Eluția anticorpilor prin sonicare folosind sonicare cu randament ridicat

Cromatografia de afinitate este o tehnică puternică pentru purificarea proteinelor, care necesită Eluția nespecifică asistată ultrasonically este o tehnică fiabilă de pregătire a probei pentru a obține anticorpi din cromatografia de afinitate. Eluția eficientă și reproductibilă a anticorpilor țintă legați de matricele de afinitate este îmbunătățită semnificativ prin sonicare. Placa sonicator cu randament ridicat UIP400MTP este optim potrivită pentru a elua numere mari de probe în plăci cu 96 de godeuri, microtitrare și multigodeu și facilitează recuperarea anticorpilor în cromatografia de afinitate.

Cum Sonicare facilita Eluția?

Folosind eluție nespecifică intensificată ultrasonically, lucrătorii de laborator și oamenii de știință pot recupera eficient anticorpii purificați din coloanele cromatografice de afinitate. Acești anticorpi purificați sunt rulați prin aplicații în aval în diverse domenii, cum ar fi imunologia, biotehnologia și diagnosticarea medicală.

Eluția este o etapă de pregătire a probei utilizată în mod obișnuit pentru cromatografia de afinitate: Cromatografia de afinitate exploatează interacțiunile foarte specifice dintre o moleculă țintă (cum ar fi un anticorp) și un ligand imobilizat pe o matrice cromatografică. Acest lucru permite purificarea selectivă a moleculei țintă dintr-un amestec complex, utilizând afinitatea specifică de legare a moleculelor, de exemplu anticorpi.
Legarea specifică a anticorpilor: Anticorpii sunt adesea purificați folosind cromatografia de afinitate, unde se leagă selectiv de un ligand imobilizat pe rășina cromatografică. Acesta poate fi un antigen, o proteină A / G sau orice altă moleculă care interacționează în mod specific cu anticorpul de interes.
Eluție: După legarea anticorpului țintă la matrice, următorul pas implică eluarea (sau spălarea) anticorpului legat din rășină. Această etapă de eluare implică, de obicei, întreruperea legăturii specifice dintre anticorp și ligand. Acest pas poate fi facilitat prin sonicare.
Sonda cu ultrasunete UP50H este un omogenizator de laborator adesea folosit ca perturbator celular, dispersor și emulgator în laboratoare.Eluție nespecifică asistată ultrasonically: Spre deosebire de metodele specifice de eluare care perturbă numai interacțiunea anticorp-ligand, metodele nespecifice de eluare perturbă toate interacțiunile cu rășina, inclusiv cele nespecifice. Acest lucru poate fi avantajos atunci când aveți de-a face cu contaminanți puternic legați care ar putea interfera cu procesul de purificare. Aici vine sonicare în joc! Undele ultrasonice sunt utilizate pentru a genera bule de cavitație în tamponul de eluție. Când aceste bule se prăbușesc în apropierea matricei de rășină, ele produc forțe de forfecare localizate intense și microstreaming. Această perturbare mecanică ajută la ruperea interacțiunilor nespecifice dintre anticorp și ligand, facilitând eluția anticorpului legat din matrice.

Plăcile cu 96 de puțuri și alte plăci cu mai multe puțuri sunt cel mai bine prelucrate folosind UIP400MTP sonicator. Acest sistem cu ultrasunete este ideal pentru liza, fragmentarea ADN-ului și probele de procesare a solubilizării celulare în randament ridicat.

Sonicator cu randament ridicat UIP400MTP facilitează eluția anticorpilor și a proteinelor

Cerere de informatie





 

Acest tutorial explică ce tip de sonicator este cel mai bun pentru sarcinile de pregătire a probei, cum ar fi liza, întreruperea celulelor, izolarea proteinelor, fragmentarea ADN-ului și ARN în laboratoare, analiză și cercetare. Alegeți tipul sonicator ideal pentru aplicația dvs., volumul eșantionului, numărul eșantionului și debitul. Hielscher Ultrasonics are omogenizatorul cu ultrasunete ideal pentru tine!

