Ultrazvučna priprema uzoraka za THC analizu
- Ultrazvučna ekstrakcija je dokazana metoda za proizvodnju THC-a, ali se može koristiti i u analitičke svrhe.
- Ultrazvuk je uobičajena metoda pripreme uzorka koja se koristi za analizu ukupnog sadržaja THC-a u proizvodima od kanabisa.
- Ultrazvučna ekstrakcija se primjenjuje na uzorke prije TLC, GC i HPLC analize.
Ultrazvučna ekstrakcija THC-a
THC ili tetrahidrokanabinol (delta-9-tetrahidrokanabinol) je hemikalija koja uzrokuje većinu psiholoških efekata marihuane. Za vrstu kanabisa poznato je više od 400 različitih sojeva. Ovisno o specifičnom soju kanabisa, kanabis može imati samo 0,3 težinskih % THC-a. Kod ostalih sojeva sadržaj THC-a može doseći i do 20 tež.%.
Takođe različiti proizvodi od kanabisa značajno variraju: Tako se kreće prosječna koncentracija THC-a u marihuani između 1 i 5%; u hašišu sadržaj THC-a je između 5 i 15%, au ulju hašiša 20%. THC u rekreativnim dozama marihuane je vrlo varijabilan i što je niži sadržaj THC-a u marihuani, korisnik mora više konzumirati da doživi željene efekte.
Ultrazvučna priprema uzorka koristi se za analizu sadržaja THC-a
- za kontrolu kvaliteta rekreativnih THC proizvoda,
- za određivanje kvaliteta farmaceutskih THC proizvoda,
- za razlikovanje medikamentozne konoplje i vlaknaste konoplje.
Za THC analizu obično se koriste sljedeće hromatografske metode: hromatografija tankog sloja (TLC), gasna hromatografija (GC) i tečna hromatografija visokih performansi (HPLC)
Protokol za pripremu ultrazvučnog uzorka za TLC analizu
Priprema uzorka: Za pripremu uzoraka, osušeni biljni materijal mora biti maceriran i samljeven u homogeni prah. Za ultrazvučnu ekstrakciju, 500 mg praha biljke kanabis i 5 mL mješavine metanola i hloroforma (omjer 9 : 1) se pomiješaju u bočici. Sonikacija se može primijeniti pomoću ultrasonicator sa mikro vrhom, VialTweeter ili ultrazvučni CupHorn. Vrijeme obrade ultrazvukom traje cca. 5 min. Nakon toga ostavite uzorak da odstoji najmanje 5 minuta. Razblažite bistri supernatant sa smešom za ekstrakciju (v/v: 1 : 10). Slobodni THC: 1μL na TLC ploči
Dekarboksilacija: 100 μL ekstrakta se ispari do suva. Ostatak se zagrijava na 180℃ 4 min. Dodati 500 μL metanol-hloroforma (v/v 9 : 1). Sonicate 5 min. Razblažite bistri supernatant sa smešom za ekstrakciju (v/v: 1 : 10).
Kalibracija: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
TLC silika gel F-254, Merck 5729
TLC skener II, softver CATS3, Camag Muttenz Eluens:
Etilacetat : Toluol : Hloroform = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Posthromatografska derivatizacija: brza plava sol 0,1% u 0,1 M NaOH
Denzitometrija na 550 nm
Tetrahidrokanabinol (Δ9-THC) za analizu i ekstrakciju
Protokol za pripremu ultrazvučnog uzorka za GC analizu
Priprema uzorka: Osušeni biljni materijal se macerira i melje u homogeni prah. Za ekstrakciju, 500 mg praha biljke kanabis i 10 mL mješavine metanola i heksana (omjer 9 : 1) se pomiješaju u bočici. Sonikacija se može primijeniti pomoću a ultrazvučni uređaj tipa sonde sa mikro vrhom, VialTweeter ili ultrazvučni CupHorn. Sonikirajte uzorak 15-20 min. Protresite uzorak i ostavite da odstoji najmanje 5 minuta. Razblažite bistri supernatant sa smešom za ekstrakciju (v/v 1:20).
Dekarboksilijacija: u umetku
Temperatura injektora 250℃
Kalibracija: 5 ng/μL do 250 ng/μL
GC: HP 6890 sa 5973 MSD i 7683 autosampler injekcijom: 1μL, vrijeme bez podjele: 2 min.
Kolona: HP-5 MS, 30m, prečnik 250 μm, debljina filma 0,25 μm
Gas nosač: He, 35 psi, konstantan protok: 4 mL/min.
Pećnica: 100℃ 1 min.; porast temperature od 15℃ /min. do 280℃; 280℃ 5 min. MSD: SKENIRANJE: m/e 35 – 550
Protokol za pripremu ultrazvučnog uzorka za HPLC analizu
Priprema uzorka (analogno GC prep): Osušeni biljni materijal se macerira i melje u homogeni prah. Za ekstrakciju, 500 mg praha biljke kanabis i 10 mL mješavine metanola i heksana (omjer 9 : 1) se pomiješaju u bočici. Sonikacija se može primijeniti pomoću a Ultrasonikator tipa sonde sa mikro vrhom, VialTweeter ili ultrazvučni CupHorn. Sonikirajte uzorak 15-20 min. Protresite uzorak i ostavite da odstoji najmanje 5 minuta. Razblažite bistri supernatant sa smešom za ekstrakciju (v/v 1:20).
VialTweeter za ultrazvučnu pripremu uzorka
Predkolona: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Kolona: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Eluent: izokratični 36% TEAP 25 mmol/L, 64% acetonitril kvantifikacija na 210nm
Kalibracija: 0,001 – 0,10 μg/μL
Kalibracija: 0,01 – 0,50 μg/μL
Vrijeme zadržavanja: za CBD: 6,2 min.; za CBN: 8,0 min.; za THC: 9,4 min.; za THC-A: 11,0 min
LOD: CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St sa mikro vrhom za sonikaciju uzorka
Literatura/Reference
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Forensisch chemische Analysen von THC haltigem Hanfkraut. Von der DC preko GC zur HPLC-metoda. Applica 2006.
Činjenice koje vrijedi znati
marihuana sastoji se od osušenog cvijeća i potpornih listova i stabljika ženske biljke kanabisa. Ovo je najšire konzumirani oblik i sadrži cca. 3% do 20% THC-a. Specifični, visoko uzgojeni oblici marihuane dostižu sadržaj THC-a veći od 30%. Marihuana je izvorni materijal svih drugih vrsta proizvoda od kanabisa koji sadrže THC. Da bi se najzastupljeniji kanabinoid, tetrahidrokanabinolna kiselina (THCA), pretvorio u psihoaktivni THC, mora se pokrenuti proces dekarboilacije. Stoga se kanabis i njegovi ekstrakti moraju zagrijati ili dehidrirati kako bi izazvali dekarboksilaciju.
kief odnosi se na prah, bogat trihomima, koji je prosijan iz listova i cvjetova kanabisa. Konzumira se u obliku praha ili komprimuje i koristi se u kolačima od hašiša.
Hašiš ili hašiš je koncentrirani smolni kolač ili kuglica koja se proizvodi ili od prešanog kora ili od smole koja se sastruže s površine biljke i uvalja u kuglice. Javlja se u raznim bojama od crne do zlatno smeđe u zavisnosti od čistoće i izvora. Može se konzumirati oralno ili pušiti, npr. u luli, nargili, bongu, mjehuriću, isparivaču, pomoću vrućeg noža, pušiti u džointima, pomiješati sa pupoljcima kanabisa ili duhanom, pušiti kao boce ili koristiti kao sastojak u hrani.
tinktura kanabisa odnosi se na ekstrakt kanabinoida u alkoholu. Kanabinoidi se ekstrahuju iz biljke kanabisa upotrebom jakih alkoholnih pića (uglavnom alkohola od žitarica) za stvaranje tinkture.
Hash ulje je smolasta matrica kanabinoida proizvedena ekstrakcijom rastvaračem, formirana u stvrdnutu ili viskoznu masu. Haš ulje je jedan od najmoćnijih proizvoda od kanabisa zbog visokog nivoa psihoaktivnog jedinjenja. Upotreba haš ulja ekstrahovanog u butanu i superkritičnom ugljičnom dioksidu u posljednje vrijeme dobija sve veću popularnost.
Infuzije odnose se na različite vrste infuzija kanabisa koje se međusobno razlikuju po velikom broju nehlapljivih otapala koji se mogu koristiti za proizvodnju infuzije kanabisa. Za pripremu takve infuzije, biljna tvar kanabisa se pomiješa s rastvaračem, a zatim se pritisne i filtrira kako bi se ulja iz biljke prenijela u rastvarač. Kakao puter, mliječni puter, ulje za kuhanje, glicerin i hidratantna sredstva za kožu su najčešće korišteni rastvarači.
medicinska marihuana odnosi se na upotrebu biljke kanabis kao biljnu terapiju koju preporučuje liječnik, kao i sintetički THC i kanabinoide. Ova upotreba generalno zahteva recept, a distribucija se obično vrši u okviru definisanom lokalnim zakonima. Nekoliko istraživačkih studija pokazalo je da upotreba kanabisa ili njegovih derivata djeluje protiv npr. mučnine i povraćanja izazvane kemoterapijom, neuropatskog bola i multiple skleroze.