FFPE augstas caurlaidspējas parauga sagatavošana: olbaltumvielu ekstrakcija un nukleīnskābju nobīde
Ar augstas caurlaidspējas ultrasonicator UIP400MTP, Hielscher Ultrasonics risina formalīna fiksācijas un parafīna iegulto (FFPE) audu sagatavošanas problēmas. Uzziniet, kā ultrasonication apstrādā FFPE paraugu lielā skaitā FFPE deparafinizācijai, audu līzei, homogenizācijai, olbaltumvielu ekstrakcijai un DNS / RNS nobīdei! Izmantojiet ultraskaņas FFPE audu sagatavošanas priekšrocības – Lielu paraugu skaita apstrāde daudzvietīgās platēs! Iegūstiet augstas kvalitātes paraugus un iegūstiet lielu paraugu skaitu, lai iegūtu ticamus pētījumu rezultātus! Un visbeidzot, bet ne mazāk svarīgi ietaupiet laiku un naudu!
FFPE paraugu sagatavošana, ko atvieglo augstas caurlaidspējas ultraskaņas apstrāde
Formalīna fiksācija un parafīna iegulšana (FFPE) ir visizplatītākā metode cieto audu saglabāšanai un arhivēšanai. Biomolekulu ekstrakcija no FFPE audu paraugiem bieži rada būtiskas problēmas uzglabāto paraugu kvalitātes dēļ. Šie paraugi, kas ir nenovērtējami aktīvi molekulārajā bioloģijā un klīniskajos pētījumos, nodrošina bagātīgu bioloģiskās informācijas avotu retrospektīviem pētījumiem un diagnostikas biomarķieru validācijai. Tomēr formalīna fiksācijas un parafīna iegulšanas process, saglabājot audu arhitektūru un morfoloģiju, sarežģī augstas kvalitātes nukleīnskābju un proteīnu ekstrakciju. Formalīns izraisa nukleīnskābju un olbaltumvielu savstarpēju saistīšanu, izraisot molekulāro sadrumstalotību un ķīmiskās modifikācijas. Uzziniet, kā augstas caurlaidspējas ultrasonicator UIP400MTP pārvarēt FFPE paraugu sagatavošanas izaicinājumus!
Ultrasonicator efektīvai FFPE paraugu sagatavošanai
- Viegli lietojama darbplūsma: vienkāršoti procesi, kas ir lietotājam draudzīgi.
- Deparafinizācija, olbaltumvielu ekstrakcija, DNS / RNS nobīde
- Ātra augstas caurlaidspējas apstrāde: efektīva vairāku urbumu plākšņu apstrāde.
- Efektīva deparafinizācija: Uzlabota proteīnu šķīdība.
- Netoksiski šķīdinātāji: Izvairās no kaitīgu organisko šķīdinātāju, piemēram, ksilola, lietošanas.
UIP400MTP augstas caurlaidspējas sonikators augstas caurlaidspējas FFPE paraugu apstrādei daudzdzīvokļu platēs
Sasniegumi olbaltumvielu ekstrakcijas metodēs no FFPE audiem
Hielscher Ultrasonics risina problēmas augstas caurlaidspējas FFPE paraugu sagatavošanā. Ultraskaņas apstrāde izmanto ultraskaņas viļņus, lai radītu mehāniskas vibrācijas un fokusētu kavitāciju, efektīvi izjaucot šūnu struktūras un uzlabojot biomolekulu šķīdību. Šī metode ir ieguvusi popularitāti ar spēju palielināt nukleīnskābes un olbaltumvielu ekstrakcijas efektivitāti un ražu no FFPE audiem, kā arī DNS un RNS nobīdes bibliotēkas sagatavošanai. Ir ļoti svarīgi uzsvērt, ka ultrasonication, izmantojot UIP400MTP multiwell plāksnes sonikatoru, saglabā šo biomolekulu integritāti pakārtotiem lietojumiem.
Nukleīnskābju nobīde, izmantojot augstas caurlaidspējas ultrasonication
Multi-well ultrasonicator UIP400MTP izmantošanai augstas caurlaidspējas iestatījumos FFPE paraugu sagatavošanu jaunā līmenī. Šī daudzslāņu plāksnes ultraskaņas metode nodrošina efektīvu un uzticamu risinājumu vairāku paraugu vienlaicīgai apstrādei. Tas atvieglo ātru un reproducējamu DNS, RNS un proteīnu ekstrakciju, kas ir kritiski svarīgi dažādām analīzes metodēm, tostarp nākamās paaudzes sekvencēšanai (NGS), kvantitatīvai PCR un proteomikas analīzei. Ultraskaņas parametru, piemēram, amplitūdas, ilguma un temperatūras, optimizācija vēl vairāk uzlabo ekstrahēto biomolekulu kvalitāti un daudzumu.