Cum să găsiți sonicatorul perfect pentru întreruperea celulelor și extracția proteinelor în știință și analiză

Miniatură video

 

Avantajele eluției cu ultrasunete folosind sonicare

Eluția cu ultrasunete oferă mai multe avantaje, în special în contextul tehnicilor de purificare a proteinelor, ar fi cromatografia de afinitate.
De exemplu, sonicare excelează metode alternative în ceea ce privește integritatea proteinelor, recuperare, puritate, versatilitate, și eficiență. Aceste avantaje fac eluția cu ultrasunete o alegere preferată pentru procesele de purificare a proteinelor, în special în aplicațiile în care menținerea structurii și activității proteinelor este esențială. În plus, eluția cu ultrasunete iese în evidență pentru simplitatea, eficiența, versatilitatea și compatibilitatea cu o gamă largă de proteine și matrice de afinitate. Aplicând unde cu ultrasunete pentru a perturba interacțiunile proteine-matrice, eluția cu ultrasunete oferă o metodă blândă și rapidă pentru purificarea proteinelor, asigurând rate ridicate de recuperare și păstrând integritatea proteinelor pentru aplicațiile din aval.

Mai blând cu structura proteinelor: Eluția cu pH scăzut implică utilizarea tampoanelor acide pentru a perturba legarea dintre proteina țintă (de exemplu, anticorpi) și matricea de afinitate. Cu toate acestea, expunerea la pH scăzut poate denatura proteinele, compromițând potențial structura și activitatea lor biologică. În schimb, eluția cu ultrasunete se bazează în primul rând pe perturbarea mecanică, mai degrabă decât denaturarea chimică, făcându-l mai blând pe structura proteinei. Acest lucru este deosebit de avantajos atunci când se purifică proteine delicate sau anticorpi sensibili la modificările pH-ului.

  • Risc redus de agregare: Eluția cu pH scăzut poate crește riscul agregării proteinelor datorită desfășurării proteinelor și expunerii regiunilor hidrofobe. Agregarea poate duce la pierderea activității proteinelor și la dificultăți în procesarea în aval. Eluția cu ultrasunete, prin comparație, minimizează riscul de agregare prin utilizarea forțelor mecanice pentru a perturba interacțiunile dintre proteină și matricea de afinitate fără a modifica semnificativ conformația nativă a proteinei.
  • Recuperare și puritate îmbunătățite: Eluția cu ultrasunete poate atinge rate de recuperare mai mari și niveluri de puritate în comparație cu metodele alternative de eluție. Întreruperea mecanică oferită de ultrasonication eliberează în mod eficient proteinele legate din matricea de afinitate, minimizând în același timp interacțiunile nespecifice. Acest lucru are ca rezultat o recuperare îmbunătățită a proteinei țintă cu o contaminare redusă de la moleculele care nu sunt legate în mod specific, contribuind la o puritate mai mare a fracției eluate.
  • Procesare cu randament ridicat: Hielscher Ultrasonics oferă diverse sonicatoare pentru purificarea proteinelor asistată cu ultrasunete, eluție și biopanning. Placa microtitrare-sonicator UIP400MTP permite prelucrarea în masă a probelor în 96 de godeuri și alte plăci multigodeu. VialTweeter este ideal pentru sonicare fără probleme, simultană de până la 10 tuburi, ar fi flacoane Eppendorf în aceleași condiții. CupHorn este un sonicator versatil ideal pentru mai multe tuburi, pahare mici și alte vase. Și, desigur, sonicatoarele clasice de tip sondă cu microvârfuri sunt un instrument de laborator bine stabilit pentru pregătirea probelor. Hielscher Ultrasonics gama de produse are sonicator ideal pentru configurarea experimentului și dimensiunea eșantionului.
  • Versatilitate și compatibilitate: Eluția cu ultrasunete este compatibilă cu o gamă largă de proteine și matrice de afinitate, oferind versatilitate în aplicațiile de purificare. În schimb, eluția cu pH scăzut poate să nu fie adecvată pentru anumite proteine care sunt sensibile la condiții acide sau pentru matrice de afinitate care sunt predispuse la degradare sau percolare la pH scăzut. Eluția cu ultrasunete oferă o alternativă blândă și universal aplicabilă, care poate fi adaptată nevoilor specifice de purificare, fără a compromite integritatea proteinelor sau stabilitatea matricei.
  • Timp și eficiență: Eluția cu ultrasunete necesită de obicei timpi de eluare mai scurți în comparație cu alte metode de eluție. Eliberarea rapidă și eficientă a proteinelor legate, facilitată de ultrasonication, reduce timpul de procesare și crește eficiența generală de purificare, făcându-l o opțiune atractivă pentru aplicații cu randament ridicat sau atunci când sunt necesare rezultate sensibile la timp.
96-Well Plate Sonicator UIP400MTP pentru liza celulară, extracția ADN-ului, fragmentarea ADN-ului, solubilizarea celulelor și purificarea proteinelor.

96-Well Plate Sonicator UIP400MTP pentru sonicarea plăcilor multigodeu, plăci PCR și ELISA

 

VialTweeter la procesorul cu ultrasunete UP200ST

VialTweeter sonicator pentru sonicare simultană de 10 probe, de exemplu, pentru a perturba celulele și pentru a extrage proteine

Biopanning asistat ultrasonically

Biopanoramarea este o tehnică critică în purificarea anticorpilor, în special atunci când trebuie obținuți anticorpi foarte specifici pentru cercetare sau diagnostic medical. Biopanoramarea este procesul prin care anticorpii sunt izolați dintr-un amestec de anticorpi, așa-numita bibliotecă de anticorpi.

Cum funcționează biopanoramarea cu ultrasunete?

Începe cu o bibliotecă de anticorpi, un amestec de diferiți anticorpi. Fiecare anticorp se caracterizează prin propria sa formă și specificitate unică. Pentru analiză și terapeutică, trebuie izolați anticorpii specifici care recunosc o anumită țintă, cum ar fi un virus sau o celulă canceroasă. Folosind biopanoramarea, acești anticorpi specifici pot fi izolați. Ultrasonication ajută la facilitarea procesului de biopanoramare, făcând purificarea anticorpilor mai eficientă.

Începând cu o bibliotecă de anticorpi, anticorpii sunt de obicei afișați pe suprafața unui bacteriofag, a unei celule de drojdie sau a altui sistem de afișare. Această bibliotecă reprezintă o gamă diversă de anticorpi.
În primul pas, această bibliotecă este expusă moleculei țintă. Anticorpii care se leagă de țintă se vor lipi, în timp ce ceilalți se vor spăla. Pentru a îndepărta anticorpii nelegați, probele se spală de mai multe ori cu o soluție tampon.

Acum, avem probe care conțin doar anticorpi legați. Cu toate acestea, acest lucru înseamnă că anticorpii sunt încă atașați la sistemul lor de afișare. Pentru a le elibera, interacțiunea anticorp-ligand trebuie întreruptă. Acest pas este cunoscut sub numele de eluție. Probele pot fi eluate utilizând o soluție care întrerupe legarea, de exemplu folosind un tampon specific de eluție, un chaotrop, scăderea valorii pH-ului, aplicarea căldurii etc. Aceste tehnici de eluare distrug legarea anticorp-ligand, dar, de asemenea, pot deteriora anticorpii înșiși. Acesta este motivul pentru care sonicare este folosit ca tehnică alternativă pentru a elimina ușor anticorpii de la ținta lor.

După finalizarea etapei de eluție, obținem anticorpi purificați, gata de utilizare în cercetare, diagnostic sau terapie.

Biopanoramarea este o tehnică puternică în purificarea anticorpilor, iar eluția cu ultrasunete facilitează și intensifică eficacitatea – rezultând anticorpi foarte purificați, nedeteriorați. Biopanoramarea cu ultrasunete permite oamenilor de știință să izoleze anticorpi foarte specifici din probe complexe, deschizând ușile către o gamă largă de aplicații.

Sonicatoare pentru purificarea anticorpilor

Hielscher sonicators sunt instrumente bine stabilite utilizate în cele mai bune facilități de cercetare din întreaga lume. Apreciate pentru designul lor de ultimă oră și performanțe superioare, Hielscher sonicators sunt considerate instrumente de laborator indispensabile în domeniile biotehnologiei și biologiei moleculare. Hielscher Ultrasonics oferă sonicatori pentru un singur eșantion, precum și pregătirea probei de mare capacitate, care facilitează purificarea eficientă a anticorpilor și eluția moleculelor legate de țintă și permit biopanoramarea eficientă pentru a izola anticorpii specifici cu precizie și viteză.
În contextul purificării anticorpilor, Hielscher sonicatori excelează la facilitarea etapelor de spălare și eluare prin eliminarea eficientă a anticorpilor nelegați, păstrând în același timp integritatea complexelor legate de țintă. Controlul lor precis și scalabilitatea permit condiții de procesare adaptate, asigurând rezultate optime de purificare într-o gamă largă de volume și complexități ale probelor.
Hielscher sonicators reprezintă inovația tehnologică în prelucrarea cu ultrasunete, oferind capacități de neegalat pentru purificarea anticorpilor, eluție, și biopanning. Cu precizia, fiabilitatea și ușurința lor de operare, diferitele sisteme cu ultrasunete oferă eficiență optimă și versatilitate pentru cercetarea biofarmaceutică, diagnosticare și terapie.
Contactati-ne acum pentru a afla mai multe despre Hielscher sonicators pentru purificarea anticorpilor, eluție, și biopanning! Personalul nostru tehnic cu experiență este bucuros să discute despre aplicarea dvs. legată de anticorpi!

De ce Hielscher Ultrasonics?

  • Eficiență ridicată
  • Tehnologie de ultimă generație
  • fiabilitate & robusteţe
  • reglabil, control precis al procesului
  • lot & in linie
  • pentru orice volum
  • software inteligent
  • caracteristici inteligente (de exemplu, programabile, protocolare de date, telecomandă)
  • Ușor și sigur de operat
  • întreținere redusă
  • CIP (curat pe loc)

Proiectare, Productie si Consultanta – Calitate fabricată în Germania

Ultrasonicators Hielscher sunt bine-cunoscute pentru cele mai înalte standarde de calitate și design. Robustețea și funcționarea ușoară permit integrarea fără probleme a ultrasonicators noastre în instalații industriale. Condiții dure și medii solicitante sunt ușor de manevrat de ultrasonicators Hielscher.

Hielscher Ultrasonics este o companie certificată ISO și a pus un accent special pe ultrasonicators de înaltă performanță featuring tehnologie de ultimă oră și ușurința în utilizare. Desigur, ultrasonicators Hielscher sunt conforme cu CE și îndeplinesc cerințele ul, CSA și RoHs.

Contacteaza-ne! / Intreaba-ne!

Cere mai multe informații

Vă rugăm să utilizați formularul de mai jos pentru a solicita informații suplimentare despre procesoare cu ultrasunete, aplicații și preț. Vom fi bucuroși să discutăm procesul cu dvs. și să vă oferim un sistem cu ultrasunete care să îndeplinească cerințele dvs.!









Vă rugăm să rețineți Politica de confidentialitate.


Videoclipul arată sistemul de pregătire a probelor cu ultrasunete UIP400MTP, care permite pregătirea fiabilă a probelor de orice plăci standard multi-bine folosind ultrasunete de mare intensitate. Aplicațiile tipice ale UIP400MTP includ liza celulară, ADN-ul, ARN-ul și forfecarea cromatinei, precum și extracția proteinelor.

Ultrasonicator UIP400MTP pentru sonicare placă multi-bine

Miniatură video

Comparație de eluare cu ultrasunete vs tehnici tradiționale de eluare

  1. Eluția gradientului: În eluția în gradient, rezistența de legare dintre proteina țintă și matricea de afinitate este redusă treptat prin modificarea compoziției tamponului de eluție. Acest lucru poate implica factori de modificare, cum ar fi pH-ul, concentrația de sare sau concentrația liganzilor concurenți. Eluția gradientului permite reglarea fină a condițiilor de eluare pentru a elibera selectiv proteina țintă, minimizând în același timp legarea nespecifică.
    Avantajele eluției cu ultrasunete: Eluția cu ultrasunete oferă o eliberare mai rapidă și uniformă a proteinelor legate în comparație cu eluția gradientului. În timp ce eluția gradientului necesită o optimizare atentă și monitorizarea condițiilor de eluție, eluția cu ultrasunete oferă o metodă mai simplă și mai eficientă pentru recuperarea proteinelor.
  2. Eluția competitivă: În eluția competitivă, o concentrație ridicată a unui ligand concurent este introdusă în tamponul de eluare pentru a perturba legătura dintre proteina țintă și matricea de afinitate. Ligandul concurent concurează cu proteina țintă pentru locurile de legare pe matrice, deplasând astfel proteina și eliberând-o în eluat.
    Avantajele eluției cu ultrasunete: Eluția cu ultrasunete oferă o alternativă mai blândă și mai versatilă la eluția competitivă. Eluția competitivă poate necesita utilizarea unor concentrații ridicate de agenți chaotropi (adică o soluție dizolvată care perturbă rețeaua de legături de hidrogen dintre moleculele de apă și reduce stabilitatea stării native a proteinelor prin slăbirea efectului hidrofob) sau substanțe chimice dure, care pot afecta stabilitatea și activitatea proteinelor. În schimb, eluția cu ultrasunete oferă perturbări mecanice fără a fi nevoie de agenți chimici suplimentari, păstrând integritatea proteinelor și asigurând rate ridicate de recuperare.
  3. Eluție indusă de temperatură: Eluția indusă de temperatură implică modificarea temperaturii tamponului de eluare pentru a perturba legătura dintre proteina țintă și matricea de afinitate. Acest lucru poate fi realizat fie prin creșterea, fie prin scăderea temperaturii, în funcție de interacțiunea specifică proteină-matrice.
    Avantajele eluției cu ultrasunete: Eluția cu ultrasunete oferă o metodă mai rapidă și controlată pentru eluția proteinelor în comparație cu metodele induse de temperatură. În timp ce eluția indusă de temperatură poate necesita un control precis al gradienților de temperatură și timpi de echilibrare mai lungi, eluția cu ultrasunete oferă o perturbare mecanică imediată, rezultând timpi de eluare mai scurți și eficiență îmbunătățită.
  4. Eluție enzimatică: Eluția enzimatică utilizează enzime specifice care scindează legăturile dintre proteina țintă și matricea de afinitate, eliberând proteina în eluat. Această metodă este deosebit de utilă pentru proteinele care sunt strâns legate de matrice sau pentru aplicații care necesită un control precis asupra condițiilor de eluție.
    Avantajele eluției cu ultrasunete: Eluția cu ultrasunete oferă o alternativă non-enzimatică și fără substanțe chimice la eluția enzimatică. În timp ce eluția enzimatică poate necesita optimizarea concentrației enzimelor, timpul de incubare și condițiile de pH, eluția cu ultrasunete oferă o metodă simplă și universal aplicabilă pentru recuperarea proteinelor, fără a fi nevoie de reactivi suplimentari sau echipamente specializate.
Sonicator pentru pregătirea probei cu randament ridicat! Sonicatorul plăcii UIP400MTP facilitează liza, extracția proteinelor, fragmentarea ADN-ului și solubilizarea celulară a probelor biologice în plăci cu 96 de godeuri.

Placă sonicator UIP400MTP pentru orice plăci cu 96 de godeuri, plăci de microtitrare și plăci cu mai multe godeuri.



Literatură / Referințe


Ultrasonics de înaltă performanță! Gama de produse Hielscher acoperă întregul spectru de la ultrasonicator de laborator compact peste banc-top unități la sisteme cu ultrasunete complet industriale.

Hielscher Ultrasonics produce omogenizatoare cu ultrasunete de înaltă performanță de la laborator la dimensiunea industrială.


Vom fi bucuroși să discutăm despre procesul dvs.

Să intrăm în contact.