FFPE yuqori o'tkazuvchanlik namunasini tayyorlash: oqsillarni ekstraksiya qilish va nuklein kislotani kesish
Yuqori o'tkazuvchan ultratovushli UIP400MTP bilan Hielscher Ultrasonics formalin fiksatsiyasi va kerosinli (FFPE) to'qimalarni tayyorlash muammolarini hal qiladi. Ultrasonikatsiya FFPE namunasini FFPE deparafinizatsiyasi, to'qimalarning lizisi, gomogenizatsiyasi, oqsillarni ekstraktsiyasi va DNK/RNKni kesish uchun ko'p miqdorda qanday qayta ishlashni bilib oling! Ultrasonik FFPE to'qimasini tayyorlashdan foydalaning – ko'p teshikli plitalarda katta namunali raqamlarni qayta ishlash! Ishonchli tadqiqot natijalari uchun yuqori sifatli namunalarni oling va yuqori namuna raqamlarini oling! Va nihoyat, lekin kamida vaqt va pulni tejash!
FFPE namunasini tayyorlash yuqori o'tkazuvchan sonikatsiya yordamida osonlashtiriladi
Qattiq to'qimalarni saqlash va arxivlashning eng keng tarqalgan usuli formalinni fiksatsiyalash va kerosin bilan biriktirish (FFPE) hisoblanadi. FFPE to'qimalarining namunalaridan biomolekulalarni olish ko'pincha saqlangan namunalarning sifati tufayli sezilarli qiyinchiliklarni keltirib chiqaradi. Molekulyar biologiya va klinik tadqiqotlarda bebaho aktivlar bo'lgan ushbu namunalar retrospektiv tadqiqotlar va diagnostik biomarkerlarni tekshirish uchun biologik ma'lumotlarning boy manbasini beradi. Biroq, formalinni biriktirish va parafinni joylashtirish jarayoni to'qimalar arxitekturasi va morfologiyasini saqlab qolgan holda, yuqori sifatli nuklein kislotalar va oqsillarni ajratib olishni murakkablashtiradi. Formalin nuklein kislotalar va oqsillarning o'zaro bog'lanishini keltirib chiqaradi, bu molekulyar parchalanish va kimyoviy modifikatsiyaga olib keladi. UIP400MTP yuqori samarali ultratovush apparati FFPE namunasini tayyorlashdagi qiyinchiliklarni qanday engishini bilib oling!
Samarali FFPE namunasini tayyorlash uchun ultrasonikator
- Foydalanish oson ish jarayoni: foydalanuvchilar uchun qulay bo'lgan soddalashtirilgan jarayonlar.
- Deparafinizatsiya, oqsillarni ekstraktsiya qilish, DNK / RNKni kesish
- Tez yuqori o'tkazuvchanlik bilan ishlov berish: ko'p quduqli plitalar bilan samarali ishlov berish.
- Samarali deparafinizatsiya: oqsillarning yaxshi eruvchanligi.
- Toksik bo'lmagan erituvchilar: ksilen kabi zararli organik erituvchilardan foydalanishni oldini oladi.
UIP400MTP yuqori o'tkazuvchan sonikator ko'p quduqli plitalarda yuqori quvvatli FFPE namunalarini qayta ishlash uchun
FFPE to'qimasidan oqsillarni ekstraksiya qilish texnikasidagi yutuqlar
Hielscher Ultrasonics yuqori samarali FFPE namunasini tayyorlashdagi muammolarni hal qiladi. Sonication mexanik tebranishlar va yo'naltirilgan kavitatsiyani yaratish uchun ultratovush to'lqinlaridan foydalanadi, hujayra tuzilmalarini samarali ravishda buzadi va biomolekulalarning eruvchanligini oshiradi. Ushbu uslub nuklein kislotasi va FFPE to'qimalaridan oqsil ekstraktsiyasining samaradorligi va rentabelligini oshirish, shuningdek kutubxona tayyorlash uchun DNK va RNKni kesish qobiliyati bilan mashhur bo'ldi. Shuni ta'kidlash kerakki, UIP400MTP ko'p chuqurlikli plastinka sonikatoridan foydalangan holda ultratovushlash quyi oqim ilovalari uchun ushbu biomolekulalarning yaxlitligini saqlaydi.
Nuklein kislotani yuqori o'tkazuvchanlik ultratovush yordamida kesish
Ko'p quduqli ultratovushli UIP400MTP yuqori o'tkazuvchanlik sozlamalarida foydalanish uchun FFPE namunalarini tayyorlashni yangi darajaga olib chiqadi. Ushbu multiwell-plastinkali sonikatsiya usuli bir vaqtning o'zida bir nechta namunalarni qayta ishlash uchun samarali va ishonchli echimni ta'minlaydi. Bu turli xil tahlil usullari, jumladan, keyingi avlod sekvensiyasi (NGS), miqdoriy PCR va proteomik tahlillar uchun juda muhim bo'lgan DNK, RNK va oqsillarni tez va takrorlanadigan ekstraktsiyani osonlashtiradi. Amplituda, davomiylik va harorat kabi sonikatsiya parametrlarini optimallashtirish olingan biomolekulalarning sifati va miqdorini yanada oshiradi.
Ko'p teshikli plitalar uchun UIP400MTP sonikatori FFPE to'qimalaridan DNK va RNKni parchalash va kesish uchun muhim afzalliklarni taqdim etadi. Ushbu tizimning o'ziga xos xususiyatlaridan biri uning DNK va RNK fragmentlarining tor o'lchamlariga erishish qobiliyatidir, bu 150-200 ta asosiy juftlik (bp) yoki 15-20 kilobaza juftlik uzunroq fragmentlarini olish uchun sonikatsiya intensivligini aniq sozlash imkonini beradi. kbp). Ushbu ko'p qirralilik UIP400MTP ni ham qisqa o'qiladigan, ham uzoq o'qiladigan ketma-ketlik ilovalari uchun ajralmas qiladi va keyingi avlod sekvensiyasi (NGS) va butun genom ketma-ketligi (WGS) uchun yuqori sifatli natijalarni ta'minlaydi. Uning parcha o'lchamini aniq nazorat qilish genomikaning barcha sohalaridagi tadqiqotchilar uchun juda muhimdir, chunki u namunalarni spetsifikatsiyalarga muvofiq tayyorlashga imkon beradi.
FFPE to'qimasida ilg'or echimlar uchun biz bilan bog'laning
FFPE namunalaridan biomolekulalarni samarali qayta tiklash, olingan nuklein kislotalar va oqsillarning yaxlitligini saqlash va natijalarning takrorlanishini ta'minlash uchun UIP400MTP ko'p quduqli plastinka sonikatorini kashf eting. Ushbu texnologiya boshqa tayyorgarlik va analitik ish oqimlari bilan uzluksiz birlashadi, FFPE to'qimalarining arxivlari yordamida molekulyar tadqiqotlarni soddalashtiradi va kuchaytiradi.
Fiksativlar va ularning ta'siri
Fiksatsiya uyali tuzilmalarni saqlaydigan, biokimyoviy reaktsiyalarni to'xtatadigan va parchalanishning oldini oluvchi namunani tayyorlashning muhim bosqichidir. Maxsus eksperimental talablarga qarab turli xil fiksatorlar qo'llaniladi. Eng keng tarqalgan ikkita fiksator formaldegid va paraformaldegid bo'lib, ular oqsillar va nuklein kislotalarni o'zaro bog'laydi, hujayralar va to'qimalarning morfologiyasi va antigenligini saqlaydi. Etanol, metanol va glutaraldegid kabi boshqa fiksatorlar maxsus ilovalar uchun ishlatiladi.
Formaldegid va paraformaldegid fiksatorlari aminokislotalar o'rtasida metilen ko'priklarini hosil qiladi, natijada oqsillar o'zaro bog'lanadi. Bu jarayon keyingi tahlil bosqichlarida ularning yaxlitligini saqlab, hujayra komponentlarini samarali ravishda harakatsizlantiradi. Ushbu fiksatorlarning ta'siriga kontsentratsiya, pH va harorat kabi omillar ta'sir qilishi mumkin va bu parametrlarni optimallashtirish uyali tuzilmalarning optimal saqlanishini ta'minlash uchun juda muhimdir.
Ultrasonik FFPE tayyorlashning afzalliklari
Ultrasonikatsiya an'anaviy usullardan ustun bo'lgan fiksatsiyalangan hujayralar va to'qimalarni buzish uchun kuchli texnikadir. U an'anaviy liziz usullariga nisbatan bir qator muhim afzalliklarni taklif etadi:
- Tezlik va samaradorlik: Ultrasonik liziz hujayralar va to'qimalarning tez buzilishini ta'minlaydi, mexanik yoki kimyoviy liziz usullari bilan solishtirganda ishlov berish vaqtini sezilarli darajada kamaytiradi. Ultrasonik zond tomonidan ishlab chiqarilgan yuqori chastotali tovush to'lqinlari mexanik kesish kuchlarini yaratadi, bu esa mahkamlangan hujayra tuzilmalarining buzilishiga olib keladi. Ushbu tez va samarali uzilish tadqiqotchilarga qisqa vaqt ichida katta hajmdagi namunalarni qayta ishlash imkonini beradi.
- Yumshoq va sozlanishi: Ultrasonik lizis oqsillar, nuklein kislotalar va fermentlar kabi sezgir biomolekulalarning shikastlanishini kamaytiradigan yumshoq buzilish mexanizmini taklif qiladi. Haddan tashqari issiqlik yoki kesish kuchlarini keltirib chiqaradigan mexanik usullardan farqli o'laroq, ultratovushli liziz hujayra ichidagi tarkibiy qismlarning yaxlitligi va funksionalligini saqlab qolgan holda hujayralarni buzish uchun boshqariladigan kavitatsiyadan foydalanadi.
- Ko'p qirralilik: Ultrasonik lizis turli xil fiksatorlarga qo'llanilishi mumkin, bu tadqiqotchilarga keng qamrovli fiksatsiyalangan namunalar bilan ishlash imkonini beradi. Formaldegid, paraformaldegid yoki muqobil fiksatorlardan foydalanishdan qat'i nazar, ultratovushli lizis doimiy ravishda samarali buzilishlarni ta'minlaydi va hujayra tarkibiy qismlarining optimal tiklanishini ta'minlaydi.
- Yuqori hosil va sifat: Ultrasonik lizis fiksatsiyalangan hujayralar va to'qimalarni bir xilda buzish qobiliyati tufayli buzilmagan hujayra komponentlarining yuqori hosildorligini osonlashtiradi. Bu oqsil tahlili, nuklein kislota ekstraktsiyasi va fermentativ tahlillar kabi quyi oqim ilovalariga ishonchli va takrorlanadigan natijalarni berish imkonini beradi.
- Avtomatlashtirish mosligi: Ultrasonik lizizni avtomatlashtirilgan tizimlarga osongina integratsiyalash mumkin, bu esa yuqori o'tkazuvchanlik namunalarini qayta ishlash imkonini beradi. Ushbu muvofiqlik tadqiqotchilarga ish jarayonlarini tartibga solish va mahsuldorlikni oshirish imkonini beradi, ayniqsa keng ko'lamli tadqiqotlarda.
96-quduqli plastinka sonikatori UIP400MTP mikrotitr va ko'p teshikli plitalarning sonikatsiyasi uchun
Ultrasonik lizis fiksatsiyalangan hujayralar va to'qimalarning buzilishini inqilob qildi va an'anaviy liziz usullariga nisbatan ko'plab afzalliklarni taqdim etdi. Uning tezligi, samaradorligi, selektivligi, ko'p qirraliligi, yuqori rentabelligi va avtomatlashtirish mosligi uni molekulyar biologiya va biotexnologiya tadqiqotlarida ajralmas vositaga aylantiradi. Kontaktsiz sonikatorlarni, shuningdek, zond tipidagi sonikatorni taklif qiluvchi Hielscher Ultrasonics sizning hayot faningiz uchun eng mos ultratovushli homogenizatorni taklif qiladi. Bitta namunalarni, bir nechta namunalarni yoki juda yuqori namuna raqamlarini bir vaqtning o'zida qayta ishlashni xohlaysizmi, biz sizga tadqiqot va diagnostika talablaringizga mos keladigan eng yaxshi sonikatorni taklif qilamiz.
Ko'p namunali va yuqori o'tkazuvchanlik namunalarini tayyorlash uchun Hielscher kontaktsiz sonikatorlari haqida ko'proq o'qing!