Multiwell plākšņu UIP400MTP sonikators piedāvā ievērojamas priekšrocības DNS un RNS sadrumstalotībai un nobīdei no FFPE audiem. Viena no šīs sistēmas izcilākajām iezīmēm ir tā spēja sasniegt šaurus DNS un RNS fragmentu izmērus, nodrošinot precīzu ultraskaņas intensitātes noregulēšanu, lai iegūtu īsus fragmentus no 150-200 bāzu pāriem (bp) vai garākiem fragmentiem no 15-20 kilobāzes pāriem (kbp). Šī daudzpusība padara UIP400MTP neaizstājamu gan īsas, gan ilgi lasāmas sekvencēšanas lietojumprogrammām, nodrošinot augstas kvalitātes rezultātus nākamās paaudzes sekvencēšanai (NGS) un visa genoma sekvencēšanai (WGS). Tā precīza fragmenta lieluma kontrole ir būtiska pētniekiem visās genomikas jomās, jo tā ļauj sagatavot paraugus atbilstoši specifikācijām.
Sazinieties ar mums, lai iegūtu uzlabotus risinājumus FFPE audos
Atklājiet UIP400MTP multiwell plates sonikatoru efektīvai biomolekulu atgūšanai no FFPE paraugiem, saglabājot ekstrahēto nukleīnskābju un proteīnu integritāti un nodrošinot rezultātu reproducējamību. Šī tehnoloģija nemanāmi integrējas ar citām preparatīvām un analītiskām darbplūsmām, racionalizējot un uzlabojot molekulāros pētījumus, izmantojot FFPE audu arhīvus.
Fiksatori un to iedarbība
Fiksācija ir izšķirošs solis paraugu sagatavošanā, kas saglabā šūnu struktūras, aptur bioķīmiskās reakcijas un novērš degradāciju. Atkarībā no īpašajām eksperimenta prasībām tiek izmantoti dažādi fiksatori. Divi visbiežāk sastopamie fiksatori ir formaldehīds un paraformaldehīds, kas savstarpēji saista olbaltumvielas un nukleīnskābes, saglabājot šūnu un audu morfoloģiju un antigēniskumu. Citi fiksatori, piemēram, etanols, metanols un glutaraldehīds, tiek izmantoti konkrētiem lietojumiem.
Formaldehīda un paraformaldehīda fiksatori veido metilēna tiltus starp aminogrupām, kā rezultātā proteīni krustojas. Šis process efektīvi imobilizē šūnu komponentus, saglabājot to integritāti turpmākajos analīzes posmos. Šo fiksatoru iedarbību var ietekmēt tādi faktori kā koncentrācija, pH un temperatūra, un šo parametru optimizēšana ir būtiska, lai nodrošinātu optimālu šūnu struktūru saglabāšanu.
Ultraskaņas FFPE sagatavošanas priekšrocības
Ultrasonication ir spēcīgs paņēmiens, lai izjauktu fiksētās šūnas un audus, kas izceļas ar parastajām metodēm. Tas piedāvā vairākas ievērojamas priekšrocības salīdzinājumā ar tradicionālajām līzes metodēm:
- Ātrums un efektivitāte: Ultraskaņas līze nodrošina ātru šūnu un audu darbības traucējumus, ievērojami samazinot apstrādes laiku, salīdzinot ar mehāniskajām vai ķīmiskajām līzes metodēm. Ultraskaņas zondes radītie augstfrekvences skaņas viļņi rada mehāniskus bīdes spēkus, izraisot fiksēto šūnu struktūru traucējumus. Šis ātrais un efektīvais traucējums ļauj pētniekiem īsā laikā apstrādāt lielus paraugu apjomus.
- Maigs un regulējams: Ultraskaņas līze piedāvā maigu traucējumu mehānismu, kas samazina jutīgu biomolekulu, piemēram, olbaltumvielu, nukleīnskābju un fermentu, bojājumus. Atšķirībā no mehāniskām metodēm, kas rada pārmērīgu karstumu vai bīdes spēkus, ultraskaņas līze izmanto kontrolētu kavitāciju, lai izjauktu šūnas, vienlaikus saglabājot intracelulāro komponentu integritāti un funkcionalitāti.
- Daudzpusība: Ultraskaņas līzi var izmantot dažādiem fiksatoriem, ļaujot pētniekiem strādāt ar plašu fiksētu paraugu klāstu. Neatkarīgi no tā, vai tiek izmantots formaldehīds, paraformaldehīds vai alternatīvi fiksatori, ultraskaņas līze konsekventi nodrošina efektīvus traucējumus, nodrošinot optimālu šūnu komponentu atjaunošanos.
- Augsta ražība un kvalitāte: Ultraskaņas līze atvieglo augstu neskartu šūnu komponentu ražu, jo tā spēj vienmērīgi izjaukt fiksētās šūnas un audus. Tas ļauj lejupējiem lietojumiem, piemēram, olbaltumvielu analīzei, nukleīnskābju ekstrakcijai un fermentatīviem testiem, iegūt ticamus un reproducējamus rezultātus.
- Automatizācijas saderība: Ultraskaņas līzi var viegli integrēt automatizētās sistēmās, ļaujot apstrādāt augstas caurlaidspējas paraugus. Šī saderība ļauj pētniekiem racionalizēt savu darbplūsmu un palielināt produktivitāti, jo īpaši liela mēroga pētījumos.
96 urbumu plāksnes ultraskaņas UIP400MTP mikrotitru un multiwell plākšņu apstrādei ar ultraskaņu
Ultraskaņas līze ir radījusi revolūciju fiksēto šūnu un audu darbības traucējumus, piedāvājot daudzas priekšrocības salīdzinājumā ar tradicionālajām līzes metodēm. Tā ātrums, efektivitāte, selektivitāte, daudzpusība, augsta ražība un automatizācijas saderība padara to par neaizstājamu instrumentu molekulārās bioloģijas un biotehnoloģijas pētījumos. Piedāvājot bezkontakta sonikatorus, kā arī zondes tipa sonikatoru, Hielscher Ultrasonics piedāvā vispiemērotāko ultraskaņas homogenizatoru jūsu dzīvības zinātnes lietojumam. Neatkarīgi no tā, vai vēlaties vienlaikus apstrādāt atsevišķus paraugus, vairākus paraugus vai ļoti lielu paraugu skaitu, mēs jums piedāvāsim labāko ultraskaņas datoru, kas atbilst jūsu pētniecības un diagnostikas prasībām.
Lasiet vairāk par Hielscher bezkontakta sonikatoriem vairāku paraugu un augstas caurlaidspējas paraugu sagatavošanai!
- vienreizējs ieguldījums
- izmantojiet savus palīgmateriālus
- nav atkārtotu izmaksu par patentētiem piederumiem un palīgmateriāliem
- augsta caurlaidspēja
- Precizitātes kontrole
- vismodernākās tehnoloģijas
- uzticamība & Stabilitāti
- regulējama, precīza procesa vadība
- rūpnieciskās kvalitātes: var nepārtraukti darbināt 24/7
- viegli un droši lietojams
- zema apkope
Lasiet vairāk par sonicatoru pielietojumu dzīvības zinātnēs!
Plākšņu ultraskaņas UIP400MTP jebkurām 96 urbumu plāksnēm, mikrotitrēšanas plāksnēm un vairāku urbumu plāksnēm.
Projektēšana, ražošana un konsultācijas – Kvalitāte ražots Vācijā
Hielscher ultrasonikatori ir labi pazīstami ar saviem augstākajiem kvalitātes un dizaina standartiem. Robustums un viegla darbība ļauj vienmērīgi integrēt mūsu ultrasonikatorus rūpnieciskajās iekārtās. Hielscher ultrasonikatori viegli apstrādā neapstrādātus apstākļus un prasīgu vidi.
Hielscher Ultrasonics ir ISO sertificēts uzņēmums un īpašu uzsvaru liek uz augstas veiktspējas ultrasonikatoriem, kas piedāvā vismodernākās tehnoloģijas un lietotājdraudzīgumu. Protams, Hielscher ultrasonikatori atbilst CE prasībām un atbilst UL, CSA un RoHs prasībām.
Sazinieties ar mums! / Jautājiet mums!
UIP400MTP Ultrasonicator: Augstas caurlaidspējas FFPE paraugu sagatavošana Multi-Well-Plate
FAQ
Zemāk mēs atbildam uz bieži uzdotajiem jautājumiem, kas attiecas uz FFPE audu sagatavošanu un FFPE paraugu ultrasonikāciju.
Kā tiek sagatavoti FFPE audi?
FFPE audu sagatavošanas soļi: Rūpīga svaigu audu apstrāde un apstrāde ir ļoti svarīga, lai iegūtu augstas kvalitātes FFPE paraugus. Šūnu arhitektūras, nukleīnskābju un proteīnu saglabāšanas nodrošināšana ir būtiska precīzai lejupējai analīzei. Katrs solis - no savākšanas līdz iegulšanai - prasa precizitāti, lai saglabātu parauga integritāti dažādām analīzēm, tostarp histoloģiskajai izmeklēšanai, imūnhistoķīmijai un molekulārajiem pētījumiem. Pareizi izpildīts, šis fiksācijas un iegulšanas process nodrošina, ka saglabātie audi precīzi atspoguļo in vivo stāvokli, ļaujot ticamus diagnostikas un pētījumu rezultātus.
Mēs iepazīstinām jūs ar 6 galvenajiem FFPE audu paraugu iegulšanas procesa soļiem.
- Audu savākšana
Dzīvu zīdītāju biopsijas un audu kultūras ir dzīvotspējīgi avoti svaigu audu iegūšanai FFPE paraugu sagatavošanai.
Ir svarīgi izmantot aseptisku tehniku: Lai izvairītos no piesārņojuma, izmantojiet sterilus instrumentus un cimdus. Ideālā gadījumā savāciet audus sterilā vidē, piemēram, ķirurģiskajā komplektā vai laminārās plūsmas pārsegā.
Tā kā paraugs ir ļoti trausls, tā jutīgā apstrāde ir būtiska: samaziniet apstrādes aizkavēšanos un nekavējoties sāciet audu apstrādi pēc izgriešanas. Tas ir būtiski, lai novērstu autolīzi un noārdīšanos. Glabājiet audus istabas temperatūrā; Izvairieties no sasalšanas, jo tas var izraisīt ledus kristālu veidošanos un audu bojājumus. - Audu fiksācija
Pirmkārt, audus apstrādā ar fiksatoru šķīdumu: Izmantojiet 10% neitrālu buferētu formalīnu (NBF), kas ir līdzvērtīgs 4% formaldehīda ūdenī, buferēts līdz neitrālam pH.
Pilnībā iegremdējiet audus formalīnā. Nodrošina fiksatora un audu tilpuma attiecību vismaz 10:1. Fiksācijas laiks parasti svārstās no 6 līdz 24 stundām atkarībā no audu veida un izmēra. Ir svarīgi, lai fiksators varētu rūpīgi iekļūt audos. Tomēr pārmērīga fiksācija var izraisīt šķērssaistīšanu, kas sarežģī antigēna izgūšanu, savukārt nepietiekama fiksācija var izraisīt sliktu audu saglabāšanu. - Audu apgriešana
Otrkārt, sagrieziet audus apmēram 3-5 mm biezumā, lai nodrošinātu atbilstošu fiksatora iekļūšanu. Nodrošiniet pareizu audu orientāciju, lai uztvertu attiecīgās histoloģiskās struktūras. Tas atvieglo ekstrakcijas procesu, kad audi vēlāk tiek izmantoti analīzei. - Fiksētā parauga apstrāde
Tagad fiksētajiem audiem jābūt dehidrētiem: Pēc fiksācijas audi ir jāatūdeņo, lai nodrošinātu rūpīgu iekļūšanu parafīna vaskā. Izlaidiet audus caur šķirotu etanola sēriju (70%, 80%, 90% un 100%), lai noņemtu ūdeni.
Tīrīšana ar ksilolu: Parafīna vasks nešķīst ūdenī, bet šķīst ksilolā. Tāpēc ūdens audos jāaizstāj ar ksilolu. Tomēr pats ksilols nešķīst ūdenī, bet šķīst spirtā, tāpēc ir nepieciešams starpposms, kurā ūdens vispirms tiek aizstāts ar spirtu. Iegremdējiet audus ksilolā vai ksilola aizstājējā, lai noņemtu etanolu un sagatavotu audus parafīna infiltrācijai.
