Aplicații cu ultrasunete în MonkeyPox Virus

Ultrasonication este o metodă importantă de procesare pentru izolarea virusului monkeypox (MPXV) din probele analitice, pentru fragmentarea ADN-ului virusului, precum și în fabricarea vaccinului monkeypox. Pentru pregătirea probei înainte de diagnosticare și analiză (PCR, ELISA etc.) ultrasonication este utilizat pentru a liza celulele pentru a elibera virusul monkeypox din interiorul celulei și / sau pentru a fragmenta ADN-ul. În producția de vaccinuri, aplicațiile variază de la prepararea particulelor de virus / ADN- ului, încapsularea în purtătorii de medicamente și formularea inoculului.
Mai jos puteți găsi informații detaliate despre pregătirea probei de virus monkeypox cu ultrasunete, precum și producția de vaccin MPXV ultrasonically asistată.

 

Ce veți găsi pe această pagină:

Cerere de informatie





Ultrasonicators de înaltă performanță sunt un instrument critic de prelucrare în producția de multe vaccinuri.

Acest sistem de ultrasonicators 2x 1kW pentru funcționarea fluxului continuu este instalat într-o unitate de producție de vaccin.

Liza cu ultrasunete și fragmentarea ADN-ului înainte de reacția în lanț a polimerazei (PCR)

O infecție cu virusul monkeypox este detectată prin testarea amplificării acidului nucleic (NAAT), folosind reacția în lanț a polimerazei în timp real sau convențională (PCR), pentru detectarea secvențelor unice de ADN viral. Proba (de exemplu, din schimbul nazofaringian sau biopsiile cutanate) conține virusul în celule.
Pentru analiză, virusul trebuie eliberat din celulele ans ADN-ul viral trebuie să fie fragmentat pentru PCR.

Liza cu ultrasunete:

Ultrasonicator UP200Ht cu microtip S26d2 pentru liza cu ultrasunete a probelor biologiceÎntreruperea / liza celulelor cu ultrasunete este o metodă fiabilă și eficientă de a izola virușii din probele celulare și, prin urmare, o tehnică preferabilă față de agenții chimici, cum ar fi lizozimul, proteinaza K și diferiți detergenți care sunt utilizați alternativ pentru a obține liza celulară și eliberarea ADN-ului.
Cu toate acestea, utilizarea unor astfel de reactivi chimici necesită pregătire a probei consumatoare de timp în mai multe etape înainte de analiza PCR pentru a preveni inhibarea reacției PCR. Deoarece inhibitorii PCR afectează eficiența amplificării, variațiile mici ale cantității de inhibitori care nu sunt îndepărtați pot duce la variații mari ale amplificării produsului PCR (Diaco, 1995).
Avantajul ultrasonication pentru liză este că perturbarea completă a structurilor celulare și eliberarea ADN-ului fără a fi nevoie de reactivi de lizare și pregătirea probei consumatoare de timp sunt de dorit. (cf. Fykse et al., 2003)

Fragmentarea ADN-ului cu ultrasunete:

Fragmentarea ADN-ului cu ultrasunete este simplă și fiabilă, deoarece se produce fragmente de ADN tunabile în lungime (basepairs, bp). Folosind ultrasunete, ADN-ul poate fi fragmentat în mod eficient la lungimea ADN-ului vizat. Controlul precis asupra parametrilor cu ultrasunete și opțiunile sofisticate de răcire împiedică degradarea ADN-ului.
Citiți mai multe despre fragmentarea ADN-ului cu ultrasunete!

 

Videoclipul arată sistemul de pregătire a probelor cu ultrasunete UIP400MTP, care permite pregătirea fiabilă a probelor de orice plăci standard multi-bine folosind ultrasunete de mare intensitate. Aplicațiile tipice ale UIP400MTP includ liza celulară, ADN-ul, ARN-ul și forfecarea cromatinei, precum și extracția proteinelor.

