تطبيقات الموجات فوق الصوتية في فيروس جدري القرود
الموجات فوق الصوتية هي طريقة معالجة مهمة لعزل فيروس جدري القرود (MPXV) من العينات التحليلية ، لتجزئة الحمض النووي للفيروس وكذلك في تصنيع لقاح جدري القردة. لإعداد العينات قبل التشخيص والتحليل (PCR ، ELISA وما إلى ذلك) ، يتم استخدام الموجات فوق الصوتية لتحليل الخلايا من أجل إطلاق فيروس جدري القرود من داخل الخلية و / أو لتفتيت الحمض النووي. في إنتاج اللقاح ، تتراوح التطبيقات من إعداد جسيمات الفيروس / الحمض النووي ، والتغليف في ناقلات الأدوية وصياغة اللقاح.
أدناه يمكنك العثور على معلومات مفصلة حول إعداد عينة فيروس جدري القرود بالموجات فوق الصوتية وكذلك إنتاج لقاح MPXV بمساعدة الموجات فوق الصوتية.
ما ستجده في هذه الصفحة:
- التحلل بالموجات فوق الصوتية لاستخراج فيروس جدري القرود
- تجزئة بالموجات فوق الصوتية من الحمض النووي لفيروس جدري القرود
- تطبيقات الموجات فوق الصوتية في إنتاج لقاح MPXV
يتم تثبيت هذا النظام من أجهزة الموجات فوق الصوتية 2x 1kW لتشغيل التدفق المستمر في منشأة لإنتاج اللقاحات.
التحلل بالموجات فوق الصوتية وتجزئة الحمض النووي قبل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)
يتم الكشف عن عدوى فيروس جدري القرود عن طريق اختبار تضخيم الحمض النووي (NAAT) ، باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي أو التقليدي (PCR) ، للكشف عن تسلسلات فريدة من الحمض النووي الفيروسي. تحتوي العينة (على سبيل المثال من مبادلة البلعوم الأنفي أو خزعات الجلد) على الفيروس في الخلايا.
للتحليل ، يجب إطلاق الفيروس من الخلايا ويجب تجزئة الحمض النووي الفيروسي ل PCR.
التحلل بالموجات فوق الصوتية:
اضطراب / تحلل الخلايا بالموجات فوق الصوتية هو وسيلة موثوقة وفعالة لعزل الفيروسات من عينات الخلايا ، وبالتالي تقنية مفضلة على العوامل الكيميائية ، مثل الليزوزيم ، بروتيناز K والمنظفات المختلفة التي تستخدم بدلا من ذلك لتحقيق تحلل الخلايا وإطلاق الحمض النووي.
ومع ذلك ، فإن استخدام هذه الكواشف الكيميائية يتطلب إعداد عينة تستغرق وقتا طويلا في عدة خطوات قبل تحليل PCR لمنع تثبيط تفاعل PCR. نظرا لأن مثبطات PCR تؤثر على كفاءة التضخيم ، فإن الاختلافات الصغيرة في كمية المثبطات التي لم تتم إزالتها يمكن أن تؤدي إلى اختلافات كبيرة في تضخيم منتج PCR (Diaco ، 1995).
ميزة الموجات فوق الصوتية للتحلل هي أن التعطيل الكامل للهياكل الخلوية وإطلاق الحمض النووي دون الحاجة إلى كواشف التحلل وإعداد العينات التي تستغرق وقتا طويلا أمر مرغوب فيه. (راجع Fykse et al., 2003)
تجزئة الحمض النووي بالموجات فوق الصوتية:
تجزئة الحمض النووي بالموجات فوق الصوتية بسيطة وموثوقة كما هو الحال في إنتاج شظايا الحمض النووي قابلة للتعديل في الطول (basepairs ، bp). باستخدام الموجات فوق الصوتية ، يمكن تجزئة الحمض النووي بشكل فعال إلى طول الحمض النووي المستهدف. التحكم الدقيق في المعلمات بالموجات فوق الصوتية وخيارات التبريد المتطورة تمنع تدهور الحمض النووي.
اقرأ المزيد عن تجزئة الحمض النووي بالموجات فوق الصوتية!
تطبيقات الموجات فوق الصوتية في لقاح فيروس جدري القرود
اللقاحات المستخدمة ضد فيروس جدري القرود هي حاليا لقاحات فيروس حي. قد تستخدم اللقاحات المطورة حديثا منصات أخرى مثل الحمض النووي القائم على الحمض النووي يحتوي حاليا على لقاح أنقرة المعدل ، وهو فيروس جدري العظام الموهن وغير المكرر. كما أنه يحتوي على تريس (تريس أمينوميثان) وكلوريد الصوديوم. قد يحتوي اللقاح أيضا على كميات صغيرة من الحمض النووي والبروتين من خلايا الخلايا الليفية لجنين الدجاج ، والتي تستخدم لزراعة فيروس اللقاح والبنزوناز ومركبات المضادات الحيوية مثل الجنتاميسين والسيبروفلوكساسين.
يستخدم التجانس بالموجات فوق الصوتية في إنتاج لقاحات الفيروسات الحية الموهنة ، ولقاحات الحمض النووي ، وكوكتيلات الحمض النووي متعددة التكافؤ ، ولقاحات الحمض النووي الريبوزي المرسال ، ولقاحات البروتين المؤتلف ، ولقاحات الجسيمات الشبيهة بالفيروسات ، إلخ.
- تشتت جزيئات الفيروس والعوامل
- استحلاب
- تعطيل الفيروسات
- تركيبة الناقل للأدوية (NLC ، SLN)
- التغليف
- حل العوامل
- إعداد المواد المساعدة
- إزالة الغاز / إزالة الهية
يمكنك العثور على معلومات أكثر تعمقا حول تطبيقات الموجات فوق الصوتية لتحسين تصنيع اللقاحات!
بروتوكول العزل بالموجات فوق الصوتية لفيروس جدري القرود
استخدم فريق البحث في Stittelaar (2005) التحلل بالموجات فوق الصوتية لإطلاق فيروس جدري القرود من مزرعة الخلايا المضيفة للنمو وكذلك من الخلايا التي تم الحصول عليها عن طريق مبادلات الحلق من الرئيسيات المصابة.
تحضير لقاح جدري القردة:
نمت فيروسات جدري القرود على خلايا الخلايا الليفية لجنين الدجاج الخالية من مسببات الأمراض. بعد الحضانة لمدة 1 إلى 2 أيام ، تم حصاد تعليق خلية الفيروس بواسطة جولة واحدة من ذوبان الجليد ثم تم تركيزه بواسطة الطرد المركزي. تم إعادة تعليق الكريات وتعرضت لعدة جولات من التجانس بالموجات فوق الصوتية.
عزل فيروس جدري القرود من المكاك الملقحة:
تم تجميد العينات ثلاث مرات وصوتها في CupHorn بالموجات فوق الصوتية. تم استخدام اثنين من التخفيفات (1:10 و 1:100) في وسط النقل المكمل بمصل بقري جنيني بنسبة 1٪ لتلقيح طبقات خلية فيرو الأحادية في ألواح من ستة آبار. بعد 1 ساعة من الحضانة عند 37 درجة مئوية ، تمت إزالة اللقاح واستبداله بوسط استزراع مكمل بمصل بقري جنيني بنسبة 1٪. تم استزراع الطبقات الأحادية لمدة 5 أيام عند 37 درجة مئوية وملطخة بمحلول بنفسجي كريستالي.
(راجع Stittelaar et al., 2005)
الموجات فوق الصوتية لتحليل الفيروسات وإنتاج اللقاحات
تقدم مجموعة منتجات Hielscher Ultrasonics الواسعة جهاز الموجات فوق الصوتية المثالي للمختبرات البحثية والتحليلية وكذلك لتصنيع اللقاحات الصناعية.
Hielscher Ultrasonics متخصصة في تصميم وتصنيع وتوزيع أجهزة الموجات فوق الصوتية عالية الأداء والمفاعلات الحيوية الصوتية لاستخدامها في مختبرات البحوث والتحليل وكذلك للتنفيذ في إنتاج اللقاحات الصناعية (على سبيل المثال. لقاحات، واجهات برمجه التطبيقات).
