UIP400MTP સોનિકેટરનો ઉપયોગ કરીને પ્રાયોનની ઉચ્ચ નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષમતાવાળી શોધ માટે PMCA

UIP400MTP મલ્ટિ-વેલ પ્લેટ સોનિકેટર પ્રોટીન મિસફોલ્ડિંગ સાઇક્લિક એમ્પ્લિફિકેશન (PMCA)માં ઉચ્ચ નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષમતા સાથે નમૂના તૈયાર કરવા માટે શક્તિશાળી ઉકેલ પ્રદાન કરે છે. અનેક વેલમાં ઊર્જાનું સમાન વિતરણ કરીને અને સોનિકેશનના ચોક્કસ પરિમાણો જાળવીને, આ સિસ્ટમ અસાધારણ પુનરુત્પાદકતા સાથે એકસાથે અસંખ્ય નમૂનાઓની પ્રક્રિયા શક્ય બનાવે છે. લાળ જેવા પડકારજનક જૈવિક નમૂનાઓમાં ઓછી સાંદ્રતાએ રહેલા પ્રાયોન શોધવા માટે PMCAને શ્રેષ્ઠ બનાવવા આ ક્ષમતાઓ અત્યંત જરૂરી છે, કારણ કે આવા નમૂનાઓમાં પરીક્ષણના અવરોધકો પરિણામોને અસ્પષ્ટ કરી શકે છે.

હરણ કુળનાં પ્રાણીઓમાં ક્રોનિક વેસ્ટિંગ ડિસીઝ (CWD) અને મનુષ્યોમાં ક્રુટ્ઝફેલ્ડ્ટ-જેકબ રોગ (CJD) જેવા પ્રાયોન રોગો ખોટી રીતે વળાંક પામેલા પ્રાયોન પ્રોટીન (PrP^Sc)ને કારણે થતા ચેતાતંત્રના ક્ષયજન્ય વિકારો છે. આ રોગોમાં ઘણી વાર લાળ, રક્ત અને મૂત્ર જેવા શારીરિક પ્રવાહીઓમાં ચેપી પ્રાયોનનું પ્રમાણ ઓછું હોય છે, જે નિદાન અને સંશોધનને જટિલ બનાવે છે. પર્યાવરણીય માધ્યમોમાં છોડાયેલા પ્રાયોન દ્વારા CWDનો આડો પ્રસાર વન્યજીવ વ્યવસ્થાપન અને પરિસ્થિતિકીય સ્વાસ્થ્ય માટે ખાસ કરીને નોંધપાત્ર અસરો ધરાવે છે. તેવી જ રીતે, ક્રુટ્ઝફેલ્ડ્ટ-જેકબ રોગ જેવા રોગોમાં માનવ નમૂનાઓમાંથી ખોટી રીતે વળાંક પામેલા પ્રાયોન પ્રોટીનનું વિશ્વસનીય પ્રવર્ધન નિદાન પદ્ધતિઓને આગળ વધારવા અને રોગની પ્રગતિ સમજવા માટે અત્યંત જરૂરી છે.

સુધારેલા PMCA પ્રોટોકોલનો ઉપયોગ સામાન્ય પરીક્ષણ અવરોધકોની અસરને ટાળવા (દા.ત., લાળમાં રહેલા મ્યુસિન) અને એવા પ્રાયોન શોધવામાં ઉચ્ચ સંવેદનશીલતા મેળવવાનું શક્ય બનાવે છે, જે રિયલ-ટાઇમ ક્વેકિંગ-ઇન્ડ્યુસ્ડ કન્વર્ઝન (RT-QuIC) જેવી તકનીકો વડે અન્યથા શોધી શકાય તેમ ન હોય અથવા તેમની શોધનાં પરિણામો અસ્પષ્ટ હોય. આ પ્રગતિઓ વિવિધ રોગો માટે પ્રાયોનની શોધમાં સુધારો કરે છે, જેના કારણે PMCA પ્રાયોન સંશોધન અને નિદાન માટે અનિવાર્ય સાધન બને છે. મલ્ટિ-વેલ પ્લેટ સોનિકેટર UIP400MTP માઇક્રોપ્લેટમાં (દા.ત., 6-, 24-, અથવા 96-વેલ પ્લેટ) અથવા ટ્યુબ રેકમાં રાખેલી વાયલમાં અસંખ્ય નમૂનાઓનું સોનિકેશન કરીને ઉચ્ચ નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષમતાવાળા PMCAને સરળ બનાવે છે.

ઉચ્ચ નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષમતાવાળા પ્રોટીન મિસફોલ્ડિંગ સાઇક્લિક એમ્પ્લિફિકેશન (PMCA) માટેનો પ્રોટોકોલ

નીચેનો પ્રોટોકોલ સુદૃઢ સંશોધન પરિણામો માટે સંપૂર્ણપણે સમાન પરિસ્થિતિઓમાં મોટી સંખ્યામાં નમૂનાઓની કાર્યક્ષમ પ્રક્રિયા શક્ય બનાવે છે.