- bir martalik investitsiyalar
- o'z sarf materiallaridan foydalaning
- xususiy aksessuarlar va sarf materiallari uchun takroriy xarajatlar yo'q
- yuqori o'tkazuvchanlik
- aniqlik nazorati
- eng zamonaviy texnologiya
- ishonchlilik & mustahkamlik
- sozlanishi, aniq jarayon nazorati
- sanoat darajasi: doimiy ravishda 24/7 ishlashi mumkin
- oson va xavfsiz ishlash
- past texnik xizmat ko'rsatish
Sonikatorlarning hayot fanida qo'llanilishi haqida ko'proq o'qing!
Har qanday 96-quduqli plitalar, mikrotitr plitalari va ko'p quduqli plitalar uchun plastinka sonikatori UIP400MTP.
Dizayn, ishlab chiqarish va konsalting – Germaniyada ishlab chiqarilgan sifat
Hielscher ultrasonikatorlari eng yuqori sifat va dizayn standartlari bilan mashhur. Mustahkamlik va qulay foydalanish ultratovush qurilmalarimizni sanoat ob'ektlariga silliq integratsiya qilish imkonini beradi. Qo'pol sharoitlar va talabchan muhit Hielscher ultrasonikatorlari tomonidan osonlik bilan hal qilinadi.
Hielscher Ultrasonics ISO sertifikatiga ega kompaniya bo'lib, eng zamonaviy texnologiya va foydalanuvchilarga qulaylik bilan ajralib turadigan yuqori samarali ultratovush apparatlariga alohida e'tibor beradi. Albatta, Hielscher ultrasonikatorlari Idoralar talablariga javob beradi va UL, CSA va RoHs talablariga javob beradi.
Biz bilan bog'lanish! / Bizdan so'rang!
UIP400MTP ultratovush apparati: Multi-Well-Plate-da yuqori o'tkazuvchanlik FFPE namunasini tayyorlash
TSS
Quyida biz tez-tez so'raladigan savollarga javob beramiz, ular FFPE to'qimasini tayyorlash va FFPE namunalarini ultratovush qilish bilan bog'liq.
FFPE to'qimasi qanday tayyorlanadi?
FFPE to'qimasini tayyorlash bosqichlari: Yangi to'qimalarga ehtiyotkorlik bilan ishlov berish va qayta ishlash yuqori sifatli FFPE namunalarini yaratish uchun juda muhimdir. Hujayra me'morchiligi, nuklein kislotalar va oqsillarning saqlanishini ta'minlash quyi oqimni aniq tahlil qilish uchun juda muhimdir. Har bir bosqich - yig'ishdan tortib to joylashtirishgacha - turli tahlillar, jumladan, gistologik tekshiruv, immunohistokimyo va molekulyar tadqiqotlar uchun namunaning yaxlitligini ta'minlash uchun aniqlikni talab qiladi. To'g'ri bajarilgan bu fiksatsiya va joylashtirish jarayoni saqlanib qolgan to'qimalarning in vivo holatini to'g'ri aks ettirishini ta'minlaydi va ishonchli diagnostika va tadqiqot natijalarini beradi.
Biz sizga FFPE to'qimalarining namunalarini joylashtirish jarayonining 6 asosiy bosqichini ko'rsatamiz.
- To'qimalarni yig'ish
Tirik sutemizuvchilardan olingan biopsiya va to'qima madaniyati FFPE namunasini tayyorlash uchun yangi to'qimalarni olish uchun foydali manbalardir.
Aseptik texnikadan foydalanish muhim: ifloslanishni oldini olish uchun steril asboblar va qo'lqoplardan foydalaning. Ideal holda, to'qimalarni steril muhitda, masalan, jarrohlik to'plami yoki laminar oqim qopqog'ida to'plang.
Namuna juda mo'rt bo'lgani uchun uni sezgir ishlatish juda muhim: ishlov berishdagi kechikishlarni minimallashtiring va kesilgandan so'ng darhol to'qimalarni qayta ishlashni boshlang. Bu avtoliz va degradatsiyaning oldini olish uchun juda muhimdir. To'qimalarni xona haroratida saqlang; muzlashdan saqlaning, chunki u muz kristallari shakllanishiga va to'qimalarga zarar etkazishi mumkin. - To'qimalarni mahkamlash
Birinchidan, to'qima fiksator eritmasi bilan ishlanadi: neytral pH darajasida tamponlangan suvdagi 4% formaldegidga teng bo'lgan 10% neytral-buferli formalin (NBF) dan foydalaning.
