Екстракција бета-глукана из печурака помоћу ултразвука
Материјали и опрема
- Печурке (нпр. 100 г сецканих или исечених печурака)
- Хладна дестилована вода (нпр. 500 мл)
- Блендер или млин
- Стаклене чаше или тиквице
- Филтер папир или подешавање вакуумске филтрације
- Центрифуга (опционо)
- Алкохол (нпр. етанол) за преципитацију
- Фрижидер
- Пећ за сушење
Протокол екстракције бета-глукана
- Самељите или згњечите печурке (нпр. Цхага или Лион’ Грива печурка) у крупне честице од цца. 1 до 3 милиметра. На пример, користите 100 г сувих честица печурака.
- Затим додајте честице печурака у стаклену чашу или тиквицу.
- Затим додајте 500 мл дестиловане воде у чашу која садржи честице печурака које треба екстраховати. Однос воде и печурке може да варира у зависности од специфичне врсте печурака и величине честица.
- Након што сте промешали смешу, соникирајте смешу помоћу ултразвучног лабораторијског хомогенизатора (нпр. УП400Ст са сонотродом од 22 мм при 100% амплитуде или УП200Хт са сонотродом од 14 мм при 100% амплитуде) и одржавајте температуру испод 90°Ц. Ниже температуре помажу у очувању једињења осетљивих на топлоту, као што су бета-глукани током екстракције. Соницате за прибл. 5 до 10 минута када користите УП400Ст и 10 до 10 минута када користите УП200Хт, респективно. Имајте на уму да температура и време екстракције могу да варирају у зависности од ултразвучне снаге која се користи. Наравно, веће количине ће захтевати дуже време обраде соникацијом.
- Филтрирајте сониковану смешу кроз филтер папир или користите поставку за вакуумску филтрацију да бисте одвојили течност (која садржи екстраховане бета-глукане) од чврстог остатка печурака.
- Затим преципитирајте бета-глукане из течности додавањем алкохола (нпр. етанола). Типично, можете користити 2-3 запремине алкохола за падавине.
- Након тога, смешу чувајте у фрижидеру неколико сати како би се бета-глукани исталожили.
- Након таложења, можете пажљиво декантирати течност и сакупити талог бета-глукана.
- На крају, осушите бета-глукане у рерни на ниској температури (нпр. 40-50°Ц) док се сав алкохол не уклони и не добијете сув прах.
Печурке показују варијације у својим карактеристикама. Стога се процес екстракције бета-глукана може разликовати на основу фактора као што су специфичне врсте печурака, стање печурака (осушене или свеже), величина честица и температура екстракције. Да бисте оптимизовали своју процедуру екстракције, размислите о експериментисању са различитим параметрима, укључујући варирање односа чврстог и течног, подешавање температура, истраживање различитих растварача и тестирање различитих трајања ултразвука и подешавања амплитуде.
Ултразвучно потпомогнута ензимска екстракција бета-глукана
Ензимска екстракција уз помоћ ултразвука је метода која се користи за екстракцију бета-глукана из печурака користећи комбинацију ензима и ултразвучних таласа. Овај процес побољшава ефикасност екстракције разбијањем ћелијских зидова печурака и олакшавањем ослобађања бета-глукана.
Повећање екстракције бета-глукана из печурака
Једном када успоставите протокол екстракције бета-глукана који испуњава ваше захтеве, повећање процеса екстракције може бити једноставан подухват.
Батцх Ектрацтион Сцале-Уп
Ако планирате да повећате величину користећи методу серијске екстракције, препоручујемо да повећате запремину шарже уз задржавање константних односа чврстог и течног материјала и свих осталих параметара. Ако наставите да користите исти ултразвучни хомогенизатор, обавезно пропорционално повећајте време соникације. За шарже веће од 1 литра, можда ћете желети да размислите о уградњи споре мешалице да бисте одржали суспензију честица и побољшали уједначеност екстракције. Слика испод приказује 8-литарску серијску екстракцију која користи ултразвучни хомогенизатор УП400Ст у комбинацији са лабораторијском мешалицом.
Инлине екстракција гљива
За оне који су заинтересовани за континуирано издвајање већих количина бета-глукана из печурака, Хиелсцхер Ултрасоницс нуди реакторе са проточним ћелијама дизајниране за екстракцију ботаничког материјала. Ако се ово односи на вас, препоручујемо вам да нам се обратите директно за више информација. Наш технички тим ће радо помоћи у одређивању најприкладнијег подешавања за ваше специфичне потребе. Међутим, спровођење претходно поменутог лабораторијског експеримента са вашим специфичним врстама печурака може бити од непроцењиве вредности у разумевању прецизних захтева процеса. Слика испод приказује велики реактор са проточним ћелијама са ултразвучним хомогенизатором УИП4000хдТ за екстракцију бета-глукана при приближно 50 до 200 литара раствора печурака на сат.
Емпиријска концентрација бета-глукана врста гљива
Испод ћете наћи листу емпиријске концентрације бета-глукана која је екстрахована из различитих врста печурака.
Врсте гљива | Укупно 1,3-1,6-β-Д-глукан (г/100г суве масе) |
---|---|
Вргањ пинопхилус | 9,8% |
Суиллус гранулатус | 13,3% |
Цратереллус цорнуцопиоидес | 4,5% |
Суиллус вариегатус | 13,7% |
Хиднум репандум | 4,1% |
Гиропорус цианесценс | 14,3% |
Трицхоломопсис рутиланс | 10,2% |
Агарицус биспорус (портобелло) | 4% |
Агарицус биспорус (цремини) | 4% |
Аурицулариа аурицулар-јудае | 16,8% |
Садржај 1,3-1,6-β-Д-глукана у анализираним самониклим и гајеним печуркама, Извор:Миронцзук-Цходаковска ет ал. (2017): Квантитативна процена садржаја 1,3-1,6-Β-Д-глукана у дивљим врстама јестивих пољских гљива. Роцз Панств Закл Хиг 2017;68(3):281-290.

СоноСтатион: Мобилни систем кључ у руке за ултразвучну обраду – који се састоји од ултразвучних дисперзатора, пумпе, мешалице и резервоара

УИП4000хдТ ултразвучни хомогенизатор за прераду приближно 50 до 200 литара раствора печурака на сат
Квантификација концентрације бета-глуканског екстракта гљива
Концентрација бета-глукана након екстракције може се квантификовати различитим методама, у зависности од врсте бета-глукана и специфичних захтева анализе. Уобичајене методе за квантификацију концентрације бета-глукана су наведене у наставку. Наравно, избор методе зависи од фактора као што су потребна тачност и расположива опрема.
-
Гравиметријска метода
- Принцип: Ова метода се заснива на таложењу бета-глукана етанолом, након чега следи сушење и вагање талога.
- Процедура: Узорак се раствори у води, третира етанолом да би се исталожили бета-глукани, а затим се талог сакупи, осуши и измери.
- Предности: Једноставно и широко коришћено.
- Ограничења: Мање прецизно у поређењу са другим методама.
-
Колориметријске методе
- Принцип: Ове методе укључују реакције боје са специфичним реагенсима који производе промену боје пропорционалну концентрацији бета-глукана.
-
Примери:
- Метода фенол-сумпорне киселине: Ова метода укључује третирање узорка концентрованом сумпорном киселином и фенолом, што раствор постаје наранџасто. Интензитет боје је пропорционалан концентрацији бета-глукана.
- Антхроне метода: Антхроне реагенс реагује са бета-глуканима да би произвео плаво-зелену боју, а интензитет боје се мери.
- Предности: Осетљив и погодан за анализу високе пропусности.
- Ограничења: Интерференција од других једињења и потреба за специфичним реагенсима.
-
Ензимски тестови
- Принцип: Ензимски тестови користе ензиме као што је β-глуканаза за разлагање бета-глукана у једноставније шећере, а ослобођени шећери се квантификују.
- Предности: Веома специфичан и тачан.
- Ограничења: Захтева специјализовану опрему и реагенсе.
-
Течна хроматографија високих перформанси (ХПЛЦ)
- Принцип: ХПЛЦ раздваја и квантификује једињења на основу њихових интеракција са хроматографском колоном.
- Процедура: Бета-глукани се хидролизују у моносахариде, а добијени шећери се одвајају и квантификују помоћу ХПЛЦ.
- Предности: Веома прецизан и погодан за сложене узорке.
- Ограничења: Захтева специјализовану опрему и стручност.
-
Специфиц Иммуноассаис
- Принцип: Имунолошки тестови користе антитела специфична за бета-глукане за квантификацију њихове концентрације.
-
Примери:
- ЕЛИСА (ензимски имуносорбентни тест): У овој методи, ензимско-везано антитело производи промену боје када се везује за бета-глукане.
- Тестови бочног протока: Ово су брзи тестови који дају видљив резултат на тест траци.
- Предности: Висока специфичност и осетљивост.
- Ограничења: Захтева специфична антитела и може бити скупља.