નમૂનાની તૈયારી

પ્રારંભિક સામગ્રી:
નીચે મુજબ નમૂનાઓ તૈયાર કરો:

• સાર્કોસિલ નિષ્કર્ષણથી મળેલા પેલેટને PMCA સબસ્ટ્રેટમાં ફરીથી નિલંબિત કરીને.
• મગજના હોમોજેનેટ અથવા રક્તના નમૂનાઓમાં પ્રાયોન સીડ સીધા ઉમેરીને.

સબસ્ટ્રેટ:

• 10% (wt/vol) મગજના હોમોજેનેટનો ઉપયોગ કરો, જે એવા ટ્રાન્સજેનિક ઉંદરોમાંથી તૈયાર કરેલું હોય જેમાં વધુ પ્રમાણમાં અભિવ્યક્ત થાય છે PrP^C (દા.ત., Tg ઉંદરો).
• મગજના પેશીને નીચેનામાં હોમોજેનાઇઝ કરો:
  – 1× PBS.
  – 150 mM NaCl.
  – 1% Triton X-100.
• ઉપયોગ સુધી સબસ્ટ્રેટને -80ºC પર સંગ્રહિત કરો.

માઇક્રોપ્લેટ અથવા ટ્યુબમાં નમૂનાની ગોઠવણી:
ટ્યુબ:

• મગજના હોમોજેનેટ સબસ્ટ્રેટના 90 μL ઉમેરો અને 10 μL નમૂનો (દા.ત., રક્ત, મગજનું હોમોજેનેટ અથવા સાર્કોસિલ પેલેટ) ઉમેરીને સીડ કરો.
• દરેક 0.2 mL ટ્યુબમાં 3 Teflon મણકા (1.59-mm અથવા 2.38-mm વ્યાસના) મૂકો.
• UIP400MTP સોનિકેટર સાથે સુસંગત રેકમાં ટ્યુબ ગોઠવો.

6-વેલ માઇક્રોપ્લેટ:

• દરેક વેલમાં મગજના હોમોજેનેટ સબસ્ટ્રેટના 5 mL ઉમેરો અને 500 μL નમૂનો ઉમેરીને સીડ કરો.
• દરેક વેલમાં 3 Teflon મણકા ઉમેરો.

PMCA પ્રક્રિયા

સ્થાપન:
ઉત્પાદકની સૂચનાઓ અનુસાર ટ્યુબ રેક અથવા 6-વેલ માઇક્રોપ્લેટને UIP400MTP સોનિકેટરમાં મૂકો.

ચક્ર કાર્યક્રમ:
નીચે મુજબ 144 PMCA ચક્ર ચલાવો:

• ઇન્ક્યુબેશન: 37°C પર 29 મિનિટ અને 30 સેકન્ડ.
• સોનિકેશન: 60% કંપવિસ્તાર પર 30 સેકન્ડ.
• તાપમાનનું નિરીક્ષણ કરો: નમૂનાના તાપમાનનું નિરીક્ષણ કરવા જોડીને વાપરી શકાય તેવા તાપમાન સેન્સરનો ઉપયોગ કરો અને UIP400MTPને મહત્તમ 48–50°C તાપમાન માટે પ્રોગ્રામ કરો.

ત્યારપછીના રાઉન્ડ:
144 ચક્રનો પ્રથમ રાઉન્ડ પૂરો કર્યા પછી, પ્રવર્ધિત સામગ્રીનો એક માપેલો અંશ સ્થાનાંતરિત કરો:

• તાજા ટ્રાન્સજેનિક ઉંદરના મગજના હોમોજેનેટ સબસ્ટ્રેટમાં 10-ગણું મંદન કરો.
• સોનિકેશનના સમાન પરિમાણો જાળવીને ત્યારપછીના રાઉન્ડ માટે 96 PMCA ચક્ર ચલાવો.
• ઇચ્છિત સંખ્યામાં રાઉન્ડ થાય ત્યાં સુધી ચાલુ રાખો (સામાન્ય રીતે 5 સુધી).

શોધ માટેનું લક્ષ્ય: PrP^Sc

1. Proteinase K પાચન:
   – નમૂનાઓને Proteinase K (50 μg/mL) વડે 37°C પર 1 કલાક માટે ઉપચારિત કરો.
   – SDS-સેમ્પલ બફર ઉમેરીને અને 10 મિનિટ ઉકાળીને પાચન બંધ કરો.
2. વેસ્ટર્ન બ્લોટ વિશ્લેષણ:
   – નીચેના વડે પાચિત નમૂનાઓનું વિશ્લેષણ કરો:
   – 6H4 અથવા PRC1 anti-PrP એન્ટિબોડી.
   – શોધ માટે SDS-PAGE કરો અને PVDF મેમ્બ્રેન પર સ્થાનાંતરિત કરો.