Ultrasonicator UIP400MTP pentru sonicare placă multi-bine

Cerere de informatie





Aplicații cu ultrasunete în Monkeypox Virus Vaccin

Ultrasonication este folosit pentru a produce vaccinuri, cum ar fi vaccinuri monkeypox. Vaccinurile folosite împotriva virusului monkeypox sunt în prezent vaccinuri cu virus viu. Vaccinurile nou dezvoltate ar putea folosi alte platforme, cum ar fi cele bazate pe ADN-ul The conține în prezent un vaccinia Ankara viurs modificat, un ortopoxvirus atenuat, care nu se reproduce. De asemenea, conține Tris (tris-aminometan) și clorură de sodiu. Vaccinul poate conține, de asemenea, cantități mici de ADN și proteine din celulele fibroblaste ale embrionului de pui, care sunt utilizate pentru a crește virusul vaccinului, benzonaza și compușii antibiotici, cum ar fi gentamicina și ciprofloxacina.

Omogenizarea cu ultrasunete este utilizată în producția de vaccinuri cu virus viu atenuate, vaccinuri ADN, cocktail-uri ADN multi-valente, vaccinuri ARNm, vaccinuri proteice recombinante, vaccinuri cu particule asemănătoare virusului etc.

Aplicațiile ultrasunetelor în producția de vaccinuri variază de la

  • dispersia particulelor și agenților virusului
  • emulsificare
  • inactivarea virușilor
  • formularea purtătorului de droguri (NLC, SLN)
  • încapsulare
  • dizolvarea agenților
  • prepararea adjuvanților
  • Degazare / De-Aerare

 

Puteți găsi mai multe informații aprofundate despre aplicațiile cu ultrasunete pentru îmbunătățirea fabricării vaccinului!

Protocolul pentru izolarea cu ultrasunete a virusului Monkeypox

Echipa de cercetare a Stittelaar (2005) a folosit liza cu ultrasunete pentru a elibera virusul monkeypox din cultura de celule gazdă de creștere, precum și din celulele obținute prin schimburi de gât de la primate infectate.

Monkeypox Vaccin Pregătirea:

Virusurile Monkeypox au fost cultivate pe celule fibroblaste embrionare de pui fără agenți patogeni specifici. După incubare timp de 1 până la 2 zile, suspensia de celule virale a fost recoltată printr-o rundă de îngheț-dezghețare și apoi concentrată prin centrifugare. Pelete a fost resuspended și supuse la mai multe runde de omogenizare cu ultrasunete.

Monkeypox Virus Izolarea de macaci vaccinate:

Probele au fost înghețate-dezghețate de trei ori și sonicate într-o CupHorn cu ultrasunete. Două diluții (1:10 și 1:100) în mediul de transport completat cu ser bovin fetal 1% au fost utilizate pentru a inocula monostraturile cu celule Vero în plăci cu șase godeuri. După 1 h de incubare la 37°C, inoculul a fost îndepărtat și înlocuit cu mediu de cultură suplimentat cu ser bovin fetal 1%. Monostraturile au fost cultivate timp de 5 zile la 37°C și colorate cu o soluție de violet de cristal.
(cf. Stittelaar et al., 2005)

În acest videoclip vă arătăm un sistem cu ultrasunete de 2 kilowați pentru funcționarea inline într-un dulap purgeabil. Hielscher furnizează echipamente cu ultrasunete pentru aproape toate industriile, cum ar fi industria chimică, farmaceutică, cosmetice, procese petrochimice, precum și pentru procesele de extracție pe bază de solvenți. Acest dulap din oțel inoxidabil purgeabil este proiectat pentru a funcționa în zone periculoase. În acest scop, dulapul sigilat poate fi curățat de client cu azot sau aer proaspăt pentru a preveni pătrunderea gazelor inflamabile sau a vaporilor în dulap.

2x 1000 Watts Ultrasonicators în cabinet purgeable pentru instalarea în zone periculoase

