آماده‌سازی فراصوتی نمونه برای آنالیز THC
- استخراج فراصوتی روشی اثبات‌شده برای تولید THC است، اما می‌توان از آن برای مقاصد تحلیلی نیز استفاده کرد.
- فراصوت‌دهی یکی از روش‌های رایج آماده‌سازی نمونه برای آنالیز مقدار کل THC در محصولات شاهدانه است.
- استخراج فراصوتی پیش از آنالیزهای TLC، GC و HPLC روی نمونه‌ها انجام می‌شود.
استخراج فراصوتی THC
THC یا تتراهیدروکانابینول (دلتا-9-تتراهیدروکانابینول)، ماده‌ای شیمیایی است که بیشتر اثرات روانی ماری‌جوانا را ایجاد می‌کند. بیش از 400 سویهٔ مختلف از گونهٔ شاهدانه شناخته شده است. بسته به سویهٔ خاص شاهدانه، مقدار THC در آن می‌تواند تنها 0٫3 wt% باشد. در سویه‌های دیگر، مقدار THC می‌تواند به 20 wt% برسد.
محصولات مختلف شاهدانه نیز تفاوت چشمگیری با یکدیگر دارند: میانگین غلظت THC در ماری‌جوانا بین 1 تا 5% است؛ مقدار THC در حشیش بین 5 تا 15% و میانگین آن در روغن حشیش 20% است. مقدار THC در دوزهای ماری‌جوانا برای مصرف تفریحی بسیار متغیر است و هرچه مقدار THC در ماری‌جوانا کمتر باشد، مصرف‌کننده باید مقدار بیشتری مصرف کند تا اثرات مطلوب را تجربه کند.
آماده‌سازی فراصوتی نمونه برای آنالیز مقدار THC به کار می‌رود
- برای کنترل کیفیت محصولات THC با مصرف تفریحی،
- برای تعیین کیفیت محصولات دارویی THC،
- برای تمایز شاهدانهٔ مخدر از شاهدانهٔ الیافی.
برای آنالیز THC معمولاً از روش‌های کروماتوگرافی زیر استفاده می‌شود: کروماتوگرافی لایه‌نازک (TLC)، کروماتوگرافی گازی (GC) و کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC)
پروتکل آماده‌سازی فراصوتی نمونه برای آنالیز TLC
آماده‌سازی نمونه: برای آماده‌سازی نمونه‌ها، مواد گیاهی خشک‌شده باید خیسانده و آسیاب شوند تا پودری همگن به دست آید. برای استخراج فراصوتی، 500mg از پودر گیاه شاهدانه و 5mL مخلوط متانول–کلروفرم (با نسبت 9 : 1) در یک ویال مخلوط می‌شوند. فراصوت‌دهی را می‌توان با استفاده از سونیکاتور مجهز به میکروتیپ، دستگاه VialTweeter یا دستگاه فراصوتی CupHorn انجام داد. زمان فراصوت‌دهی حدود 5 min است. سپس اجازه دهید نمونه دست‌کم 5 min ساکن بماند. مایع رویی شفاف را با مخلوط استخراج رقیق کنید (v/v: 1 : 10). THC آزاد: 1μL روی صفحهٔ TLC
دکربوکسیلاسیون: 100μL از عصاره تا خشک‌شدن کامل تبخیر می‌شود. باقی‌مانده در دمای 180℃ به مدت 4 min حرارت داده می‌شود. 500μL متانول–کلروفرم (v/v 9 : 1) اضافه کنید. به مدت 5 min فراصوت‌دهی کنید. مایع رویی شفاف را با مخلوط استخراج رقیق کنید (v/v: 1 : 10).
کالیبراسیون: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
سیلیکاژل TLC از نوع F-254، Merck 5729
اسکنر TLC مدل II، نرم‌افزار CATS3، Camag Muttenz؛ شوینده:
اتیل استات : تولوئن : کلروفرم = 3 : 17 : 0٫25 (v/v/v)
مشتق‌سازی پس از کروماتوگرافی: نمک Fast Blue با غلظت 0٫1% در NaOH با غلظت 0٫1 M
دانسیتومتری در 550 nm
تتراهیدروکانابینول (Δ9-THC) برای آنالیز و استخراج
پروتکل آماده‌سازی فراصوتی نمونه برای آنالیز GC
آماده‌سازی نمونه: مواد گیاهی خشک‌شده خیسانده و آسیاب می‌شوند تا پودری همگن به دست آید. برای استخراج، 500mg از پودر گیاه شاهدانه و 10mL مخلوط متانول–هگزان (با نسبت 9 : 1) در یک ویال مخلوط می‌شوند. فراصوت‌دهی را می‌توان با استفاده از دستگاه فراصوتی پروبی مجهز به میکروتیپ، دستگاه VialTweeter یا دستگاه فراصوتی CupHorn انجام داد. نمونه را به مدت 15–20 min فراصوت‌دهی کنید. نمونه را تکان دهید و اجازه دهید دست‌کم 5 min ساکن بماند. مایع رویی شفاف را با مخلوط استخراج رقیق کنید (v/v 1: 20).
دکربوکسیلاسیون: در اینسرت
دمای انژکتور: 250℃
کالیبراسیون: 5 ng/μL تا 250 ng/μL
GC: دستگاه HP 6890 مجهز به 5973 MSD و نمونه‌بردار خودکار 7683؛ حجم تزریق: 1μL، زمان حالت بدون تقسیم جریان: 2 min.
ستون: HP-5 MS، طول 30m، قطر 250 μm، ضخامت فیلم 0٫25 μm
گاز حامل: He، فشار 35 psi، دبی ثابت: 4 mL/min.
آون: 100℃ به مدت 1min.؛ افزایش دما با نرخ 15℃ /min. تا 280℃؛ 280℃ به مدت 5 min.؛ MSD: حالت SCAN: m/e 35 – 550
پروتکل آماده‌سازی فراصوتی نمونه برای آنالیز HPLC
آماده‌سازی نمونه (مشابه آماده‌سازی برای GC): مواد گیاهی خشک‌شده خیسانده و آسیاب می‌شوند تا پودری همگن به دست آید. برای استخراج، 500mg از پودر گیاه شاهدانه و 10mL مخلوط متانول–هگزان (با نسبت 9 : 1) در یک ویال مخلوط می‌شوند. فراصوت‌دهی را می‌توان با استفاده از سونیکاتور پروبی مجهز به میکروتیپ، دستگاه VialTweeter یا دستگاه فراصوتی CupHorn انجام داد. نمونه را به مدت 15–20 min فراصوت‌دهی کنید. نمونه را تکان دهید و اجازه دهید دست‌کم 5 min ساکن بماند. مایع رویی شفاف را با مخلوط استخراج رقیق کنید (v/v 1: 20).
VialTweeter برای آماده‌سازی فراصوتی نمونه
پیش‌ستون: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
ستون: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
شوینده: ایزوکراتیک، 36% محلول TEAP با غلظت 25 mmol/L، 64% استونیتریل؛ اندازه‌گیری کمی در 210nm
کالیبراسیون: 0٫001 – 0٫10 μg/μL
کالیبراسیون: 0٫01 – 0٫50 μg/μL
زمان بازداری: برای CBD: 6٫2 min.؛ برای CBN: 8٫0 min.؛ برای THC: 9٫4 min.؛ برای THC-A: 11٫0 min
حد تشخیص (LOD): CBD 0٫5%، CBN 0٫5%، THC 0٫15%، THC-A 1%
UP200St مجهز به میکروتیپ برای فراصوت‌دهی نمونه
منابع و مراجع
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Forensisch chemische Analysen von THC haltigem Hanfkraut. Von der DC via GC zur HPLC-Methode. Applica 2006.