 

Hielscher UIP400MTP તમારી બહુ-કૂવા પ્લેટો, PCR પ્લેટો અથવા નમૂના ટ્યૂબો માટે સૌથી વધુ અનુકૂળનક્ષમ સોનિકેટર છે. 400 વૉટનું સતત સોનિકેશન આઉટપુટ ધરાવતું આ ઉપકરણ કોષ વિઘટન, પાયસીકરણ, પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ, DNA / RNA ખંડન, કણગુચ્છોનું વિભંજન, FFPE નિષ્કર્ષણ, કોષો અને જૈવપટલને અલગ કરવા અથવા પાયસીકરણ જેવા ઉપયોગો માટે બનાવવામાં આવ્યું છે. UIP400MTP અલ્ટ્રાસોનિક બાથ નથી. તે કેન્દ્રિત સોનિકેશન માટે ઉચ્ચ તીવ્રતાવાળું કપ હોર્ન છે. આ શક્તિશાળી બિનસંપર્ક સોનિકેટર તમારી પ્રમાણભૂત કૂવા-પ્લેટના તમામ કૂવાઓમાં સમાન સોનિકેશન પ્રદાન કરે છે. તમે કંપનવિસ્તાર, શક્તિ અને સ્પંદનને ચોકસાઈથી નિયંત્રિત કરી શકો છો. આંતરિક ટાઇમર અને તાપમાન પ્રોબ સુસંગત પરિણામો સુનિશ્ચિત કરે છે. UIP400MTP પ્લેટ સોનિકેટર જળસ્નાન દ્વારા નમૂનાઓને ઠંડા રાખે છે; બાહ્ય ચિલર વૈકલ્પિક છે.

 

વધુ સુદૃઢ પરિણામો માટે વધુ નમૂનાઓની પ્રક્રિયા કરો

UIP400MTP મલ્ટિ-વેલ પ્લેટ સોનિકેટર પ્રોટીન મિસફોલ્ડિંગ સાઇક્લિક એમ્પ્લિફિકેશન (PMCA)ની કાર્યક્ષમતા અને પ્રક્રિયાનું પ્રમાણ વધારવાની ક્ષમતામાં નોંધપાત્ર સુધારો કરે છે, જે આ પ્રક્રિયાના પરંપરાગત રીતે વધુ સમય લેતા સ્વરૂપની સમસ્યાને સંબોધે છે. 96-વેલ પ્લેટમાં એકસાથે 96 સુધીના નમૂનાઓની પ્રક્રિયા શક્ય બનાવીને, આ સિસ્ટમ તમામ વેલમાં સોનિકેશનની ચોક્કસ અને સમાન પરિસ્થિતિઓ જાળવીને PMCA કાર્યપ્રવાહોને સુવ્યવસ્થિત કરે છે. આ ઉચ્ચ નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષમતા હાથથી કરવી પડતી કામગીરીને ન્યૂનતમ કરે છે, વધુ શ્રમ માગતા પગલાં ઘટાડે છે અને પુનરુત્પાદકતા સુનિશ્ચિત કરે છે, જેના કારણે તે પ્રાયોન સંશોધન માટે અનિવાર્ય સાધન બને છે. ક્રોનિક વેસ્ટિંગ ડિસીઝનું સંશોધન હોય કે ક્રુટ્ઝફેલ્ડ્ટ-જેકબ રોગનું, UIP400MTP વધુ કાર્યક્ષમતા સાથે મોટા પાયે અભ્યાસોને સરળ બનાવે છે અને સંશોધકોને આધુનિક નિદાનલક્ષી અને વૈજ્ઞાનિક ઉપયોગોની જરૂરિયાતો પૂરી કરવામાં સક્ષમ બનાવે છે.

---

---

સાહિત્ય / સંદર્ભો

• FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
• Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
• De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
• Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
• Dreyer J., Ricci G., van den Berg J., Bhardwaj V., Funk J., Armstrong C., van Batenburg V., Sine C., VanInsberghe M.A., Marsman R., Mandemaker I.K., di Sanzo S., Costantini J., Manzo S.G., Biran A., Burny C., Völker-Albert M., Groth A., Spencer S.L., van Oudenaarden A., Mattiroli F. (2024): Acute multi-level response to defective de novo chromatin assembly in S-phase. Molecular Cell 2024.
• Mochizuki, Chika; Taketomi, Yoshitaka; Irie, Atsushi; Kano, Kuniyuki; Nagasaki, Yuki; Miki, Yoshimi; Ono, Takashi; Nishito, Yasumasa; Nakajima, Takahiro; Tomabechi, Yuri; Hanada, Kazuharu; Shirouzu, Mikako; Watanabe, Takashi; Hata, Kousuke; Izumi, Yoshihiro; Bamba, Takeshi; Chun, Jerold; Kudo, Kai; Kotani, Ai; Murakami, Makoto (2024): Secreted phospholipase PLA2G12A-driven lysophospholipid signaling via lipolytic modification of extracellular vesicles facilitates pathogenic Th17 differentiation. BioRxiv 2024.
• Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics. 2024.