ASTM E2799-22 Protokoll för antimikrobiell utvärdering

Hielscher UIP400MTP är en kraftfull och effektiv multi-well platta sonikator utformad för att effektivisera ultraljudsbehandling steg i ASTM E2799-22 protokollet. Genom att leverera enhetlig ultraljudsenergi över hela mikrotiterplattan säkerställer UIP400MTP konsekvent och tillförlitlig lossning av biofilmer från pinnlock utan att skada cellerna eller kompromissa med provintegriteten. Dess höga genomströmningskapacitet och användarvänliga drift minskar bearbetningstiden avsevärt samtidigt som reproducerbarheten förbättras, vilket gör den till en idealisk lösning för laboratorier som utför biofilmsviabilitetsanalyser och antimikrobiella effektivitetstester.

ASTM E2799

ASTM E2799 är en standardiserad testmetod utformad för att utvärdera effektiviteten av antimikrobiella medel mot biofilmer, med särskilt fokus på Pseudomonas aeruginosa. Biofilmer är komplexa mikrobiella samhällen som fäster på ytor och uppvisar ökad resistens mot antimikrobiella behandlingar, vilket gör dem till en betydande utmaning inom hälso- och sjukvård, industri och miljö. Denna metod använder MBEC-analysen (Minimum Biofilm Eradication Concentration) för att tillhandahålla ett tillförlitligt och reproducerbart ramverk för testning av desinfektionsmedel under realistiska biofilmsförhållanden.

Hur bidrar ultraljudsbehandling till ASTM E2799?

Ultraljudsbehandling spelar en avgörande roll i ASTM E2799-protokollet genom att underlätta lossning av biofilmer från testytor, vilket säkerställer en korrekt bedömning av mikrobiell livskraft efter behandling. Genom att använda kontrollerad ultraljudsenergi uppnår protokollet effektiv och konsekvent biofilmsstörning utan att skada cellerna, vilket möjliggör exakta och reproducerbara resultat. Detta gör ASTM E2799 till ett viktigt verktyg för att främja biofilmsforskning och utveckla effektiva antimikrobiella strategier.

Hur man kör MBEC-analysen i enlighet med ASTM E2799-22

ASTM E2799-22-protokollet beskriver stegen för att utvärdera effektiviteten av antimikrobiella medel mot biofilmer. När du använder Hielscher UIP400MTP mikrotiterplatta sonikator, protokollet kan anpassas för att införliva denna avancerade ultraljudsbehandling metod för biofilm avskiljning. Nedan följer en beskrivning av de steg som är skräddarsydda för att använda mikroplattans ultraljudssonikator UIP400MTP:

1. Framställning av biofilmer
   Förbered en steril 96-håls mikrotiterplatta med avtagbara pinnlock.
   Inokulera brunnarna med en standardiserad bakteriesuspension i ett lämpligt odlingsmedium.
   Placera pinnlocket på plattan och se till att pinnarna är helt nedsänkta i bakteriesuspensionen.
   Inkubera plattan under kontrollerade förhållanden (t.ex. temperatur och tid) för att tillåta biofilmbildning på pinnarna.
2. Behandling med antimikrobiella medel
   Efter att biofilm har bildats byts mediet ut mot ett nytt medium som innehåller de antimikrobiella testmedlen i olika koncentrationer.
   Sätt tillbaka locket på pinnen och inkubera under de förhållanden som anges i testdesignen.
3. Förberedelse för avlossning av biofilm
   Efter behandlingen, skölj pinnlocket genom att sänka ner det i en steril sköljlösning för att avlägsna kvarvarande antimikrobiella medel och löst vidhäftade planktonceller.
4. Biofilm lossnar med hjälp av UIP400MTP Sonicator
   Förbered en ny 96-håls mikrotiterplatta som innehåller ett återvinningsmedium (t.ex. neutraliserande buljong).
   Lossa biofilmerna genom att placera pinnlocket i brunnarna på återvinningsmediumplattan.
   Sätt in plattan i UIP400MTP ultraljudssonika och se till att locket och plattan är korrekt inriktade.
   Ställ in sonikatorn på 70%-80% amplitud och ultraljudsbehandla i 3-4 minuter i cykelläge, för att säkerställa konsekvent biofilmlossning utan celllys.
5. Bedömning av biofilmens livskraft
   Efter ultraljudsbehandling, bearbeta återvinningsmediet som innehåller fristående biofilmceller med hjälp av standard mikrobiologiska eller analytiska tekniker, såsom:
   • Räkningar av kolonibildande enheter (CFU): Utför seriella utspädningar och platta på agar för uppräkning av livskraftiga celler.
   • Mätningar av optisk densitet (OD): Använd spektrofotometrisk analys för att bedöma celldensitet.
   • Fluorescensbaserade viabilitetsanalyser: Kvantifiera levande och döda celler med hjälp av fluorescerande färgämnen.
6. Analys av data
   Jämför viabilitetsdata för behandlade och obehandlade biofilmer för att bestämma effektiviteten hos de antimikrobiella medlen.
   Beräkna den lägsta koncentrationen för utrotning av biofilm (MBEC) baserat på den koncentration som krävs för att eliminera livskraftiga biofilmceller.
7. kvalitetskontroll
   Säkerställa konsekventa ultraljudsbehandlingsförhållanden genom att regelbundet kalibrera UIP400MTP och kontrollera att biofilmavskiljningsprocessen inte resulterar i betydande celllys eller förstörelse.
   Inkludera lämpliga kontroller, t.ex. obehandlade biofilmer och blankprov med endast medium, för att validera resultaten.

Biofilmcellerna som bildades på stiften lossnade genom ultraljudsbehandling (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Tyskland, UIP250MTP) i 5 minuter i 96-brunnars plattor som innehöll färskt odlingsmedium för återhämtning av cellerna.
(Bild och studie: ©de Oliveira et al., 2016)

Genom att integrera UIP400MTP i ASTM E2799-22-arbetsflödet optimeras processen för avskiljning av biofilm för konsistens, effektivitet och tillämpningar med hög genomströmning.