دانستنی‌های مفید
ماری‌جوانا از گل‌های خشک‌شده و برگ‌ها و ساقه‌های زیر آن‌ها در گیاه مادهٔ Cannabis تشکیل می‌شود. این شکل، رایج‌ترین شکل مصرف است و تقریباً 3% تا 20% THC دارد. مقدار THC در برخی انواع خاص ماری‌جوانا که به‌شدت اصلاح نژاد شده‌اند، به بیش از 30% می‌رسد. ماری‌جوانا مادهٔ اولیهٔ تمام انواع دیگر محصولات شاهدانهٔ حاوی THC است. برای تبدیل فراوان‌ترین کانابینوئید، یعنی اسید تتراهیدروکانابینولیک (THCA)، به THC روان‌گردان، باید فرایند دکربوکسیلاسیون آغاز شود. بنابراین، شاهدانه و عصاره‌های آن باید حرارت داده شوند یا آب‌زدایی شوند تا دکربوکسیلاسیون رخ دهد.
کیف به پودری غنی از تریکوم‌ها گفته می‌شود که با الک‌کردن برگ‌ها و گل‌های شاهدانه به دست می‌آید. این ماده به‌صورت پودر مصرف می‌شود یا پس از فشرده‌سازی در قالب‌های حشیش به کار می‌رود.
حشیش یا هش، قالب یا گلوله‌ای از رزین تغلیظ‌شده است که از کیف فشرده یا از رزینی تهیه می‌شود که از سطح گیاه تراشیده و به شکل گلوله درآورده می‌شود. بسته به خلوص و منشأ، رنگ آن از سیاه تا قهوه‌ای طلایی متغیر است. حشیش را می‌توان به‌صورت خوراکی یا تدخینی مصرف کرد؛ برای مثال در پیپ، قلیان، بانگ، بابلر، دستگاه بخارساز، با استفاده از چاقوی داغ، به‌صورت سیگار دست‌پیچ، مخلوط با غنچه‌های شاهدانه یا تنباکو، با کشیدن دود از بطری، یا به‌عنوان یکی از مواد تشکیل‌دهندهٔ غذا.
تنتور شاهدانه به عصارهٔ کانابینوئیدها در الکل گفته می‌شود. برای تهیهٔ تنتور، کانابینوئیدها با استفاده از الکل تقطیری با درصد الکل بالا (عمدتاً الکل غلات) از گیاه شاهدانه استخراج می‌شوند.
روغن حشیش ماتریسی رزینی از کانابینوئیدهاست که با استخراج با حلال تولید می‌شود و به شکل توده‌ای سفت‌شده یا گران‌رو درمی‌آید. روغن حشیش به دلیل مقدار بالای ترکیب روان‌گردان، یکی از قوی‌ترین محصولات شاهدانه است. استفاده از روغن حشیش استخراج‌شده با بوتان و دی‌اکسید کربن فوق‌بحرانی، اخیراً محبوبیت فزاینده‌ای پیدا کرده است.
خیسانده‌ها به انواع مختلف خیسانده‌های شاهدانه گفته می‌شود که تفاوت آن‌ها ناشی از تنوع گستردهٔ حلال‌های غیرفراری است که می‌توان برای تهیهٔ خیساندهٔ شاهدانه استفاده کرد. برای تهیهٔ چنین خیسانده‌ای، مواد گیاهی شاهدانه با یک حلال مخلوط و سپس فشرده و صاف می‌شوند تا روغن‌ها از گیاه به حلال منتقل شوند. کرهٔ کاکائو، کرهٔ لبنی، روغن خوراکی، گلیسیرین و مرطوب‌کننده‌های پوست از حلال‌های رایج هستند.
ماری‌جوانای پزشکی به استفاده از گیاه Cannabis به‌عنوان درمان گیاهی توصیه‌شده از سوی پزشک، و نیز استفاده از THC و کانابینوئیدهای سنتزی گفته می‌شود. این نوع مصرف عموماً به نسخهٔ پزشک نیاز دارد و توزیع معمولاً در چارچوب تعیین‌شده توسط قوانین محلی انجام می‌شود. چندین مطالعهٔ پژوهشی نشان داده‌اند که استفاده از شاهدانه یا مشتقات آن در مقابله با مواردی مانند تهوع و استفراغ ناشی از شیمی‌درمانی، درد نوروپاتیک و مولتیپل اسکلروزیس مؤثر است.