تطبيقات الموجات فوق الصوتية في فيروس جدري
الموجات فوق الصوتية هي طريقة معالجة مهمة لعزل فيروس جدري (MPXV) من العينات التحليلية ، لتجزئة الحمض النووي للفيروس وكذلك في تصنيع لقاح جدري. لإعداد العينة قبل التشخيص والتحليل (PCR ، ELISA ، إلخ) يتم استخدام الموجات فوق الصوتية لتحلل الخلايا من أجل إطلاق فيروس جدري من داخل الخلية و / أو لتفتيت الحمض النووي. في إنتاج اللقاح ، تتراوح التطبيقات من تحضير جسيمات الفيروس / الحمض النووي ، والتغليف في ناقلات الأدوية وصياغة اللقاح.
أدناه يمكنك العثور على معلومات مفصلة حول إعداد عينة من فيروس جدري بالموجات فوق الصوتية وكذلك إنتاج لقاح MPXV بمساعدة الموجات فوق الصوتية.
ما ستجده في هذه الصفحة:
- تحلل بالموجات فوق الصوتية لاستخراج فيروس جدري
- تجزئة الحمض النووي لفيروس جدري بالموجات فوق الصوتية
- تطبيقات الموجات فوق الصوتية في إنتاج لقاح MPXV
يتم تثبيت هذا النظام من الموجات فوق الصوتية 2x 1kW لعملية التدفق المستمر في منشأة إنتاج اللقاح.
التحلل بالموجات فوق الصوتية وتجزئة الحمض النووي قبل تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR)
يتم الكشف عن عدوى فيروس جدري عن طريق اختبار تضخيم الحمض النووي (NAAT) ، باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي أو التقليدي (PCR) ، للكشف عن التسلسلات الفريدة للحمض النووي الفيروسي. تحتوي العينة (على سبيل المثال من مبادلة البلعوم الأنفي أو خزعات الجلد) على الفيروس في الخلايا.
للتحليل ، يجب إطلاق الفيروس من الخلايا ويجب تجزئة الحمض النووي الفيروسي من أجل تفاعل البوليميراز المتسلسل.
التحلل بالموجات فوق الصوتية:
يعد تعطيل / تحلل الخلايا بالموجات فوق الصوتية طريقة موثوقة وفعالة لعزل الفيروسات من عينات الخلايا ، وبالتالي فهي تقنية مفضلة على العوامل الكيميائية ، مثل الليزوزيم والبروتيناز K والمنظفات المختلفة التي تستخدم بدلا من ذلك لتحقيق تحلل الخلايا وإطلاق الحمض النووي.
ومع ذلك ، فإن استخدام هذه الكواشف الكيميائية يتطلب تحضير عينة تستغرق وقتا طويلا في عدة خطوات قبل تحليل تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل لمنع تثبيط تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل. نظرا لأن مثبطات تفاعل البوليميراز المتسلسل تؤثر على كفاءة التضخيم ، فإن الاختلافات الصغيرة في كمية المثبطات التي لم تتم إزالتها يمكن أن تؤدي إلى اختلافات كبيرة في تضخيم منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل (دياكو ، 1995).
ميزة الموجات فوق الصوتية للتحلل هي أن الاضطراب الكامل للهياكل الخلوية وإطلاق الحمض النووي دون الحاجة إلى كواشف التحلل وإعداد العينات التي تستغرق وقتا طويلا أمر مرغوب فيه. (راجع Fykse et al. ، 2003)
تجزئة الحمض النووي بالموجات فوق الصوتية:
تجزئة الحمض النووي بالموجات فوق الصوتية بسيطة وموثوقة كما هو ينتج شظايا الحمض النووي قابل للضبط في الطول (basepairs ، bp). باستخدام الموجات فوق الصوتية ، يمكن تجزئة الحمض النووي بشكل فعال إلى طول الحمض النووي المستهدف. التحكم الدقيق في المعلمات بالموجات فوق الصوتية وخيارات التبريد المتطورة تمنع تدهور الحمض النووي.
اقرأ المزيد عن تجزئة الحمض النووي بالموجات فوق الصوتية!