Ultrasonicators pentru analiza virusului și producția de vaccin

Hielscher Ultrasonics portofoliu larg de produse oferă ultrasonicator ideal pentru laboratoarele de cercetare și analitice, precum și pentru fabricarea de vaccinuri industriale.
Hielscher Ultrasonics este specializată în proiectarea, fabricarea și distribuția ultrasonicators de înaltă performanță și sono-bioreactoare pentru utilizarea în laboratoarele de cercetare și analitice, precum și pentru punerea în aplicare în producția de vaccin industrial (de exemplu. vaccinuri. Api).
Control precis asupra parametrilor de proces cu ultrasunete de hielscher ultrasonics' software inteligentSonicare poate fi aplicat la vasele deschise, reactoare închise continuu agitate și reactoare cu flux continuu. Toate părțile sistemelor cu ultrasunete, care intră în contact cu mediul lichid, sunt fabricate din oțel inoxidabil, titan sau sticlă. Piesele autoclavabile si fitingurile sanitare asigura productia sub condiții de calitate farmaceutică.
Înregistrarea automată a datelor: Software-ul inteligent înregistrează parametrii procesului de Sonicare automat pe cartela de memorie SD integrată. Controlul precis al tuturor parametrilor de proces asigură reproductibilitatea. standardizarea producțieiși facilitează îndeplinirea standardelor de siguranță a produselor farmaceutice.
Hielscher Ultrasonics’ procesoare cu ultrasunete sunt foarte fiabile și pot fi controlate cu precizie. Toate ultrasonicators industriale pot ajustate pentru a oferi întreaga gamă de la amplitudini mai mici la amplitudini foarte mari. Robustețea sistemelor cu ultrasunete Hielscher permite funcționarea 24/7 în condiții grele și în medii solicitante.

Tabelul de mai jos vă oferă o indicație a capacității de procesare aproximativă a ultrasonicators noastre:

volum lot Debit Aparate recomandate
plăci multi-well / microtiter N/a UIP400MTP
1 la 500mL 10 până la 200 ml / min UP100H
10 la 2000ml 20 până la 400ml / min Uf200 ः t. UP400St
0.1 la 20L 0.2 4L / min UIP2000hdT
10 100L 2 până la 10L / min UIP4000hdT
N/a 10 la 100L / min UIP16000
N/a mai mare grup de UIP16000

Contacteaza-ne! / Intreaba-ne!

Cere mai multe informații

Vă rugăm să folosiți formularul de mai jos pentru a solicita informații suplimentare despre procesoare cu ultrasunete, aplicații și preț. Vom fi bucuroși să discutăm procesul cu tine și să vă oferim un sistem cu ultrasunete care îndeplinește cerințele dumneavoastră!









Vă rugăm să rețineți Politica de confidentialitate.


Omogenizatoare cu ultrasunete sunt fiabile pentru forfecare ADN-ului

Cu ultrasunete DNA Forfecare
Adaptare după Jkwchui sub CC-BY-SA.03



Literatură / Referințe

  • Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
  • Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidovudine in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
  • J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
  • Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
  • Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.

Ce trebuie să știți

Monkeypox Virus

Monkeypox (MPV, MPXV sau hMPXV) este o specie de virus ADN dublu catenar, care provoacă o boală zoonotică virală. Această boală este cunoscută sub numele de infecție cu monkeypox și poate apărea la om și animale. Face parte din genul Orthopoxvirus din familia Poxviridae. Virusul Monkeypox este unul dintre ortopoxvirusul uman împreună cu virusurile variola (VARV), cowpox (CPX) și vaccinia (VACV). Ortopoxvirusurile se caracterizează prin particule mari de virus în formă de cărămidă, care conțin un genom ADN dublu catenar de aproximativ 200.000 bp.

Test ELISA

ELISA reprezintă testul imunosorbant legat de enzime și este o imunotestare etichetată care este considerată standardul de aur al imunotestelor. ELISA este un test imunologic, evaluat pentru sensibilitatea sa diagnostică ridicată, este utilizat pentru a detecta și cuantifica moleculele, inclusiv anticorpii, antigenele, proteinele, glicoproteinele și hormonii. Principiul ELISA se bazează pe o interacțiune antigen-anticorp. Prin această interacțiune antigen-anticorp, anticorpii specifici se leagă de antigenul țintă. Numai atunci când interacțiunea are loc, substratul se poate lega de enzimă și se poate observa o conversie ulterioară a substratului, ceea ce înseamnă că se obține un rezultat pozitiv.


Ultrasunete de înaltă performanță! Gama de produse Hielscher acoperă întregul spectru de la ultrasonicator de laborator compact peste unități de banc-top la sisteme cu ultrasunete complet industriale.

Hielscher Ultrasonics produce omogenizatoare cu ultrasunete de înaltă performanță de la laborator la dimensiunea industrială.