To'qimalarni formalinga to'liq botiring. Fiksatorning to'qimalarga nisbati kamida 10:1 bo'lishini ta'minlang. Fiksatsiya vaqti odatda to'qimalarning turi va hajmiga qarab 6 dan 24 soatgacha davom etadi. Fiksatorning to'qimalarga to'liq kirib borishi muhim ahamiyatga ega. Shu bilan birga, ortiqcha fiksatsiya antigen olish jarayonini murakkablashtiradigan o'zaro bog'lanishga olib kelishi mumkin, kam fiksatsiya esa to'qimalarning yomon saqlanishiga olib kelishi mumkin. - To'qimalarni kesish
Ikkinchidan, fiksatorning etarli darajada kirib borishini ta'minlash uchun to'qimalarni taxminan 3-5 mm qalinlikda kesib oling. Tegishli gistologik tuzilmalarni olish uchun to'qimalarning to'g'ri yo'nalishini ta'minlang. Bu to'qima keyinchalik tahlil qilish uchun ishlatilganda ekstraksiya jarayonini osonlashtiradi. - Ruxsat etilgan namunani qayta ishlash
Endi, fiksatsiyalangan to'qimalarni suvsizlantirish kerak: fiksatsiyadan so'ng, kerosin mumi bilan to'liq kirib borishini ta'minlash uchun to'qimalarni suvsizlantirish kerak. Suvni olib tashlash uchun to'qimalarni etanolning bosqichma-bosqich seriyasidan (70%, 80%, 90% va 100%) o'tkazing.
Ksilol bilan tozalash: kerosin mumi suvda erimaydi, ammo ksilenda eriydi. Shuning uchun to'qimadagi suv ksilen bilan almashtirilishi kerak. Biroq, ksilenning o'zi suvda erimaydi, lekin spirtda eriydi, buning uchun suv birinchi navbatda spirt bilan almashtiriladigan oraliq bosqichni talab qiladi. Etanolni olib tashlash uchun to'qimalarni ksilen yoki ksilen o'rnini bosuvchi moddaga botiring va to'qimalarni kerosin infiltratsiyasiga tayyorlang.
Parafin yordamida infiltratsiya: to'qimalarni eritilgan kerosin mumi ichiga solib, to'liq infiltratsiyani ta'minlang. Ushbu bosqich odatda to'liq emdirishni ta'minlash uchun kerosinning bir nechta o'zgarishini o'z ichiga oladi. - To'qimalarni joylashtirish
Ushbu bosqichda to'qima to'qima blokiga mog'orlanadi: to'qimalarni kerakli yo'nalishdagi qolipga joylashtiring va ustiga eritilgan kerosin quying. Parafinni xona haroratida yoki sovuq plastinkada sovutish orqali qotib qolishga ruxsat bering. - Bo'limlarni ajratish va o'rnatish
Mikrotomiya: o'rnatilgan to'qimalarni kesish uchun parafin blokidan ingichka bo'laklarni (odatda 4-5 mikrometr) kesish uchun mikrotomdan foydalaning. Keyin namuna o'rnatiladi, keyinchalik bo'yash va mikroskopik tahlil qilish uchun bo'limlar shisha slaydlarga joylashtiriladi.
Nihoyat, gistologiya sifatini tekshiring: to'g'ri mahkamlash va qayta ishlashni ta'minlash uchun mikroskop ostida birinchi bo'limlarni baholang. To'qimalarning turi va kuzatilgan sifatga qarab protokollarni kerak bo'lganda sozlang.
FFPE to'qimalari RNK, DNK va oqsillarni tiklash, shuningdek saraton yoki boshqa kasallik belgilarini aniqlash uchun ishlatilishi mumkin. Ular yillar davomida saqlanishi mumkin va tadqiqotchilar va shifokorlar diagnostika va tadqiqot uchun to'qimalar namunalaridan qanday foydalanishining muhim qismidir.
FFPE to'qimalarining umumiy muammolari va qiyinchiliklari qanday?
Formalin bilan biriktirilgan, kerosin bilan o'rnatilgan (FFPE) to'qimalar namunalari tadqiqot va diagnostikada keng qo'llaniladi, biroq ular bir qator qiyinchiliklar va umumiy muammolarni keltirib chiqaradi:
- Biomolekulalarning degradatsiyasi: Uzoq muddatli fiksatsiya DNK, RNK va oqsillarning degradatsiyasiga olib kelishi mumkin, bu esa quyi oqim uchun yuqori sifatli nuklein kislotalar yoki oqsillarni ajratib olishni qiyinlashtiradi. To'qimalarning saqlanishi uchun to'g'ri fiksatsiya (kam va ortiqcha fiksatsiyaga yo'l qo'ymaslik) muhim ahamiyatga ega.
- Antigen niqobi: Fiksatsiya jarayoni antijenik joylarni maskalashi mumkin, immunohistokimyo va boshqa immunologik tahlillarda antikorlarni bog'lash samaradorligini pasaytiradi. Buning uchun ko'pincha antigen olish kerak bo'ladi, bu jarayon orqali epitopning niqoblanishi teskari bo'lib, epitop-antikor bog'lanishi tiklanadi. Biroq, to'liq antigenlik har doim ham tiklanmasligi mumkin.
- O'zgaruvchan fiksatsiya sifati: Fikslash vaqtlari va shartlaridagi farqlar namuna sifatining mos kelmasligiga olib kelishi mumkin, bu esa natijalarning takrorlanishi va solishtirilishiga ta'sir qiladi. Ishonchli fiksatsiya protokollaridan foydalaning va kam va ortiqcha fiksatsiyadan qoching.
- DNKning shikastlanishi va parchalanishi: FFPE namunalarini formalin bilan mahkamlash DNKning har xil turlariga zarar etkazishi mumkin, jumladan sitozin dezaminatsiyasi (C dan T gacha bo'lgan mutatsiyalar), oksidlanish shikastlanishi (masalan, G dan T gacha bo'lgan mutatsiyalarga olib keladigan 8-okso-guanin), shuningdek, niks kabi jismoniy buzilishlar, bo'shliqlar va DNK polimeraza faolligiga to'sqinlik qiladigan abasik joylar. Formalin fiksatsiyasi jarayoni DNKning parchalanishiga olib kelishi mumkin, bu PCR va sekvensiya kabi genetik va genomik tahlillarni murakkablashtiradi.
- RNK sifati: FFPE to'qimalaridan olingan RNK ko'pincha parchalanadi va kimyoviy jihatdan o'zgartiriladi, bu esa yuqori sifatli transkriptomik tahlillarni o'tkazishni qiyinlashtiradi.
- Protein modifikatsiyalari: Formalin oqsillarda kimyoviy modifikatsiyani keltirib chiqarishi mumkin, bu ularning tuzilishi va funktsiyasiga ta'sir qiladi, bu esa proteomik tahlillarga xalaqit berishi mumkin.
- Namuna ishlov berish artefaktlari: O'rnatish va kesish jarayonida mexanik stress va issiqlik artefaktlarni keltirib chiqarishi va to'qimalarga qo'shimcha zarar etkazishi mumkin.
- To'plamdan partiyaga o'zgaruvchanlik: Turli partiyalar orasidagi fiksatsiya va o'rnatish protokollarining o'zgarishi natijalarning sezilarli o'zgaruvchanligiga olib kelishi mumkin, bu esa tadqiqotlar o'rtasidagi taqqoslashni murakkablashtiradi.
- Saqlash muammolari: FFPE bloklarini uzoq muddatli saqlash vaqt o'tishi bilan qo'shimcha degradatsiyaga va nuklein kislota yaxlitligini yo'qotishiga olib kelishi mumkin, bu retrospektiv tadqiqotlar uchun arxiv namunalarining hayotiyligiga ta'sir qiladi.
O'zaro bog'lanish: Formalin fiksatsiyasi oqsillar va nuklein kislotalarning o'zaro bog'lanishiga olib keladi, bu molekulyar tahlilga to'sqinlik qilishi va immunohistokimyo va boshqa tahlillarning aniqligiga ta'sir qilishi mumkin.
Optimallashtirilgan protokollardan foydalanish, namunalarni ehtiyotkorlik bilan ishlatish va ilg'or usullarni qo'llash FFPE to'qimalaridan olingan ma'lumotlarning sifati va ishonchliligini oshirishga yordam beradi.
FFPE va muzlatilgan to'qimalar o'rtasidagi farq nima?
FFPE (Formalin bilan mahkamlangan, kerosin bilan o'rnatilgan) to'qima to'qimalarni mahkamlash uchun formalin yordamida saqlanadi va keyin kerosin mumi ichiga kiritiladi, bu esa to'qimalarning morfologiyasini saqlab qolgan holda xona haroratida uzoq muddatli saqlash imkonini beradi. Bundan farqli o'laroq, muzlatilgan to'qimalar muzlash orqali tez saqlanadi, bu nuklein kislotalar va oqsillarning yaxlitligini yaxshiroq saqlaydi, lekin juda past haroratlarda saqlashni talab qiladi.
FFPE joylashtirish uchun qanday kimyoviy moddalar ishlatiladi?
FFPE joylashtirish uchun ishlatiladigan kimyoviy moddalar odatda fiksatsiya uchun formalin va joylashtirish uchun kerosin mumini o'z ichiga oladi. FFPEni joylashtirish uchun to'qimalar odatda 10% (h/v) neytral tamponlangan formalin (FA) yoki paraformaldegid kukunidan tayyorlangan yangi tayyorlangan 4% (v/v) formaldegid eritmasi (PFA) yordamida o'rnatiladi. Formaldegidning suvdagi eritmasi bo'lgan formalin to'qimalarning morfologiyasini saqlab qolish va ortiqcha o'zaro bog'lanishning oldini olish uchun neytral pH darajasiga qadar tamponlanadi. Paraformaldegidga asoslangan eritma, shuningdek, oqsillarni o'zaro bog'lash orqali samarali fiksatsiyani ta'minlaydi va shu bilan to'qimalarning tuzilishini keyinchalik kerosin mumiga joylashtirish uchun barqarorlashtiradi. Ushbu kimyoviy moddalar fiksatsiya va joylashtirish jarayonida to'qimalarning yaxlitligi va morfologiyasini saqlab qolish uchun zarurdir.
FFPE namunalaridan kerosin qanday chiqariladi?
FFPE namunalaridan kerosinni olib tashlash uchun to'qimalarning bo'laklari odatda bir qator ksilen bilan yuviladi, so'ngra bir qator spirtli ichimliklar va nihoyat suv orqali regidratsiya qilinadi. Ksilen juda zaharli bo'lib, nafas olish muammolari, terining tirnash xususiyati va takroriy ta'sir qilish bilan uzoq muddatli potentsial ta'sirlar kabi sog'liq uchun xavf tug'dirishi sababli, ultratovushli kerosinni olib tashlash ko'plab laboratoriyalarda istiqbolli alternativa sifatida paydo bo'ladi. Ushbu usul ksilen kabi zaharli erituvchilarga ehtiyoj sezmasdan kerosinni samarali va xavfsiz olib tashlash uchun kuchli ultratovush to'lqinlaridan foydalanadi va shu bilan laboratoriya xodimlari uchun xavfni kamaytiradi va xavfsizroq ish muhitini yaratadi.
Yaxshi FFPE namunasi sifati uchun to'qimalarni qancha vaqt mahkamlashim kerak?
Fiksatsiya davomiyligi bo'yicha umumiy tavsiyalar odatda to'qimalar namunalarini formalinda 24 dan 48 soatgacha mahkamlashni taklif qiladi. Ushbu muddat odatda to'qimalarning morfologiyasi va hujayra tuzilmalarini saqlab qolish uchun etarli bo'lib, ortiqcha fiksatsiyani minimallashtiradi, bu esa nuklein kislotalar va oqsillarning haddan tashqari o'zaro bog'lanishi va degradatsiyasiga olib kelishi mumkin. Shu bilan birga, optimal fiksatsiya vaqti to'qimalarning hajmi va turiga qarab farq qilishi mumkin, kichikroq yoki ko'proq nozik namunalar qisqaroq fiksatsiya vaqtini talab qiladi. To'qimalarning avtolizi va degradatsiyasining oldini olish uchun adekvat fiksatsiyani muvozanatlash juda muhim, shu bilan birga quyi oqimdagi molekulyar tahlillarni qiyinlashtirishi mumkin bo'lgan uzoq muddatli fiksatsiyaga yo'l qo'ymaslik kerak.