تطبيقات الموجات فوق الصوتية في لقاح فيروس جدري
اللقاحات المستخدمة ضد فيروس جدري القردة هي حاليا لقاحات فيروس حي. قد تستخدم اللقاحات المطورة حديثا منصات أخرى مثل اللقاحات القائمة على الحمض النووي يحتوي حاليا على لقاح Vaccinia Ankara viurs المعدل ، وهو فيروس أورثوبوكس موهن وغير قابل للتكاثر. كما أنه يحتوي على تريس (تريس أمينوميثان) وكلوريد الصوديوم. قد يحتوي اللقاح أيضا على كميات صغيرة من الحمض النووي والبروتين من خلايا الخلايا الليفية لجنين الدجاج ، والتي تستخدم لزراعة فيروس اللقاح والبنزوناز ومركبات المضادات الحيوية مثل الجنتاميسين والسيبروفلوكساسين.
يستخدم التجانس بالموجات فوق الصوتية في إنتاج لقاحات الفيروسات الحية الموهنة ، ولقاحات الحمض النووي ، وكوكتيلات الحمض النووي متعددة التكافؤ ، ولقاحات mRNA ، ولقاحات البروتين المؤتلف ، ولقاحات الجسيمات الشبيهة بالفيروسات ، إلخ.
- تشتت جزيئات الفيروس وعوامله
- الاستحلاب
- تعطيل الفيروسات
- صياغة حامل الدواء (NLC ، SLN)
- التغليف
- حل الوكلاء
- إعداد المواد المساعدة
- التفريغ / نزع التهوية
يمكنك العثور على مزيد من المعلومات المتعمقة حول تطبيقات الموجات فوق الصوتية لتحسين تصنيع اللقاحات!
بروتوكول عزل فيروس جدري بالموجات فوق الصوتية
استخدم فريق البحث في Stittelaar (2005) التحلل بالموجات فوق الصوتية لإطلاق فيروس جدري من مزرعة الخلايا المضيفة للنمو وكذلك من الخلايا التي تم الحصول عليها عن طريق مقايضة الحلق من الرئيسيات المصابة.
تحضير لقاح جدري:
نمت فيروسات جدري على خلايا الخلايا الليفية لجنين الدجاج الخالية من مسببات الأمراض. بعد الحضانة لمدة 1-2 أيام ، تم حصاد تعليق الخلية الفيروسية عن طريق جولة واحدة من ذوبان الجليد ثم تركز عن طريق الطرد المركزي. تم إعادة تعليق الحبيبات وتعريضها لعدة جولات من التجانس بالموجات فوق الصوتية.
عزل فيروس جدري من المكاك الملقحة:
تم إذابة العينات بالتجميد ثلاث مرات وصوتيها في CupHorn بالموجات فوق الصوتية. تم استخدام تخفيفين (1:10 و 1: 100) في وسط النقل المكمل بمصل بقري جنيني بنسبة 1٪ لتلقيح أحاديات خلايا فيرو في ألواح من ستة آبار. بعد ساعة واحدة من الحضانة عند 37 درجة مئوية ، تمت إزالة اللقاح واستبداله بوسط استزراع مكمل بمصل بقري جنيني بنسبة 1٪. تم استزراع الطبقات الأحادية لمدة 5 أيام عند 37 درجة مئوية وصبغها بمحلول بنفسجي بلوري.
(راجع ستيتيلار وآخرون، 2005)
الموجات فوق الصوتية لتحليل الفيروسات وإنتاج اللقاحات
Hielscher الموجات فوق الصوتية واسعة محفظة المنتجات يقدم الموجات فوق الصوتية المثالية للمختبرات البحثية والتحليلية وكذلك لتصنيع اللقاحات الصناعية.
Hielscher Ultrasonics متخصصة في تصميم وتصنيع وتوزيع الموجات فوق الصوتية عالية الأداء والمفاعلات الحيوية سونو لاستخدامها في مختبرات البحوث والتحليل، وكذلك للتنفيذ في إنتاج اللقاحات الصناعية (على سبيل المثال. لقاحات, واجهات برمجه التطبيقات).
