Ultrasonication este o metodă importantă de procesare pentru izolarea virusului monkeypox (MPXV) din probele analitice, pentru fragmentarea ADN-ului virusului, precum și în fabricarea vaccinului monkeypox. Pentru pregătirea probei înainte de diagnosticare și analiză (PCR, ELISA etc.) ultrasonication este utilizat pentru a liza celulele pentru a elibera virusul monkeypox din interiorul celulei și / sau pentru a fragmenta ADN-ul. În producția de vaccinuri, aplicațiile variază de la prepararea particulelor de virus / ADN- ului, încapsularea în purtătorii de medicamente și formularea inoculului.
Mai jos puteți găsi informații detaliate despre pregătirea probei de virus monkeypox cu ultrasunete, precum și producția de vaccin MPXV ultrasonically asistată.

Ce veți găsi pe această pagină:

• Liza cu ultrasunete pentru extracția virusului Monkeypox
• Fragmentarea cu ultrasunete a ADN-ului virusului Monkeypox
• Aplicații cu ultrasunete în producția de vaccin MPXV

Liza cu ultrasunete și fragmentarea ADN-ului înainte de reacția în lanț a polimerazei (PCR)

O infecție cu virusul monkeypox este detectată prin testarea amplificării acidului nucleic (NAAT), folosind reacția în lanț a polimerazei în timp real sau convențională (PCR), pentru detectarea secvențelor unice de ADN viral. Proba (de exemplu, din schimbul nazofaringian sau biopsiile cutanate) conține virusul în celule.
Pentru analiză, virusul trebuie eliberat din celulele ans ADN-ul viral trebuie să fie fragmentat pentru PCR.

Liza cu ultrasunete:

Întreruperea / liza celulelor cu ultrasunete este o metodă fiabilă și eficientă de a izola virușii din probele celulare și, prin urmare, o tehnică preferabilă față de agenții chimici, cum ar fi lizozimul, proteinaza K și diferiți detergenți care sunt utilizați alternativ pentru a obține liza celulară și eliberarea ADN-ului.
Cu toate acestea, utilizarea unor astfel de reactivi chimici necesită pregătire a probei consumatoare de timp în mai multe etape înainte de analiza PCR pentru a preveni inhibarea reacției PCR. Deoarece inhibitorii PCR afectează eficiența amplificării, variațiile mici ale cantității de inhibitori care nu sunt îndepărtați pot duce la variații mari ale amplificării produsului PCR (Diaco, 1995).
Avantajul ultrasonication pentru liză este că perturbarea completă a structurilor celulare și eliberarea ADN-ului fără a fi nevoie de reactivi de lizare și pregătirea probei consumatoare de timp sunt de dorit. (cf. Fykse et al., 2003)

Fragmentarea ADN-ului cu ultrasunete:

Fragmentarea ADN-ului cu ultrasunete este simplă și fiabilă, deoarece se produce fragmente de ADN tunabile în lungime (basepairs, bp). Folosind ultrasunete, ADN-ul poate fi fragmentat în mod eficient la lungimea ADN-ului vizat. Controlul precis asupra parametrilor cu ultrasunete și opțiunile sofisticate de răcire împiedică degradarea ADN-ului.
Citiți mai multe despre fragmentarea ADN-ului cu ultrasunete!

Aplicații cu ultrasunete în Monkeypox Virus Vaccin

Vaccinurile folosite împotriva virusului monkeypox sunt în prezent vaccinuri cu virus viu. Vaccinurile nou dezvoltate ar putea folosi alte platforme, cum ar fi cele bazate pe ADN-ul The conține în prezent un vaccinia Ankara viurs modificat, un ortopoxvirus atenuat, care nu se reproduce. De asemenea, conține Tris (tris-aminometan) și clorură de sodiu. Vaccinul poate conține, de asemenea, cantități mici de ADN și proteine din celulele fibroblaste ale embrionului de pui, care sunt utilizate pentru a crește virusul vaccinului, benzonaza și compușii antibiotici, cum ar fi gentamicina și ciprofloxacina.

Omogenizarea cu ultrasunete este utilizată în producția de vaccinuri cu virus viu atenuate, vaccinuri ADN, cocktail-uri ADN multi-valente, vaccinuri ARNm, vaccinuri proteice recombinante, vaccinuri cu particule asemănătoare virusului etc.

Puteți găsi mai multe informații aprofundate despre aplicațiile cu ultrasunete pentru îmbunătățirea fabricării vaccinului!

Protocolul pentru izolarea cu ultrasunete a virusului Monkeypox

Echipa de cercetare a Stittelaar (2005) a folosit liza cu ultrasunete pentru a elibera virusul monkeypox din cultura de celule gazdă de creștere, precum și din celulele obținute prin schimburi de gât de la primate infectate.

Monkeypox Vaccin Pregătirea:

Virusurile Monkeypox au fost cultivate pe celule fibroblaste embrionare de pui fără agenți patogeni specifici. După incubare timp de 1 până la 2 zile, suspensia de celule virale a fost recoltată printr-o rundă de îngheț-dezghețare și apoi concentrată prin centrifugare. Pelete a fost resuspended și supuse la mai multe runde de omogenizare cu ultrasunete.

Monkeypox Virus Izolarea de macaci vaccinate:

Probele au fost înghețate-dezghețate de trei ori și sonicate într-o CupHorn cu ultrasunete. Două diluții (1:10 și 1:100) în mediul de transport completat cu ser bovin fetal 1% au fost utilizate pentru a inocula monostraturile cu celule Vero în plăci cu șase godeuri. După 1 h de incubare la 37°C, inoculul a fost îndepărtat și înlocuit cu mediu de cultură suplimentat cu ser bovin fetal 1%. Monostraturile au fost cultivate timp de 5 zile la 37°C și colorate cu o soluție de violet de cristal.
(cf. Stittelaar et al., 2005)

Ultrasonicators pentru analiza virusului și producția de vaccin

Hielscher Ultrasonics portofoliu larg de produse oferă ultrasonicator ideal pentru laboratoarele de cercetare și analitice, precum și pentru fabricarea de vaccinuri industriale.
Hielscher Ultrasonics este specializată în proiectarea, fabricarea și distribuția ultrasonicators de înaltă performanță și sono-bioreactoare pentru utilizarea în laboratoarele de cercetare și analitice, precum și pentru punerea în aplicare în producția de vaccin industrial (de exemplu. vaccinuri. Api).
Sonicare poate fi aplicat la vasele deschise, reactoare închise continuu agitate și reactoare cu flux continuu. Toate părțile sistemelor cu ultrasunete, care intră în contact cu mediul lichid, sunt fabricate din oțel inoxidabil, titan sau sticlă. Piesele autoclavabile si fitingurile sanitare asigura productia sub condiții de calitate farmaceutică.
Înregistrarea automată a datelor: Software-ul inteligent înregistrează parametrii procesului de Sonicare automat pe cartela de memorie SD integrată. Controlul precis al tuturor parametrilor de proces asigură reproductibilitatea. standardizarea producțieiși facilitează îndeplinirea standardelor de siguranță a produselor farmaceutice.
Hielscher Ultrasonics’ procesoare cu ultrasunete sunt foarte fiabile și pot fi controlate cu precizie. Toate ultrasonicators industriale pot ajustate pentru a oferi întreaga gamă de la amplitudini mai mici la amplitudini foarte mari. Robustețea sistemelor cu ultrasunete Hielscher permite funcționarea 24/7 în condiții grele și în medii solicitante.

Tabelul de mai jos vă oferă o indicație a capacității de procesare aproximativă a ultrasonicators noastre: