Ultrazvuková příprava vzorku pro analýzu THC
- Ultrazvuková extrakce je osvědčená metoda pro výrobu THC, ale lze ji použít i pro analytické účely.
- Ultrazvuku je běžná metoda přípravy vzorku používaná pro analýzu celkového obsahu THC v konopných produktech.
- Ultrazvuková extrakce se aplikuje na vzorky před analýzou TLC, GC a HPLC.
Ultrazvuková extrakce THC
THC neboli tetrahydrokanabinol (delta-9-tetrahydrokanabinol) je chemická látka, která způsobuje většinu psychologických účinků marihuany. Pro druhy konopí může být známo více než 400 různých kmenů. V závislosti na konkrétní odrůdě konopí může mít konopí pouhých 0,3 hm. % THC. U jiných kmenů může obsah THC dosáhnout až 20 % hmotn.
Také různé konopné produkty se výrazně liší: Průměrná koncentrace THC v marihuaně se tedy pohybuje mezi 1 až 5 %; v hašiši se obsah THC pohybuje mezi 5 až 15 % a v hašišovém oleji je to v průměru 20 %. THC v rekreačních dávkách marihuany je velmi variabilní a čím nižší je obsah THC v marihuaně, tím více ho musí uživatel konzumovat, aby pocítil požadované účinky.
K analýze obsahu THC se používá ultrazvuková příprava vzorku
- pro kontrolu kvality rekreačních produktů THC,
- pro stanovení kvality farmaceutických produktů THC,
- pro rozlišení drogy-konopí a vlákna-konopí.
Pro analýzu THC se běžně používají následující chromatografické metody: tenkovrstvá chromatografie (TLC), plynová chromatografie (GC) a vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC)
Ultrazvukový protokol pro přípravu vzorku pro analýzu TLC
Příprava vzorku: Pro přípravu vzorků musí být sušený rostlinný materiál macerován a rozemlet na homogenní prášek. Pro ultrazvukovou extrakci se v lahvičce smíchá 500 mg prášku z rostliny konopí a 5 ml směsi methanolu a chloroformu (poměr 9 : 1). Sonikace může být aplikována pomocí Ultrazvukový přístroj s mikro hrotem, VialTweeter nebo ultrazvukový Roh Poháru. Doba sonikace trvá cca. 5 min. Poté nechte vzorek odpočívat po dobu nejméně 5 minut. Čirý supernatant se zředí extrakční směsí (v/v: 1 : 10). Volné THC: 1 μL na TLC desce
Dekarboxylace: 100 μl extraktu se odpaří do sucha. Zbytek se zahřívá na 180 °C po dobu 4 minut. Přidejte 500 μl methanol-chloroformu (v/v 9 : 1). Sonikovat po dobu 5 min. Čirý supernatant se zředí extrakční směsí (v/v: 1 : 10).
Kalibrace: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
TLC silikagel F-254, Merck 5729
TLC skener II, software CATS3, Camag Muttenz Eluens:
Ethylacetát : Toluol : Chloroform = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Postchromatografická derivatizace: Rychle modrá sůl 0,1 % v 0,1 M NaOH
Denzitometrie při 550 nm
Tetrahydrokanabinol (Δ9-THC) pro analýzu a extrakci
Ultrazvukový protokol pro přípravu vzorku pro analýzu GC
Příprava vzorku: Sušený rostlinný materiál se maceruje a rozemele na homogenní prášek. Pro extrakci se v lahvičce smíchá 500 mg prášku z rostlin konopí a 10 ml směsi methanolu a hexanu (poměr 9 : 1). Sonikace může být aplikována pomocí a Ultrazvukové zařízení typu sondy s mikro hrotem, VialTweeter nebo ultrazvukový Roh Poháru. Sonikujte vzorek po dobu 15-20 min. Vzorek se protřepe a nechá se odpočívat alespoň 5 minut. Čirý supernatant se zředí extrakční směsí (v/v 1: 20).
Dekarboxylace: ve vložce
Teplota vstřikovače 250°C
Kalibrace: 5 ng/μl až 250 ng/μl
GC: HP 6890 s 5973 MSD a 7683 autosampler vstřikování: 1 μl, splitless čas: 2 min.
Kolona: HP-5 MS, 30 m, průměr 250 μm, tloušťka filmu 0,25 μm
Nosný plyn: He, 35 psi, konstantní průtok: 4 ml/min.
