ליפוזומים בשיטת אידוי שלב הפוך באמצעות סוניקציה

ליפוזומים הם ננו-נשאים רב-תכליתיים המשמשים בהעברת תרופות בשל התאימות הביולוגית שלהם ויכולתם לתמצת תרופות הידרופיליות והידרופוביות כאחד. שיטת אידוי הפאזה ההפוכה (ידועה גם כשיטת תחליב או שיטת אידוי ממס) היא טכניקה בולטת להכנת ליפוזומים, המציעה יעילות אנקפסולציה גבוהה. מאמר זה מתמקד בהכנת ליפוזומים באמצעות שיטת אידוי בפאזה הפוכה המשופרת על ידי סוניקציה מסוג בדיקה, תוך הדגשת השלבים הפרוצדורליים, היתרונות והיישומים הפוטנציאליים במערכות אספקת תרופות.

ליפוזומים הם מבנים שלפוחיתיים המורכבים מדו-שכבות שומנים אחת או יותר, המסוגלות לעטוף תרכובות הידרופיליות והידרופוביות. המבנה הייחודי שלהם הופך אותם לאידיאליים למשלוח תרופות ממוקד. שיטת אידוי הפאזה ההפוכה (המכונה תחליב או שיטת אידוי ממס) היא טכניקה מבוססת היטב להכנת ליפוזומים. בפסקאות הבאות נציג בפניכם את היתרונות של שיטת האידוי בפאזה הפוכה באמצעות סוניקציה מסוג גשש, הידועה כמשפרת תחלוב, יעילות אנקפסולציה והקטנת גודל ליפוזומלי.

מתודולוגיה של הכנת ליפוזום בשיטת אידוי שלב הפוך

היווצרות ליפוזום בשיטת אידוי הפוך באמצעות סוניקציה כרוכה בהמסת שומנים בתערובת ממס אורגנית של כלורופורם ומתנול (2:1 v/v), המעדיפה היווצרות מיצלים הפוכים. לאחר מכן מוסיפים חיץ מימי לתערובת זו. הפתרון המשולב הוא סוניקטור, למשל, באמצעות סוניקטור מסוג בדיקה כמו UP400ST, כדי ליצור מיקרו-תחליב מים בשמן. לאחר מכן הממס האורגני מתאדה באמצעות מאייד סיבובי, והתוצאה היא ג'ל צמיג שבסופו של דבר קורס ויוצר ליפוזומים. הליבה המימית הגדולה של בועות המיקרו-אמולסיה מקדמת לכידה של מולקולות הידרופיליות, מה שמוביל לג'לים ליפוזומליים בעלי שחרור מבוקר ופרופיל חלחול טוב. לבסוף, הליפוזומים מוקטנים לגודל אחיד באמצעות הסוניקטור.

היווצרות ליפוזום בשיטת אידוי הפוך באמצעות סוניקציה

פרוטוקול / הוראות שלב אחר שלב:

1. לשקול ולהמיס שומנים:
   יש לשקול במדויק 40 מ"ג של L-α-פוספטידילכולין וכולסטרול ביחס מסה של 4:1 או 7:3.
   ממיסים את השומנים השוקלים ב-10 מ"ל של תערובת כלורופורם/מתנול (4:1 v/v) בצלוחית בעלת תחתית עגולה.
2. טופס יריעת שומנים:
   חברו את הבקבוק בעל התחתית העגולה למאייד סיבובי.
   סובבו את הבקבוק ב-8 x גרם ב-40°C בתנאי ואקום עד שנוצר סרט שומנים דק על דפנות הבקבוק.
3. הסר אדי ממס:
   פנו את האדים הנותרים של תערובת הממס על ידי שטיפת הבקבוק בגז חנקן.
4. סרט פיפיד מתמוסס מחדש:
   להמיס מחדש את סרט השומנים ב 10 מ"ל של אתר diethyl כדי ליצור שלפוחיות שלב הפוך.
5. הכינו שלב מימי:
   יש לערבב 5 מ"ל של חיץ PBS (0.1 M, pH 7.4) המכיל את החומר הפעיל לאנקפסולציה ו-20 מ"ג של Tween 80 עם השלב האורגני (אתר דיאתיל עם שומנים מומסים).
6. סוניק את האמולסיה:
   הניחו את תחליב ה-w/o באמבט קרח.
   סוניק את האמולסיה באמצעות סוניק מסוג בדיקה UP200Ht במהירות 26 קילוהרץ ומצב פולס של 50% (0.5 מחזורים = 30 שניות הפעלה / 30 שניות כבוי) ומשרעת של 50% למשך דקה אחת.
7. להתאדות ליצירת ג'ל:
   החזירו את האמולסיה הסוניק למאייד הסיבובי.
   יש להתאדות בלחץ אטמוספרי ב-40°C עד לקבלת ג'ל.
8. צורה ליפוזומים:
   עוד אידוי הג'ל, שובר אותו לתוך נוזל שקוף למחצה, המציין היווצרות של ליפוזומים.
9. השעיית ליפוזום סופית:
   הוסף עוד 5 מ"ל של חיץ PBS (0.1 M, pH 7.4) למתלה הליפוזום.
   מערבלים בעדינות את התערובת.
   יש לפנות את האדים הנותרים של אתר דיאתיל באמצעות גז חנקן.
10. אחסון:
    אחסנו את תרחיף הליפוזומים הסופי בטמפרטורה של 4°C במקרר עד לצורך.