Infiltrācija, izmantojot parafīnu: Ievietojiet audus izkausētā parafīna vaskā, nodrošinot pilnīgu infiltrāciju. Šis solis parasti ietver vairākas parafīna izmaiņas, lai nodrošinātu rūpīgu impregnēšanu. - Audu iegulšana
Šajā solī audi tiek veidoti audu blokā: Ievietojiet audus veidnē ar vēlamo orientāciju un pārlejiet izkausētu parafīnu. Ļauj parafīnam sacietēt, atdzesējot istabas temperatūrā vai uz aukstas plāksnes. - Sekcijas un montāža
Mikrotomija: Lai sagrieztu iegultos audus, izmantojiet mikrotomu, lai no parafīna bloka izgrieztu plānas sekcijas (parasti 4-5 mikrometrus). Tad paraugu uzmontē, novietojot sekcijas uz stikla priekšmetstikliņiem turpmākai krāsošanai un mikroskopiskai analīzei.
Visbeidzot, pārbaudiet histoloģijas kvalitāti: Novērtējiet pirmās sadaļas mikroskopā, lai nodrošinātu pareizu fiksāciju un apstrādi. Pēc vajadzības pielāgojiet protokolus, pamatojoties uz audu tipu un novēroto kvalitāti.
FFPE audus var izmantot, lai atgūtu RNS, DNS un proteīnus, kā arī atklātu vēža vai citas slimības pazīmes. Tos var uzglabāt gadiem ilgi, un tie ir būtiska daļa no tā, kā pētnieki un ārsti izmanto audu paraugus diagnostikai un pētniecībai.
Kādas ir izplatītākās problēmas un izaicinājumi ar FFPE audiem?
Formalīna fiksētie, parafīnā iegultie (FFPE) audu paraugi tiek plaši izmantoti pētniecībā un diagnostikā, taču tie rada vairākas problēmas un kopīgas problēmas:
- Biomolekulu noārdīšanās: Ilgstoša fiksācija var izraisīt DNS, RNS un proteīnu noārdīšanos, apgrūtinot augstas kvalitātes nukleīnskābju vai proteīnu iegūšanu pakārtotiem lietojumiem. Pareiza fiksācija (izvairoties no nepietiekamas un pārmērīgas fiksācijas) ir būtiska audu saglabāšanai.
- Antigēna maskēšana: Fiksācijas process var maskēt antigēnu vietas, samazinot antivielu saistīšanās efektivitāti imūnhistoķīmijā un citos imunoloģiskajos testos. Tas bieži prasa antigēna izgūšanu, procedūru, ar kuras palīdzību tiek mainīta epitopa maskēšana un atjaunota epitopu-antivielu saistīšanās. Tomēr pilnīgu antigēniskumu ne vienmēr var atjaunot.
- Mainīga fiksācijas kvalitāte: Fiksācijas laiku un apstākļu atšķirības var izraisīt nekonsekventu parauga kvalitāti, ietekmējot rezultātu reproducējamību un salīdzināmību. Izmantojiet uzticamus fiksācijas protokolus un izvairieties no nepietiekamas un pārmērīgas fiksācijas.
- DNS bojājumi un fragmentācija: FFPE paraugu formalīna fiksācija var izraisīt dažāda veida DNS bojājumus, tostarp citozīna deamināciju (C līdz T mutācijas), oksidatīvos bojājumus (piemēram, 8-okso-guanīnu, kas izraisa G līdz T mutācijas), kā arī fiziskus traucējumus, piemēram, nikus, spraugas un abāziskas vietas, kas kavē DNS polimerāzes aktivitāti. Formalīna fiksācijas process var izraisīt DNS fragmentāciju, sarežģījot ģenētiskās un genoma analīzes, piemēram, PCR un sekvencēšanu.
- RNS kvalitāte: RNS, kas ekstrahēta no FFPE audiem, bieži ir sadrumstalota un ķīmiski modificēta, tāpēc ir grūti veikt augstas kvalitātes transkriptomiskas analīzes.
- Olbaltumvielu modifikācijas: Formalīns var izraisīt ķīmiskas izmaiņas proteīnos, ietekmējot to struktūru un funkciju, kas var traucēt proteomikas analīzes.
- Paraugu apstrādes artefakti: Iegulšanas un sadalīšanas procesa laikā mehāniskais spriegums un siltums var radīt artefaktus un izraisīt turpmāku audu bojājumu.
- Partiju mainīgums: Fiksācijas un iegulšanas protokolu variācijas starp dažādām partijām var izraisīt ievērojamu rezultātu mainīgumu, sarežģījot salīdzinājumus starp pētījumiem.
- Uzglabāšanas problēmas: FFPE bloku ilgtermiņa uzglabāšana laika gaitā var izraisīt papildu degradāciju un nukleīnskābju integritātes zudumu, ietekmējot retrospektīvu pētījumu arhīvu paraugu dzīvotspēju.
Šķērssaistīšana: Formalīna fiksācija izraisa proteīnu un nukleīnskābju savstarpēju saistīšanu, kas var kavēt molekulāro analīzi un ietekmēt imūnhistoķīmijas un citu testu precizitāti.
Optimizētu protokolu izmantošana, rūpīga paraugu apstrāde un progresīvu metožu pielietošana palīdz uzlabot no FFPE audiem iegūto datu kvalitāti un uzticamību.
Kāda ir atšķirība starp FFPE un saldētiem audiem?
FFPE (formalīna fiksētie, parafīna iegultie) audi tiek saglabāti, izmantojot formalīnu, lai fiksētu audus, un pēc tam iestrādāti parafīna vaskā, ļaujot ilgstoši uzglabāt istabas temperatūrā, vienlaikus saglabājot audu morfoloģiju. Turpretī saldēti audi tiek ātri saglabāti, sasaldējot, kas labāk saglabā nukleīnskābju un olbaltumvielu integritāti, bet prasa uzglabāšanu ļoti zemā temperatūrā.
Kādas ķīmiskās vielas tiek izmantotas FFPE iegulšanai?
Ķīmiskās vielas, ko izmanto FFPE iegulšanai, parasti ietver formalīnu fiksācijai un parafīna vasku iegulšanai. FFPE iegulšanai audus parasti fiksē, izmantojot vai nu 10% (v/v) neitrālu buferētu formalīnu (FA), vai svaigi pagatavotu 4% (m/V) formaldehīda šķīdumu (PFA), kas izgatavots no paraformaldehīda pulvera. Formalīns, kas ir formaldehīda šķīdums ūdenī, tiek buferēts līdz neitrālam pH, lai saglabātu audu morfoloģiju un novērstu pārmērīgu šķērssaistīšanu. Šķīdums, kura pamatā ir paraformaldehīds, nodrošina arī efektīvu fiksāciju, savstarpēji saistot proteīnus, tādējādi stabilizējot audu struktūru turpmākai iestrādāšanai parafīna vaskā. Šīs ķīmiskās vielas ir būtiskas audu integritātes un morfoloģijas saglabāšanai fiksācijas un iegulšanas procesā.
Kā parafīns tiek noņemts no FFPE paraugiem?
Lai noņemtu parafīnu no FFPE paraugiem, audu sekcijas parasti tiek pakļautas virknei ksilola mazgāšanai, kam seko rehidratācija, izmantojot šķirotu spirtu sēriju un, visbeidzot, ūdeni. Tā kā ksilols ir ļoti toksisks, radot veselības riskus, piemēram, elpošanas problēmas, ādas kairinājumu un iespējamu ilgtermiņa ietekmi ar atkārtotu iedarbību, ultraskaņas parafīna noņemšana daudzās laboratorijās parādās kā daudzsološa alternatīva. Šī metode izmanto intensīvus ultraskaņas viļņus, lai efektīvi un droši noņemtu parafīnu, neizmantojot toksiskus šķīdinātājus, piemēram, ksilolu, tādējādi samazinot risku laboratorijas personālam un radot drošāku darba vidi.
Cik ilgi man vajadzētu nostiprināt audus, lai iegūtu labu FFPE paraugu kvalitāti?
Vispārīgi ieteikumi par fiksācijas ilgumu parasti iesaka noteikt audu paraugus formalīnā 24 līdz 48 stundas. Šis ilgums parasti ir pietiekams, lai saglabātu audu morfoloģiju un šūnu struktūras, vienlaikus samazinot pārmērīgu fiksāciju, kas var izraisīt pārmērīgu nukleīnskābju un proteīnu savstarpēju saistīšanu un degradāciju. Tomēr optimālais fiksācijas laiks var atšķirties atkarībā no audu lieluma un veida, un mazākiem vai smalkākiem paraugiem ir nepieciešams īsāks fiksācijas laiks. Ir ļoti svarīgi līdzsvarot atbilstošu fiksāciju, lai novērstu audu autolīzi un noārdīšanos, vienlaikus izvairoties no ilgstošas fiksācijas, kas varētu sarežģīt pakārtotās molekulārās analīzes.