يمكن تطبيق Sonication على الأوعية المفتوحة والمفاعلات المغلقة التي يتم تحريكها باستمرار ومفاعلات التدفق المستمر. جميع أجزاء أنظمة الموجات فوق الصوتية ، التي تتلامس مع الوسط السائل ، مصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ أو التيتانيوم أو الزجاج. تضمن الأجزاء القابلة للتعقيم والتجهيزات الصحية الإنتاج تحت شروط فارما.
تسجيل البيانات التلقائي: برنامج ذكي يسجل معلمات عملية صوتنة تلقائيا على بطاقة الذاكرة SD المدمجة. يضمن التحكم الدقيق في جميع معلمات العملية التكاثر, توحيد الإنتاج، ويسهل الوفاء بمعايير سلامة المنتجات الصيدلانية.
Hielscher Ultrasonics’ المعالجات بالموجات فوق الصوتية موثوقة للغاية ويمكن التحكم فيها بدقة. يمكن تعديل جميع الموجات فوق الصوتية الصناعية لتقديم مجموعة كاملة من السعات المنخفضة إلى العالية جدا. متانة أنظمة الموجات فوق الصوتية Hielscher يسمح لعملية 24/7 تحت الثقيلة وفي البيئات الصعبة.
يمنحك الجدول أدناه مؤشرا على قدرة المعالجة التقريبية لأجهزة الموجات فوق الصوتية لدينا:
| حجم الدفعة | معدل التدفق | الأجهزة الموصى بها |
|---|---|---|
| لوحات متعددة الآبار / microtiter | غير متوفر | UIP400MTP |
| 1 إلى 500 مل | 10 إلى 200 مل / دقيقة | UP100H |
| 10 إلى 2000 مل | 20 إلى 400 مل / دقيقة | UP200Ht, UP400St |
| 0.1 إلى 20 لتر | 0.2 إلى 4 لتر / دقيقة | UIP2000hdT |
| 10 إلى 100 لتر | 2 إلى 10 لتر / دقيقة | UIP4000hdT |
| غير متوفر | 10 إلى 100 لتر / دقيقة | UIP16000 |
| غير متوفر | أكبر | مجموعة من UIP16000 |
اتصل بنا! / اسألنا!
قص الحمض النووي بالموجات فوق الصوتية
مقتبس من Jkwchui تحت CC-BY-SA.03
الأدب / المراجع
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
حقائق تستحق المعرفة
فيروس جدري
جدري (MPV أو MPXV أو hMPXV) هو نوع من فيروسات الحمض النووي مزدوجة الشريط ، والتي تسبب مرضا حيوانيا فيروسيا. يعرف هذا المرض باسم عدوى جدري ويمكن أن يحدث في البشر. إنه ينتمي إلى جنس Orthopoxvirus في عائلة Poxviridae. فيروس جدري هو أحد فيروسات الجدري البشري جنبا إلى جنب مع فيروسات الجدري (VARV) وجدري البقر (CPX) واللقاح (VACV). تتميز فيروسات Orthopoxvirus بجزيئات فيروسية كبيرة على شكل قرميد ، تحتوي على جينوم DNA مزدوج الشريط يبلغ حوالي 200000 نقطة أساس.
مقايسة إليسا
ELISA تعني مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم وهي مقايسة مناعية مصنفة تعتبر المعيار الذهبي للمقايسات المناعية. ELISA هو اختبار مناعي ، يقدر بحساسيته التشخيصية العالية ، ويستخدم للكشف عن الجزيئات وتحديدها ، بما في ذلك الأجسام المضادة والمستضدات والبروتينات والبروتينات السكرية والهرمونات. يعتمد مبدأ ELISA على تفاعل المستضد والجسم المضاد. من خلال هذا التفاعل بين مولد الضد والجسم المضاد، ترتبط الأجسام المضادة المحددة بمولد الضد المستهدف. فقط عندما يحدث التفاعل ، يمكن أن ترتبط الركيزة بالإنزيم ويمكن ملاحظة تحويل الركيزة اللاحق ، مما يعني الحصول على نتيجة إيجابية.
Hielscher الفوق صوتيات بتصنيع الخالط بالموجات فوق الصوتية عالية الأداء من المختبر ل الحجم الصناعي.