הוראות אלה מתארות את התהליך שלב אחר שלב להכנת ליפוזומים בשיטת אידוי שלב הפוך עם הומוגניזציה קולית, המבטיחה עומס מימי פנימי גבוה ואנקפסולציה יעילה של החומר הפעיל.
שיטת אידוי הפאזה ההפוכה, במיוחד באמצעות סוניקציה מסוג גשש, היא טכניקה שאומצה באופן נרחב להכנת ליפוזומים, במיוחד כאשר מכוונים לעומס מימי פנימי גבוה. שיטה זו היא יתרון על פני שיטת הידרציה הסרט הדק המסורתית בשל יכולתה לשלב כמות גדולה יותר של פאזה מימית בתוך הליפוזומים.

היתרונות של סוניקציה מסוג בדיקה להיווצרות ליפוזום

• הומוגניות משופרת: סוניקציה מסוג בדיקה מספקת קלט אנרגיה עקבי, וכתוצאה מכך התפלגות גודל אחידה יותר של ליפוזומים.
• אנקפסולציה משופרת: הכוחות המכניים במהלך סוניקציה מגבירים את אנקפסולציית התרופות, במיוחד עבור תרכובות הידרופיליות.
• מדרגיות: השיטות ניתנות להרחבה בקלות, מה שהופך אותן למתאימות לייצור ליפוזום בקנה מידה גדול.

יישומים של ליפוזומים במתן תרופות

ליפוזומים שהוכנו בשיטות תחליב ואידוי ממסים עם סוניקציה מסוג בדיקה מתאימים ליישומים שונים של אספקת תרופות, כולל:

1. אספקת תרופות ממוקדות: פונקציונליזציה של ליפוזומים עם ליגנדות ספציפיות מאפשרת העברה ממוקדת לרקמות או תאים מסוימים.
2. שחרור מבוקר: המבנה הדו-שכבתי של השומנים מאפשר שחרור מבוקר של תרופות, מה שמשפר את היעילות הטיפולית.
3. צדדיות: שיטות אלה מתאימות למגוון רחב של חומרים טיפוליים, החל ממולקולות קטנות ועד ביומולקולות גדולות יותר כמו חלבונים וחומצות גרעין.

שיטת האידוי בפאזה הפוכה ידועה במיוחד בעומס המימי הפנימי הגבוה יותר שלה בהשוואה לשיטת ההידרציה של הסרט הדק. מאפיין זה מועיל ליישומים הדורשים אנקפסולציה משמעותית של תרופות הידרופיליות או סוכנים טיפוליים אחרים.
שיטת אידוי הפאזה ההפוכה באמצעות סוניקציה מסוג בדיקה היא טכניקה חזקה ויעילה להכנת ליפוזומים. יכולתו להשיג עומס מימי פנימי גבוה יותר הופכת אותו לשיטה מועדפת ביישומים פרמצבטיים שבהם מקסום האנקפסולציה של חומרים הידרופיליים הוא חיוני. הבקרה הקפדנית של אידוי הממס והשימוש בסוניקציה הם המפתח להצלחתה של שיטה זו, מה שמוביל לייצור ליפוזומים באיכות גבוהה המתאימים למטרות טיפוליות שונות.

מצאו את הסוניקטור המתאים לייצור הליפוזומים שלכם

Hielscher Ultrasonics מציעה מגוון מוצרים רחב של סוניקטורים מסוג בדיקה לייצור ליפוזום יעיל וכתוצאה מכך מלכודת גבוהה יעילה ויכולת טעינה גבוהה של מולקולות ביו-אקטיביות.
אתה יכול להשתמש בסוניקטורים של Hielscher עבור מסלולי הכנה ליפוזומים שונים כגון טכניקת אידוי שלב הפוך המתוארת כאן, שיטת תחליב ושיטת הסרט הדק.
קרא עוד על הכנת ליפוזום קולי בשיטת סרט דק!
קרא עוד על ליפוזומים מוכנים באולטרסאונד

• ויטמין C
• DHA ו-EPA (שמן דגים)
• נטע לוי

תכנון, ייצור וייעוץ – איכות תוצרת גרמניה

Hielscher ultrasonicators ידועים באיכות הגבוהה ביותר שלהם סטנדרטים עיצוב. חוסן ותפעול קל מאפשרים שילוב חלק של האולטרסאונד שלנו במתקנים תעשייתיים. תנאים קשים וסביבות תובעניות מטופלים בקלות על ידי אולטרסוניקטורים Hielscher.

Hielscher Ultrasonics היא חברה מוסמכת ISO לשים דגש מיוחד על ultrasonicators ביצועים גבוהים שמציעות טכנולוגיה חדישה וידידותיות למשתמש. כמובן, Hielscher ultrasonicators הם תואמי CE ולעמוד בדרישות של UL, CSA ו RoHs.

הטבלה הבאה נותנת לך אינדיקציה ליכולת העיבוד המשוערת של האולטרסאונד שלנו: