ASTM E2799-22-protokoll för antimikrobiell utvärdering

Hielscher UIP400MTP är en kraftfull och effektiv ultraljudsapparat för flerbrunnsplattor, utformad för att effektivisera ultraljudsbehandlingssteget i ASTM E2799-22-protokollet. Genom att tillföra jämnt fördelad ultraljudsenergi över hela mikrotiterplattan säkerställer UIP400MTP en konsekvent och tillförlitlig lösgöring av biofilmer från stiftlock utan att skada cellerna eller äventyra provets integritet. Dess höga provgenomströmning och användarvänliga drift minskar bearbetningstiden avsevärt samtidigt som reproducerbarheten förbättras, vilket gör den till en idealisk lösning för laboratorier som utför analyser av biofilmers viabilitet och tester av antimikrobiell effekt.

ASTM E2799

ASTM E2799 är en standardiserad testmetod utformad för att utvärdera antimikrobiella medels effekt mot biofilmer, med särskilt fokus på Pseudomonas aeruginosa. Biofilmer är komplexa mikrobiella samhällen som fäster vid ytor och uppvisar förhöjd resistens mot antimikrobiella behandlingar, vilket gör dem till en betydande utmaning inom hälso- och sjukvård, industri och miljö. Denna metod använder analysen av minsta biofilmeradikerande koncentration (MBEC) för att tillhandahålla ett tillförlitligt och reproducerbart ramverk för testning av desinfektionsmedel under realistiska biofilmsförhållanden.

Hur bidrar ultraljudsbehandling till ASTM E2799?

Ultraljudsbehandling spelar en avgörande roll i ASTM E2799-protokollet genom att underlätta lösgöringen av biofilmer från testytor och därigenom säkerställa en noggrann bedömning av mikroorganismernas viabilitet efter behandling. Genom att använda kontrollerad ultraljudsenergi åstadkommer protokollet en effektiv och konsekvent upplösning av biofilmen utan att skada cellerna, vilket möjliggör precisa och reproducerbara resultat. Detta gör ASTM E2799 till ett oumbärligt verktyg för att föra biofilmsforskningen framåt och utveckla effektiva antimikrobiella strategier.

Så utförs MBEC-analysen i enlighet med ASTM E2799-22

ASTM E2799-22-protokollet beskriver stegen för att utvärdera antimikrobiella medels effekt mot biofilmer. Vid användning av Hielscher UIP400MTP, en ultraljudsapparat för mikrotiterplattor, kan protokollet anpassas för att införliva denna avancerade ultraljudsmetod för lösgöring av biofilmer. Nedan beskrivs stegen anpassade för användning av ultraljudsapparaten UIP400MTP för mikroplattor:

1. Framställning av biofilmer
   Förbered en steril mikrotiterplatta med 96 brunnar och avtagbara stiftlock.
   Inokulera brunnarna med en standardiserad bakteriesuspension i ett lämpligt odlingsmedium.
   Placera stiftlocket på plattan och säkerställ att stiften är helt nedsänkta i bakteriesuspensionen.
   Inkubera plattan under kontrollerade förhållanden (t.ex. temperatur och tid) för att möjliggöra biofilmsbildning på stiften.
2. Behandling med antimikrobiella medel
   Efter biofilmsbildningen ersätts mediet med färskt medium som innehåller de antimikrobiella medel som ska testas i olika koncentrationer.
   Sätt tillbaka stiftlocket och inkubera under de förhållanden som anges i försöksupplägget.
3. Förberedelse för lösgöring av biofilm
   Efter behandlingen sköljs stiftlocket genom att sänkas ned i en steril sköljlösning för att avlägsna kvarvarande antimikrobiella medel och löst vidhäftande planktoniska celler.
4. Lösgöring av biofilm med ultraljudsapparaten UIP400MTP
   Förbered en ny mikrotiterplatta med 96 brunnar som innehåller ett återhämtningsmedium (t.ex. neutraliserande buljong).
   Lösgör biofilmerna genom att placera stiftlocket i brunnarna på plattan med återhämtningsmedium.
   Placera plattan i ultraljudsapparaten UIP400MTP och säkerställ att locket och plattan är korrekt inriktade mot varandra.
   Ställ in ultraljudsapparaten på 70%–80% amplitud och ultraljudsbehandla i 3–4 minuter i cykelläge för att säkerställa konsekvent lösgöring av biofilm utan celllys.
5. Bedömning av biofilmens viabilitet
   Efter ultraljudsbehandlingen bearbetas återhämtningsmediet som innehåller lösgjorda biofilmsceller med mikrobiologiska eller analytiska standardtekniker, såsom:
   • Räkning av kolonibildande enheter (CFU): Utför seriespädningar och odla på agar för att bestämma antalet viabla celler.
   • Mätningar av optisk densitet (OD): Använd spektrofotometrisk analys för att bedöma celldensiteten.
   • Fluorescensbaserade viabilitetsanalyser: Kvantifiera levande och döda celler med fluorescerande färgämnen.
6. Dataanalys
   Jämför viabilitetsdata för behandlade och obehandlade biofilmer för att fastställa de antimikrobiella medlens effekt.
   Beräkna den minsta biofilmeradikerande koncentrationen (MBEC) utifrån den koncentration som krävs för att eliminera viabla biofilmsceller.
7. Kvalitetskontroll
   Säkerställ konsekventa ultraljudsbehandlingsförhållanden genom att regelbundet kalibrera UIP400MTP och verifiera att processen för lösgöring av biofilm inte leder till betydande celllys eller celldestruktion.
   Inkludera lämpliga kontroller, såsom obehandlade biofilmer och blankprover med enbart medium, för att validera resultaten.

Biofilmscellerna som bildats på stiften lösgjordes genom ultraljudsbehandling (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Tyskland, UIP250MTP) i 5 min i 96-brunnsplattor som innehöll färskt odlingsmedium för cellernas återhämtning.
(Bild och studie: ©de Oliveira et al., 2016)

Genom att integrera UIP400MTP i arbetsflödet enligt ASTM E2799-22 optimeras processen för lösgöring av biofilm med avseende på konsekvens, effektivitet och tillämpningar med hög provgenomströmning.