Ultraheli proovide ettevalmistus THC analüüsiks
- Ultraheliekstraktsioon on tõestatud meetod THC tootmiseks, kuid seda saab kasutada ka analüütilistel eesmärkidel.
- Ultraheli töötlus (sonikeerimine) on levinud proovide ettevalmistamise meetod, mida kasutatakse THC kogusisalduse analüüsimiseks kanepitoodetes.
- Ultraheliekstraktsiooni rakendatakse proovidele enne TLC-, GC- ja HPLC-analüüsi.
THC ultraheliekstraktsioon
THC ehk tetrahüdrokannabinool (delta-9-tetrahüdrokannabinool) on keemiline ühend, mis põhjustab enamiku marihuaana psühholoogilistest toimetest. Kanepiliigil on teada üle 400 erineva tõu. Sõltuvalt konkreetsest kanepitõust võib kanep sisaldada vaid 0,3 wt% THC-d. Teistel tõugudel võib THC sisaldus ulatuda kuni 20 wt%-ni.
Eri kanepitooted erinevad samuti oluliselt: marihuaanas jääb keskmine THC kontsentratsioon vahemikku 1 kuni 5%; hašišis on THC sisaldus 5 kuni 15% ning hašišiõlis keskmiselt 20%. THC sisaldus marihuaana meelelahutuslikes annustes on väga varieeruv ning mida madalam on marihuaana THC sisaldus, seda rohkem peab kasutaja tarbima, et soovitud toimeid kogeda.
Ultraheli proovide ettevalmistust kasutatakse THC sisalduse analüüsimiseks
- meelelahutuslike THC toodete kvaliteedikontrolliks,
- farmatseutiliste THC toodete kvaliteedi määramiseks,
- uimastikanepi ja kiukanepi eristamiseks.
THC analüüsiks kasutatakse tavaliselt järgmisi kromatograafilisi meetodeid: õhukesekihikromatograafia (TLC), gaasikromatograafia (GC) ja kõrgefektiivne vedelikkromatograafia (HPLC)
Ultraheli proovide ettevalmistuse protokoll TLC-analüüsiks
Proovide ettevalmistus: proovide valmistamiseks tuleb kuivatatud taimne materjal leotada ja jahvatada homogeenseks pulbriks. Ultraheliekstraktsiooniks segatakse viaalis 500mg kanepitaime pulbrit ja 5mL metanooli-kloroformi segu (suhe 9 : 1). Ultraheli töötlust (sonikeerimist) saab teostada, kasutades sonikaatorit mikrootsakuga, seadet VialTweeter või ultraheli CupHorn. Sonikeerimise aeg on ligikaudu 5 min. Seejärel laske proovil seista vähemalt 5 min. Lahjendage selge supernatant ekstraktsioonisegul (v/v: 1 : 10). Vaba THC: 1μL TLC-plaadile
Dekarboksüleerimine: 100μL ekstrakti aurustatakse kuivaks. Jääki kuumutatakse 180℃ juures 4 min. Lisage 500μL metanooli-kloroformi (v/v 9 : 1). Sonikeerige 5 min. Lahjendage selge supernatant ekstraktsioonisegul (v/v: 1 : 10).
Kalibreerimine: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
TLC silikageel F-254, Merck 5729
TLC skanner II, tarkvara CATS3, Camag Muttenz Eluent:
Etüülatsetaat : Tolueen : Kloroform = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Postkromatograafiline derivatiseerimine: Fast Blue Salt 0,1% 0,1 M NaOH-s
Densitomeetria 550 nm juures
Tetrahüdrokannabinool (Δ9-THC) analüüsiks ja ekstraheerimiseks
Ultraheli proovide ettevalmistuse protokoll GC-analüüsiks
Proovide ettevalmistus: kuivatatud taimne materjal leotatakse ja jahvatatakse homogeenseks pulbriks. Ekstraheerimiseks segatakse viaalis 500mg kanepitaime pulbrit ja 10mL metanooli-heksaani segu (suhe 9 : 1). Ultraheli töötlust (sonikeerimist) saab teostada, kasutades sondtüüpi ultraheliseadet mikrootsakuga, seadet VialTweeter või ultraheli CupHorn. Sonikeerige proovi 15-20 min. Raputage proovi ja laske sel seista vähemalt 5 min. Lahjendage selge supernatant ekstraktsioonisegul (v/v 1: 20).
Dekarboksüleerimine: sisetükis
Sissepritseseadme temperatuur 250℃
Kalibreerimine: 5 ng/μL kuni 250 ng/μL
GC: HP 6890 koos 5973 MSD ja 7683 automaatproovivõtjaga, sissepritse: 1μL, splitless-aeg: 2 min.
Kolonn: HP-5 MS, 30m, läbimõõt 250 μm, kilepaksus 0,25 μm
Kandegaas: He, 35 psi, konstantne vooluhulk: 4 mL/min.
Ahi: 100℃ 1min.; temperatuuri tõus 15℃ /min. kuni 280℃; 280℃ 5 min. MSD: SCAN: m/e 35 – 550
Ultraheli proovide ettevalmistuse protokoll HPLC-analüüsiks
Proovide ettevalmistus (analoogne GC-ettevalmistusele): kuivatatud taimne materjal leotatakse ja jahvatatakse homogeenseks pulbriks. Ekstraheerimiseks segatakse viaalis 500mg kanepitaime pulbrit ja 10mL metanooli-heksaani segu (suhe 9 : 1). Ultraheli töötlust (sonikeerimist) saab teostada, kasutades sondtüüpi sonikaatorit mikrootsakuga, seadet VialTweeter või ultraheli CupHorn. Sonikeerige proovi 15-20 min. Raputage proovi ja laske sel seista vähemalt 5 min. Lahjendage selge supernatant ekstraktsioonisegul (v/v 1: 20).
VialTweeter ultraheli proovide ettevalmistuseks
Eelkolonn: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Kolonn: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Eluent: isokraatiline 36% TEAP 25 mmol/L, 64% atsetonitriil, kvantifitseerimine 210nm juures
Kalibreerimine: 0,001 – 0,10 μg/μL
Kalibreerimine: 0,01 – 0,50 μg/μL
Retentsiooniaeg: CBD puhul: 6,2 min.; CBN puhul: 8,0 min.; THC puhul: 9,4 min.; THC-A puhul: 11,0 min
LOD: CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St mikrootsakuga proovide ultraheli töötluseks (sonikeerimiseks)
Kirjandus/viited
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Forensisch chemische Analysen von THC haltigem Hanfkraut. Von der DC via GC zur HPLC-Methode. Applica 2006.
Teada tasuv
Marihuaana koosneb emase kanepitaime kuivatatud õitest ning õisikuid toetavatest lehtedest ja vartest. See on kõige laialdasemalt tarbitav vorm ning sisaldab ligikaudu 3% kuni 20% THC-d. Spetsiifilised, tugevalt aretatud marihuaanavormid saavutavad THC sisalduse üle 30%. Marihuaana on lähtematerjal kõigile teistele THC-d sisaldavatele kanepitoodete variantidele. Et muuta kõige rikkalikum kannabinoid, tetrahüdrokannabinoolhape (THCA), psühhoaktiivseks THC-ks, tuleb käivitada dekarboksüleerimisprotsess. Seetõttu tuleb kanepit ja selle ekstrakte dekarboksüleerimise esilekutsumiseks kuumutada või dehüdreerida.
Kief on trihhoomirikas pulber, mis on sõelutud kanepi lehtedest ja õitest. Seda tarbitakse kas pulbrina või kokkupressituna ning kasutatakse hašišikookides.
Hašiš ehk hash on kontsentreeritud vaigukook või -pall, mis on toodetud kas pressitud kiefist või taime pinnalt kraabitud vaigust, mis on rullitud kuulikesteks. Seda esineb erinevates värvitoonides mustast kuldpruunini, sõltuvalt puhtusest ja päritolust. Seda võib tarbida suukaudselt või suitsetada, nt piibus, vesipiibus, bongis, bubbleris, aurustis, kuuma noa abil, suitsetada jointides, segatuna kanepipungade või tubakaga, suitsetada pudelitõmmetena või kasutada toidu koostisosana.
Kanepitinktuur on kannabinoidide ekstrakt alkoholis. Kannabinoidid ekstraheeritakse kanepitaimest kõrge alkoholisisaldusega piiritusega (enamasti viljaalkohol), et valmistada tinktuur.
Hašišiõli on kannabinoidide vaigune maatriks, mis on toodetud lahustiekstraktsiooniga ja vormitud kõvaks või viskoosseks massiks. Hašišiõli on üks kõige võimsamaid kanepitooteid oma kõrge psühhoaktiivse ühendi sisalduse tõttu. Butaanis ja ülekriitilises süsinikdioksiidis ekstraheeritud hašišiõli kasutamine on hiljuti muutunud üha populaarsemaks.
Infusioonid on erinevat tüüpi kanepiinfusioonid, mis erinevad üksteisest kasutatavate mittelenduvate lahustite suure valiku poolest, mida saab kanepiinfusiooni valmistamiseks kasutada. Sellise infusiooni valmistamiseks segatakse kanepitaime materjal lahustiga ning seejärel pressitakse ja filtreeritakse, et viia õlid taimest lahustisse. Kakaovõid, piimavõid, toiduõli, glütseriini ja nahaniisutajaid kasutatakse tavaliselt lahustitena.
Meditsiiniline marihuaana tähendab kanepitaime kasutamist arsti soovitatud taimse ravina, samuti sünteetilise THC ja kannabinoidide kasutamist. Selline kasutus nõuab üldjuhul retsepti ning levitamine toimub tavaliselt kohalike õigusaktidega määratletud raamistikus. Mitmed uuringud on näidanud, et kanepi või selle derivaatide kasutamine mõjub nt keemiaravist põhjustatud iivelduse ja oksendamise, neuropaatilise valu ning hulgiskleroosi vastu.