تطبيقات الموجات فوق الصوتية المتعلقة بفيروس جدري القردة

تُعد المعالجة بالموجات فوق الصوتية طريقة معالجة مهمة لعزل فيروس جدري القردة (MPXV) من العينات التحليلية، ولتجزئة DNA الفيروس، وكذلك لتصنيع لقاحات جدري القردة. ولتحضير العينات قبل التشخيص والتحليل (PCR وELISA وغيرهما)، تُستخدم المعالجة بالموجات فوق الصوتية لتحليل الخلايا من أجل تحرير فيروس جدري القردة من داخل الخلية و / أو لتجزئة DNA. وفي إنتاج اللقاحات، تشمل التطبيقات تحضير جسيمات الفيروس / DNA، والتغليف داخل حوامل الأدوية، وصياغة مواد التلقيح.
يمكنكم أدناه الاطلاع على معلومات مفصلة عن تحضير عينات فيروس جدري القردة بالموجات فوق الصوتية، وكذلك إنتاج لقاحات MPXV بمساعدة الموجات فوق الصوتية.

ما ستجدونه في هذه الصفحة:

• التحليل بالموجات فوق الصوتية لاستخلاص فيروس جدري القردة
• تجزئة DNA فيروس جدري القردة بالموجات فوق الصوتية
• تطبيقات الموجات فوق الصوتية في إنتاج لقاحات MPXV

التحليل وتجزئة DNA بالموجات فوق الصوتية قبل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)

تُكتشف عدوى فيروس جدري القردة باختبار تضخيم الأحماض النووية (NAAT)، باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في الوقت الحقيقي أو بالطريقة التقليدية، للكشف عن تسلسلات فريدة من DNA الفيروس. وتحتوي العينة (مثل عينة من مسحة أنفية بلعومية أو خزعات جلدية) على الفيروس داخل الخلايا.
ولإجراء التحليل، يجب تحرير الفيروس من الخلايا وتجزئة DNA الفيروس لإجراء PCR.

التحليل بالموجات فوق الصوتية:

يُعد تفكيك الخلايا / تحليلها بالموجات فوق الصوتية طريقة موثوقة وفعالة لعزل الفيروسات من العينات الخلوية، ومن ثم فهو تقنية مفضلة مقارنة بالعوامل الكيميائية، مثل الليزوزيم والبروتيناز K والمنظفات المختلفة، التي تُستخدم بديلًا لتحقيق تحليل الخلايا وتحرير DNA.
غير أن استخدام هذه الكواشف الكيميائية يتطلب تحضيرًا للعينات يستغرق وقتًا طويلًا ويتضمن عدة خطوات قبل تحليل PCR، لمنع تثبيط تفاعل PCR. ولأن مثبطات PCR تؤثر في كفاءة التضخيم، فإن الاختلافات الصغيرة في كمية المثبطات التي لم تُزل قد تؤدي إلى اختلافات كبيرة في تضخيم ناتج PCR (Diaco, 1995).
تتمثل ميزة المعالجة بالموجات فوق الصوتية للتحليل في أن التفكيك الكامل للبنى الخلوية وتحرير DNA دون الحاجة إلى كواشف التحليل وتحضير العينات الذي يستغرق وقتًا طويلًا أمران مرغوبان. (راجع Fykse et al., 2003)

تجزئة DNA بالموجات فوق الصوتية:

تجزئة DNA بالموجات فوق الصوتية بسيطة وموثوقة، إذ تُنتج قطعًا من DNA يمكن ضبط أطوالها (أزواج القواعد، bp). وباستخدام الموجات فوق الصوتية، يمكن تجزئة DNA بفعالية إلى الطول المستهدف. ويمنع التحكم الدقيق في معلمات الموجات فوق الصوتية وخيارات التبريد المتطورة تحلل DNA.
اقرؤوا المزيد عن تجزئة DNA بالموجات فوق الصوتية!

تطبيقات الموجات فوق الصوتية في لقاح فيروس جدري القردة

اللقاحات المستخدمة ضد فيروس جدري القردة هي حاليًا لقاحات فيروسات حية. وقد تستخدم اللقاحات المطورة حديثًا منصات أخرى مثل القائمة على DNA يحتوي حاليًا على فيروس Vaccinia Ankara معدل، وهو فيروس من جنس Orthopoxvirus مُوهَّن وغير قادر على التكاثر. ويحتوي أيضًا على Tris (تريس أمينوميثان) وكلوريد الصوديوم. وقد يحتوي اللقاح أيضًا على كميات صغيرة من DNA والبروتين من الخلايا الليفية لأجنة الدجاج، التي تُستخدم لتنمية فيروس اللقاح، وعلى بنزوناز ومركبات مضادات حيوية مثل الجنتاميسين والسيبروفلوكساسين.