Trouba: 100 °C po dobu 1 minuty; zvýšení teploty o 15 °C / min. na 280 °C; 280 °C po dobu 5 min. MSD: SKENOVÁNÍ: m/e 35 – 550
Ultrazvukový protokol přípravy vzorku pro analýzu HPLC
Příprava vzorku (analogie GC prep): Vysušený rostlinný materiál se maceruje a rozemele na homogenní prášek. Pro extrakci se v lahvičce smíchá 500 mg prášku z rostlin konopí a 10 ml směsi methanolu a hexanu (poměr 9 : 1). Sonikace může být aplikována pomocí a ultrazvukový přístroj typu sondy s mikro hrotem, VialTweeter nebo ultrazvukový Roh Poháru. Sonikujte vzorek po dobu 15-20 min. Vzorek se protřepe a nechá se odpočívat alespoň 5 minut. Čirý supernatant se zředí extrakční směsí (v/v 1: 20).
VialTweeter pro ultrazvukovou přípravu vzorků
Prekolona: LiChrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50963)
Sloupec: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Eluent: izokratický 36% TEAP 25 mmol/l, 64% acetonitril, kvantifikace při 210 nm
Kalibrace: 0,001 – 0,10 μg/μL
Kalibrace: 0,01 – 0,50 μg/μl
Retenční čas: pro CBD: 6,2 min.; pro CBN: 8,0 min.; pro THC: 9,4 min.; pro THC-A: 11,0 min
LOD: CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St s mikrohrotem pro sonikaci vzorku
Literatura/Odkazy
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Forensisch chemische Analysen von THC haltigem Hanfkraut. Von der DC via GC zur HPLC-Methode. Applica 2006.
Fakta, která stojí za to vědět
marihuana se skládá ze sušených květů a subtilních listů a stonků samičí rostliny konopí. Jedná se o nejrozšířenější konzumovanou formu a obsahuje přibližně 3 % až 20 % THC. Specifické, vysoce šlechtěné formy marihuany dosahují obsahu THC více než 30%. Marihuana je zdrojovým materiálem všech ostatních odrůd konopných produktů obsahujících THC. K přeměně nejrozšířenějšího kanabinoidu, kyseliny tetrahydrokanabinolové (THCA), na psychoaktivní THC, musí být zahájen proces dekarboylace. Proto musí být konopí a jeho extrakty zahřáté nebo dehydratované, aby došlo k dekarboxylaci.
Kief Odkazuje na prášek bohatý na trichomy, který se prosévá z listů a květů konopí. Konzumuje se buď ve formě prášku, nebo lisovaný a používá se do hašišových koláčů.
hašiš Nebo hašiš je koncentrovaný pryskyřičný koláč nebo koule, která se vyrábí buď z lisovaného skiefu, nebo z pryskyřice, která se seškrábne z povrchu rostliny a sroluje se do kuliček. Vyskytuje se v různých barvách od černé po zlatohnědou v závislosti na čistotě a zdroji. Může být konzumován perorálně nebo kouřen, např. v dýmce, vodní dýmce, bongu, bublinkovači, vaporizéru, pomocí horkého nože, uzen v jointech, smíchán s konopnými pupeny nebo tabákem, kouřit jako lahve nebo použit jako přísada do potravin.
konopná tinktura odkazuje na extrakt kanabinoidů v alkoholu. Kanabinoidy se extrahují z rostliny konopí pomocí vysoce odolných lihovin (většinou obilného alkoholu) k vytvoření tinktury.
hašišový olej je pryskyřičná matrice kanabinoidů produkovaná extrakcí rozpouštědlem, zformovaná do ztvrdlé nebo viskózní hmoty. Hašišový olej je jedním z nejúčinnějších konopných produktů díky vysokému obsahu psychoaktivních látek. Použití hašišového oleje extrahovaného v butanu a superkritickém oxidu uhličitém si v poslední době získává stále větší oblibu.
Infuze Odkazují na různé druhy konopných nálevů, které se od sebe liší širokou škálou netěkavých rozpouštědel, která lze použít k výrobě konopného nálevu. Pro přípravu takového nálevu se rostlinná hmota konopí smíchá s rozpouštědlem a poté se lisuje a filtruje, aby se oleje z rostliny přenesly do rozpouštědla. Kakaové máslo, mléčné máslo, kuchyňský olej, glycerin a zvlhčovače pokožky jsou běžně používaná rozpouštědla.
Lékařská marihuana odkazuje na použití rostliny konopí jako lékařsky doporučené bylinné terapie, stejně jako syntetické THC a kanabinoidy. Toto použití obecně vyžaduje lékařský předpis a distribuce se obvykle provádí v rámci definovaném místními zákony. Několik výzkumných studií prokázalo, že užívání konopí nebo jeho derivátů působí např. proti nevolnosti a zvracení vyvolaným chemoterapií, neuropatické bolesti a roztroušené skleróze.