يمكن تطبيق الصوتنة على الأوعية المفتوحة والمفاعلات المغلقة التي يتم تحريكها باستمرار والمفاعلات المستمرة للتدفق. جميع أجزاء أنظمة الموجات فوق الصوتية ، التي تتلامس مع الوسط السائل ، مصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ أو التيتانيوم أو الزجاج. تضمن الأجزاء القابلة للتعقيم والتجهيزات الصحية الإنتاج تحت شروط الدرجة الصيدلانية.
التسجيل التلقائي للبيانات: يقوم البرنامج الذكي بتسجيل معلمات عملية sonication تلقائيًا على بطاقة الذاكرة SD المدمجة. السيطرة الدقيقة على جميع المعلمات عملية ضمان قابلية اعادة الأنتاج، توحيد الإنتاج، ويسهل الوفاء بمعايير سلامة المنتجات الصيدلانية.
HIELSCHER الفوق’ المعالجات بالموجات فوق الصوتية موثوقة للغاية ويمكن التحكم فيها بدقة. يمكن تعديل جميع أجهزة الموجات فوق الصوتية الصناعية لتقديم النطاق الكامل من السعات المنخفضة إلى العالية جدا. تسمح متانة أنظمة الموجات فوق الصوتية في Hielscher بتشغيل 24/7 تحت الخدمة الشاقة وفي البيئات الصعبة.
الجدول أدناه يعطيك مؤشرا على قدرة المعالجة التقريبية لultrasonicators لدينا:
| دفعة حجم | معدل المد و الجزر | الأجهزة الموصى بها |
|---|---|---|
| لوحات متعددة الآبار / ميكروتيتر | ن / أ | UIP400MTP |
| 1 إلى 500ML | 10 إلى 200ML / دقيقة | UP100H |
| 10 إلى 2000ML | 20 إلى 400ML / دقيقة | Uf200 ः ر، UP400St |
| 00.1 إلى 20L | 00.2 إلى 4L / دقيقة | UIP2000hdT |
| 10 إلى 100L | 2 إلى 10L / دقيقة | UIP4000hdT |
| ن / أ | 10 إلى 100L / دقيقة | UIP16000 |
| ن / أ | أكبر | مجموعة من UIP16000 |
اتصل بنا! / اسألنا!
بالموجات فوق الصوتية DNA قص
مقتبس من Jkwchui تحت CC-BY-SA.03
الأدب / المراجع
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
حقائق تستحق العلم
فيروس جدري القرود
جدري القرود (MPV أو MPXV أو hMPXV) هو نوع من فيروسات الحمض النووي المزدوجة التي تقطعت بها السبل ، والتي تسبب مرضا حيوانيا حيوانيا فيروسيا. يعرف هذا المرض باسم عدوى جدري القرود ويمكن أن يحدث في البشر والحيوانات. وهو ينتمي إلى جنس Orthopoxvirus في عائلة Poxviridae. فيروس جدري القرود هو واحد من فيروس جدري العظام البشري جنبا إلى جنب مع فيروسات فاريولا (VARV) وجدري البقر (CPX) و vaccinia (VACV). تتميز فيروسات الجدري العظمي بجزيئات فيروسية كبيرة على شكل طوب ، تحتوي على جينوم حمض نووي مزدوج الخيوط يبلغ حوالي 200000 نقطة أساس.
فحص إليسا
ELISA تعني مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم وهي مقايسة مناعية مصنفة تعتبر المعيار الذهبي للمقايسات المناعية. ELISA هو اختبار مناعي ، يقدر بحساسيته التشخيصية العالية ، ويستخدم للكشف عن الجزيئات وتحديدها كميا ، بما في ذلك الأجسام المضادة والمستضدات والبروتينات والبروتينات السكرية والهرمونات. يعتمد مبدأ ELISA على تفاعل المستضد مع الأجسام المضادة. من خلال هذا التفاعل بين المستضدات والأجسام المضادة ، ترتبط الأجسام المضادة المحددة بالمستضد المستهدف. فقط عندما يحدث التفاعل ، يمكن أن ترتبط الركيزة بالإنزيم ويمكن ملاحظة تحويل الركيزة اللاحق ، مما يعني الحصول على نتيجة إيجابية.
Hielscher الفوق صوتيات بتصنيع عالية الأداء المجانسة بالموجات فوق الصوتية من مختبر إلى حجم الصناعية.