يُستخدم التجانس بالموجات فوق الصوتية في إنتاج لقاحات الفيروسات الحية المُوهَّنة، ولقاحات DNA، وخلائط DNA متعددة التكافؤ، ولقاحات mRNA، ولقاحات البروتينات المؤتلفة، ولقاحات الجسيمات الشبيهة بالفيروسات، وغيرها.

يمكنكم الاطلاع على معلومات أكثر تفصيلًا عن تطبيقات الموجات فوق الصوتية لتحسين تصنيع اللقاحات!

بروتوكول عزل فيروس جدري القردة بالموجات فوق الصوتية

استخدم فريق Stittelaar البحثي (2005) التحليل بالموجات فوق الصوتية لتحرير فيروس جدري القردة من مزرعة الخلايا المضيفة المستخدمة لتنميته، وكذلك من الخلايا المأخوذة بواسطة مسحات الحلق من الرئيسيات المصابة.

تحضير لقاح جدري القردة:

نُمّيت فيروسات جدري القردة على خلايا ليفية لأجنة الدجاج خالية من مسببات أمراض محددة. وبعد الحضانة لمدة 1 إلى 2 يوم، جُمع معلق الفيروس والخلايا بدورة واحدة من التجميد والإذابة، ثم رُكِّز بالطرد المركزي. وأُعيد تعليق الراسب وأُخضع لعدة دورات من التجانس بالموجات فوق الصوتية.

عزل فيروس جدري القردة من قرود المكاك الملقحة:

جُمِّدت العينات وأُذيبت ثلاث مرات، وعولجت بالموجات فوق الصوتية في CupHorn بالموجات فوق الصوتية. واستُخدم تخفيفان (1:10 و1:100) في وسط نقل مدعَّم بمصل بقري جنيني بنسبة 1% لتلقيح طبقات أحادية من خلايا Vero في صفائح ذات ست آبار. وبعد الحضانة لمدة 1 h عند 37°C، أُزيلت مواد التلقيح واستُبدلت بوسط زرع مدعَّم بمصل بقري جنيني بنسبة 1%. وزُرعت الطبقات الأحادية لمدة 5 أيام عند 37°C وصُبغت بمحلول البنفسجي البلوري.
(راجع Stittelaar et al., 2005)

أجهزة المعالجة بالموجات فوق الصوتية لتحليل الفيروسات وإنتاج اللقاحات

توفر مجموعة منتجات Hielscher Ultrasonics الواسعة جهاز المعالجة بالموجات فوق الصوتية المثالي للمختبرات البحثية والتحليلية، وكذلك لتصنيع اللقاحات صناعيًا.
تتخصص Hielscher Ultrasonics في تصميم أجهزة المعالجة بالموجات فوق الصوتية عالية الأداء والمفاعلات الحيوية بالموجات فوق الصوتية وتصنيعها وتوزيعها، للاستخدام في المختبرات البحثية والتحليلية، وكذلك لتطبيقها في إنتاج اللقاحات صناعيًا (مثل اللقاحات, المكونات الصيدلانية الفعالة).
يمكن تطبيق المعالجة بالموجات فوق الصوتية في أوعية مفتوحة، ومفاعلات مغلقة ذات تقليب مستمر، ومفاعلات ذات تدفق مستمر. وجميع أجزاء أنظمة الموجات فوق الصوتية التي تلامس الوسط السائل مصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ أو التيتانيوم أو الزجاج. وتضمن الأجزاء القابلة للتعقيم بالأوتوكلاف والوصلات الصحية الإنتاج في ظروف تستوفي متطلبات التصنيع الدوائي.
التسجيل التلقائي للبيانات: يسجل البرنامج الذكي معلمات عملية المعالجة بالموجات فوق الصوتية تلقائيًا على بطاقة ذاكرة SD المدمجة. ويضمن التحكم الدقيق في جميع معلمات العملية قابلية تكرار النتائج, توحيد معايير الإنتاج، ويسهّل استيفاء معايير سلامة المنتجات الصيدلانية.
تتميز معالجات الموجات فوق الصوتية من Hielscher Ultrasonics بموثوقية عالية ويمكن التحكم فيها بدقة. ويمكن ضبط جميع أجهزة المعالجة بالموجات فوق الصوتية الصناعية لتوفير النطاق الكامل من السعات المنخفضة إلى العالية جدًا. وتتيح متانة أنظمة الموجات فوق الصوتية من Hielscher التشغيل على مدار 24/7 تحت أحمال تشغيل شديدة وفي بيئات تتطلب أداءً عاليًا.

يوضح الجدول أدناه القدرة التقريبية على المعالجة لأجهزة المعالجة بالموجات فوق الصوتية لدينا: