تميذ الأجسام المضادة باستخدام صوتنة عالية الإنتاجية

كروماتوغرافيا التقارب هي تقنية قوية لتنقية البروتين ، الأمر الذي يتطلب الشطف غير النوعي بمساعدة الموجات فوق الصوتية هو تقنية تحضير عينة موثوقة للحصول على أجسام مضادة من كروماتوغرافيا التقارب. تم تحسين الشطف الفعال والقابل للتكرار للأجسام المضادة المستهدفة المرتبطة بمصفوفات التقارب بشكل كبير عن طريق الصوتنة. إن UIP400MTP الصوتي عالي الإنتاجية مناسب بشكل مثالي لاستخلاص أعداد العينات العالية في 96 بئرا ، ومعايرة دقيقة وألواح متعددة الآبار ويسهل استعادة الأجسام المضادة في كروماتوغرافيا التقارب.

كيف تسهل Sonication الشطف؟

باستخدام الشطف غير المحدد المكثف بالموجات فوق الصوتية ، يمكن للعاملين في المختبرات والعلماء استعادة الأجسام المضادة المنقاة بكفاءة من أعمدة كروماتوغرافيا التقارب. يتم تشغيل هذه الأجسام المضادة المنقاة من خلال تطبيقات المصب في مختلف المجالات ، مثل علم المناعة والتكنولوجيا الحيوية والتشخيص الطبي.

الشطف هو خطوة تحضير عينة تستخدم بشكل شائع لكروماتوغرافيا التقارب: يستغل كروماتوغرافيا التقارب التفاعلات المحددة للغاية بين الجزيء المستهدف (مثل الجسم المضاد) والرباط المتجمد على مصفوفة الكروماتوغرافيا. وهذا يسمح بالتنقية الانتقائية للجزيء المستهدف من خليط معقد باستخدام تقارب الربط المحدد للجزيئات ، مثل الأجسام المضادة.
ملزمة محددة من الأجسام المضادة: غالبا ما يتم تنقية الأجسام المضادة باستخدام كروماتوغرافيا التقارب ، حيث ترتبط بشكل انتقائي برابط مثبت على راتنج الكروماتوغرافيا. يمكن أن يكون هذا مولد ضد أو بروتين A / G أو أي جزيء آخر يتفاعل بشكل خاص مع الجسم المضاد محل الاهتمام.
الشطف: بعد ربط الجسم المضاد المستهدف بالمصفوفة ، تتضمن الخطوة التالية استخلاص (أو غسل) الجسم المضاد المرتبط من الراتنج. تتضمن خطوة الشطف هذه عادة تعطيل الارتباط المحدد بين الجسم المضاد والليجند. يمكن تسهيل هذه الخطوة عن طريق صوتنة.
شطف غير محدد بمساعدة الموجات فوق الصوتية: على عكس طرق الشطف المحددة التي تعطل فقط تفاعل الأجسام المضادة والرباط ، فإن طرق الشطف غير المحددة تعطل جميع التفاعلات على الراتنج ، بما في ذلك التفاعلات غير المحددة. يمكن أن يكون هذا مفيدا عند التعامل مع الملوثات المرتبطة بشدة والتي قد تتداخل مع عملية التنقية. هنا يأتي صوتنة في اللعب! تستخدم الموجات فوق الصوتية لتوليد فقاعات التجويف في المخزن المؤقت للشفط. عندما تنهار هذه الفقاعات بالقرب من مصفوفة الراتنج ، فإنها تنتج قوى قص موضعية مكثفة وتدفق دقيق. يساعد هذا الاضطراب الميكانيكي في كسر التفاعلات غير المحددة بين الجسم المضاد والرباط ، مما يسهل شطف الجسم المضاد المرتبط من المصفوفة.

مزايا الشطف بالموجات فوق الصوتية باستخدام Sonication

يوفر الشطف بالموجات فوق الصوتية العديد من المزايا ، لا سيما في سياق تقنيات تنقية البروتين مثل كروماتوغرافيا التقارب.
على سبيل المثال ، تتفوق الصوتنة على الطرق البديلة من حيث سلامة البروتين ، والانتعاش ، والنقاء ، والتنوع ، والكفاءة. هذه المزايا تجعل الشطف بالموجات فوق الصوتية خيارا مفضلا لعمليات تنقية البروتين ، لا سيما في التطبيقات التي يكون فيها الحفاظ على بنية البروتين ونشاطه أمرا ضروريا. بالإضافة إلى ذلك ، يبرز الشطف بالموجات فوق الصوتية لبساطته وكفاءته وتعدد استخداماته وتوافقه مع مجموعة واسعة من البروتينات ومصفوفات التقارب. من خلال تطبيق الموجات فوق الصوتية لتعطيل تفاعلات مصفوفة البروتين ، يوفر الشطف بالموجات فوق الصوتية طريقة لطيفة وسريعة لتنقية البروتين ، مما يضمن معدلات استرداد عالية والحفاظ على سلامة البروتين للتطبيقات النهائية.

ألطف على بنية البروتين: يتضمن شطف الأس الهيدروجيني المنخفض استخدام مخازن حمضية لتعطيل الارتباط بين البروتين المستهدف (مثل الأجسام المضادة) ومصفوفة التقارب. ومع ذلك ، فإن التعرض لانخفاض درجة الحموضة يمكن أن يفسد البروتينات ، مما قد يضر بهيكلها ونشاطها البيولوجي. في المقابل ، يعتمد الشطف بالموجات فوق الصوتية بشكل أساسي على الاضطراب الميكانيكي بدلا من تمسخ المواد الكيميائية ، مما يجعله ألطف على بنية البروتين. هذا مفيد بشكل خاص عند تنقية البروتينات الحساسة أو الأجسام المضادة الحساسة لتغيرات الأس الهيدروجيني.

• تقليل مخاطر التجميع: قد يؤدي انخفاض درجة الحموضة إلى زيادة خطر تراكم البروتين بسبب تكشف البروتين والتعرض للمناطق الكارهة للماء. يمكن أن يؤدي التجميع إلى فقدان نشاط البروتين وصعوبات في المعالجة النهائية. الشطف بالموجات فوق الصوتية ، بالمقارنة ، يقلل من خطر التجميع عن طريق استخدام القوى الميكانيكية لتعطيل التفاعلات بين البروتين ومصفوفة التقارب دون تغيير كبير في التشكل الأصلي للبروتين.
• تحسين الانتعاش والنقاء: يمكن أن يحقق الشطف بالموجات فوق الصوتية معدلات استرداد ومستويات نقاء أعلى مقارنة بطرق الشطف البديلة. الاضطراب الميكانيكي الذي توفره الموجات فوق الصوتية يطلق بشكل فعال بروتينات مرتبطة من مصفوفة التقارب مع تقليل التفاعلات غير المحددة. ينتج عن هذا استعادة معززة للبروتين المستهدف مع تقليل التلوث من الجزيئات غير المرتبطة على وجه التحديد ، مما يساهم في زيادة نقاء الجزء المستخلص.
• معالجة عالية الإنتاجية: Hielscher الفوق صوتيات يقدم مختلف الصوتيات لتنقية البروتين بمساعدة الموجات فوق الصوتية, الشطف وbiopanning. يسمح UIP400MTP صوتي لوحة المعايرة الدقيقة بالمعالجة الجماعية للعينات في 96 بئرا ولوحات أخرى متعددة الآبار. يعد VialTweeter مثاليا للصوتنة المتزامنة الخالية من المتاعب لما يصل إلى 10 أنابيب مثل قوارير Eppendorf في ظل نفس الظروف. CupHorn هو صوتنة متعددة الاستخدامات مثالية للعديد من الأنابيب والأكواب الصغيرة والأوعية الأخرى. وبالطبع ، فإن الصوتيات الكلاسيكية من نوع المسبار مع microtips هي أداة معملية راسخة لإعداد العينات. Hielscher الموجات فوق الصوتية مجموعة المنتجات لديه صوتي المثالي لإعداد التجربة الخاصة بك وحجم عينتك.
• براعة والتوافق: يتوافق الشطف بالموجات فوق الصوتية مع مجموعة واسعة من البروتينات ومصفوفات التقارب ، مما يوفر تنوعا في تطبيقات التنقية. في المقابل ، قد لا يكون شطف الأس الهيدروجيني المنخفض مناسبا لبعض البروتينات الحساسة للظروف الحمضية أو لمصفوفات التقارب المعرضة للتدهور أو الترشيح عند درجة حموضة منخفضة. يوفر الشطف بالموجات فوق الصوتية بديلا لطيفا وقابلا للتطبيق عالميا يمكن تخصيصه وفقا لاحتياجات تنقية محددة دون المساس بسلامة البروتين أو استقرار المصفوفة.
• الوقت والكفاءة: يتطلب الشطف بالموجات فوق الصوتية عادة أوقات شطف أقصر مقارنة بطرق الشطف الأخرى. إن الإطلاق السريع والفعال للبروتينات المرتبطة التي تسهلها الموجات فوق الصوتية يقلل من وقت المعالجة ويزيد من كفاءة التنقية الإجمالية ، مما يجعله خيارا جذابا للتطبيقات عالية الإنتاجية أو عند الحاجة إلى نتائج حساسة للوقت.

Biopanning بمساعدة الموجات فوق الصوتية

Biopanning هي تقنية حاسمة في تنقية الأجسام المضادة ، خاصة عندما يجب الحصول على أجسام مضادة محددة للغاية للبحث أو التشخيص الطبي. Biopanning هي العملية التي يتم فيها عزل الأجسام المضادة من خليط من الأجسام المضادة ، ما يسمى مكتبة الأجسام المضادة.

كيف يعمل Biopanning بالموجات فوق الصوتية؟

يبدأ بمكتبة من الأجسام المضادة ، مزيج من الأجسام المضادة المختلفة. يتميز كل جسم مضاد بشكله الفريد وخصوصيته. للتحليل والعلاج ، يجب عزل الأجسام المضادة المحددة التي تتعرف على هدف معين ، مثل الفيروس أو الخلية السرطانية. باستخدام biopanning ، يمكن عزل هذه الأجسام المضادة المحددة. الموجات فوق الصوتية يساعد على تسهيل عملية biopanning مما يجعل تنقية الأجسام المضادة أكثر كفاءة.

بدءا من مكتبة من الأجسام المضادة ، يتم عرض الأجسام المضادة عادة على سطح البكتيريا أو خلية الخميرة أو نظام عرض آخر. تمثل هذه المكتبة مجموعة متنوعة من الأجسام المضادة.
في الخطوة الأولى ، تتعرض هذه المكتبة للجزيء المستهدف. سوف تلتصق الأجسام المضادة التي ترتبط بالهدف ، بينما تغسل الأجسام الأخرى. لإزالة الأجسام المضادة غير المنضمة ، يتم غسل العينات عدة مرات بمحلول عازل.

لدينا الآن عينات تحتوي على أجسام مضادة مرتبطة فقط. ومع ذلك ، هذا يعني أن الأجسام المضادة لا تزال مرتبطة بنظام العرض الخاص بها. لتحريرها ، يجب كسر تفاعل الأجسام المضادة واليجند. تعرف هذه الخطوة باسم الشطف. يمكن استخلاص العينات باستخدام محلول يعطل الارتباط ، على سبيل المثال باستخدام مخزن مؤقت محدد للشطف ، أو شاوتروبيك ، أو خفض قيمة الأس الهيدروجيني ، أو تطبيق الحرارة ، إلخ. تدمر تقنيات الشطف هذه ارتباط الأجسام المضادة ، ولكن يمكن أيضا أن تؤدي إلى تدهور الأجسام المضادة نفسها. هذا هو السبب في استخدام صوتنة كتقنية بديلة لإزالة الأجسام المضادة بلطف من هدفها.

بعد الانتهاء من خطوة الشطف ، نحصل على أجسام مضادة منقاة وجاهزة للاستخدام في البحث أو التشخيص أو العلاج.

Biopanning هي تقنية قوية في تنقية الأجسام المضادة والشطف بالموجات فوق الصوتية يسهل ويكثف الفعالية – مما يؤدي إلى أجسام مضادة عالية النقاء وغير تالفة. يمكن biopanning بالموجات فوق الصوتية العلماء من عزل الأجسام المضادة المحددة للغاية من العينات المعقدة ، وفتح الأبواب أمام مجموعة واسعة من التطبيقات.

Sonicators لتنقية الأجسام المضادة

صوتيات Hielscher هي أدوات راسخة تستخدم في أفضل مرافق البحوث في جميع أنحاء العالم. قيمة لتصميمها للدولة من بين الفن والأداء المتفوق، تعتبر صوتيات Hielscher أدوات مختبر لا غنى عنها في مجالات التكنولوجيا الحيوية والبيولوجيا الجزيئية. Hielscher Ultrasonics تقدم صوتيات لعينة واحدة وكذلك إعداد عينة عالية الإنتاجية، والتي تسهل تنقية فعالة من الأجسام المضادة وشطف الجزيئات المرتبطة الهدف، وتمكين biopanning كفاءة لعزل الأجسام المضادة محددة مع الدقة والسرعة.
في سياق تنقية الأجسام المضادة ، تتفوق صوتيات Hielscher في تسهيل خطوات الغسيل والشطف عن طريق إزالة الأجسام المضادة غير المنضمة بكفاءة مع الحفاظ على سلامة المجمعات المرتبطة بالهدف. يسمح التحكم الدقيق وقابلية التوسع بظروف معالجة مخصصة ، مما يضمن نتائج تنقية مثالية عبر مجموعة واسعة من أحجام العينات والتعقيدات.
تمثل صوتيات Hielscher الابتكار التكنولوجي في المعالجة بالموجات فوق الصوتية ، وتقدم قدرات لا مثيل لها لتنقية الأجسام المضادة ، والشطف ، و biopanning. بفضل دقتها وموثوقيتها وسهولة تشغيلها ، توفر أنظمة الموجات فوق الصوتية المختلفة الكفاءة المثلى وتعدد الاستخدامات للبحث في المستحضرات الصيدلانية الحيوية والتشخيص والعلاج.
اتصل بنا الآن لمعرفة المزيد عن صوتيات Hielscher لتنقية الأجسام المضادة, شفط, وbiopanning! يسعد طاقمنا الفني ذو الخبرة الجيدة بمناقشة طلبك المتعلق بالأجسام المضادة!

التصميم والتصنيع والاستشارات – جودة صنع في ألمانيا

Hielscher الموجات فوق الصوتية معروفة جيدا لأعلى معايير الجودة والتصميم. المتانة والتشغيل السهل تسمح بالتكامل السلس للموجات فوق الصوتية لدينا في المنشآت الصناعية. يتم التعامل بسهولة مع الظروف القاسية والبيئات الصعبة بواسطة الموجات فوق الصوتية Hielscher.

Hielscher Ultrasonics هي شركة حاصلة على شهادة الأيزو وتركز بشكل خاص على الموجات فوق الصوتية عالية الأداء التي تتميز بأحدث التقنيات وسهولة الاستخدام. بطبيعة الحال، الموجات فوق الصوتية Hielscher هي CE المتوافقة وتلبية متطلبات UL، وكالة الفضاء الكندية وبنفايات.

مقارنة بين الشطف بالموجات فوق الصوتية مقابل تقنيات الشطف التقليدية

1. شطف التدرج: في الشطف المتدرج ، يتم تقليل قوة الربط بين البروتين المستهدف ومصفوفة التقارب تدريجيا عن طريق تغيير تكوين المخزن المؤقت للشطف. يمكن أن يتضمن ذلك عوامل متغيرة مثل الأس الهيدروجيني أو تركيز الملح أو تركيز الروابط المتنافسة. يسمح الشطف المتدرج بالضبط الدقيق لظروف الشطف لإطلاق البروتين المستهدف بشكل انتقائي مع تقليل الارتباط غير المحدد.
   مزايا الشطف بالموجات فوق الصوتية: يوفر الشطف بالموجات فوق الصوتية إطلاقا أسرع وأكثر اتساقا للبروتينات المرتبطة مقارنة بالشطف المتدرج. بينما يتطلب الشطف المتدرج تحسينا دقيقا ومراقبة لظروف الشطف ، يوفر الشطف بالموجات فوق الصوتية طريقة أبسط وأكثر كفاءة لاستعادة البروتين.
2. الشطف التنافسي: في الشطف التنافسي ، يتم إدخال تركيز عال من الربيطة المنافسة في مخزن الشطف لتعطيل الارتباط بين البروتين المستهدف ومصفوفة التقارب. يتنافس الرباط المنافس مع البروتين المستهدف على مواقع الربط على المصفوفة ، وبالتالي إزاحة البروتين وإطلاقه في الشحم.
   مزايا الشطف بالموجات فوق الصوتية: يوفر الشطف بالموجات فوق الصوتية بديلا ألطف وأكثر تنوعا للشطف التنافسي. قد يتطلب الشطف التنافسي استخدام تركيزات عالية من العوامل التشاوتروبيك (أي المذاب المشترك الذي يعطل شبكة الترابط الهيدروجيني بين جزيئات الماء ويقلل من استقرار الحالة الأصلية للبروتينات عن طريق إضعاف التأثير الكارهة للماء) أو المواد الكيميائية القاسية ، والتي يمكن أن تؤثر على استقرار البروتين ونشاطه. في المقابل ، يوفر الشطف بالموجات فوق الصوتية اضطرابا ميكانيكيا دون الحاجة إلى عوامل كيميائية إضافية ، مما يحافظ على سلامة البروتين ويضمن معدلات استرداد عالية.
3. الشطف الناجم عن درجة الحرارة: يتضمن الشطف الناجم عن درجة الحرارة تغيير درجة حرارة المخزن المؤقت للشطف لتعطيل الارتباط بين البروتين المستهدف ومصفوفة التقارب. يمكن تحقيق ذلك إما عن طريق زيادة أو خفض درجة الحرارة ، اعتمادا على تفاعل مصفوفة البروتين المحدد.
   مزايا الشطف بالموجات فوق الصوتية: يوفر الشطف بالموجات فوق الصوتية طريقة أكثر سرعة وتحكما لشطف البروتين مقارنة بالطرق التي تسببها درجة الحرارة. في حين أن الشطف الناجم عن درجة الحرارة قد يتطلب تحكما دقيقا في تدرجات درجة الحرارة وأوقات توازن أطول ، فإن الشطف بالموجات فوق الصوتية يوفر اضطرابا ميكانيكيا فوريا ، مما يؤدي إلى أوقات شطف أقصر وتحسين الكفاءة.
4. الشطف الأنزيمي: يستخدم الشطف الأنزيمي إنزيمات محددة تشق الروابط بين البروتين المستهدف ومصفوفة التقارب ، وتطلق البروتين في الشحم. هذه الطريقة مفيدة بشكل خاص للبروتينات المرتبطة بإحكام بالمصفوفة أو للتطبيقات التي تتطلب تحكما دقيقا في ظروف الشطف.
   مزايا الشطف بالموجات فوق الصوتية: يوفر الشطف بالموجات فوق الصوتية بديلا غير إنزيمي وخالي من المواد الكيميائية للشطف الأنزيمي. في حين أن الشطف الأنزيمي قد يتطلب تحسين تركيز الإنزيم ووقت الحضانة وظروف الأس الهيدروجيني ، فإن الشطف بالموجات فوق الصوتية يوفر طريقة مباشرة وقابلة للتطبيق عالميا لاستعادة البروتين دون الحاجة إلى كواشف إضافية أو معدات متخصصة.