באופן מדויק ואחיד את מטריצת הביופילם, ומאפשר שחרור יעיל של רכיבי EM תוך שמירה על כדאיות התא ושלמותו. גישה זו משפרת באופן משמעותי את האמינות של בדיקות כגון בדיקות כדאיות ביופילם, מחקרים פרוטאומיים ומטבוליים, והערכות רגישות מיקרוביאלית.

עבור מבחני שחזור ביופילם, כגון ספירת יחידות יוצרות מושבה (CFU), מיצוי EM עם UIP400MTP מבטיח גישה ללא הפרעה של ריאגנטים לתאים משובצים ביופילם. באופן דומה, ניתוחים פרוטאומיים ומטבוליים, כגון UPLC-Q-TOF-MS, נהנים מבידוד בעל תפוקה גבוהה של חלבונים, שומנים ומטבוליטים. UIP400MTP תומך גם בבדיקות רגישות אנטי-מיקרוביאליות מדויקות, ומאפשר קביעה מדויקת של ערכי MIC ו-MBEC של ביופילם. יתר על כן, המיצוי היעיל המתאפשר על ידי UIP400MTP מסייע בבדיקות פעילות אנזימים, כימות רכיבים ומחקרים מבניים, ומציע תובנות חשובות לגבי תפקידן של מטריצות חוץ-תאיות בארכיטקטורה של ביופילם, הידבקות ומנגנוני התנגדות.

שיטת מיצוי זו בעלת תפוקה גבוהה וניתנת לשחזור מייעלת את הכנת הקרינה האלקטרומגנטית, ומבטיחה תוצאות מעולות במגוון בדיקות הקשורות לביופילם.