Hielscher Ultrasonics
Prosesinizi müzakirə etməkdən məmnun olarıq.
Bizə zəng edin: +49 3328 437-420
Bizə poçt göndərin: info@hielscher.com

FFPE Yüksək Təsirli Nümunə Hazırlığı: Zülal Ekstraksiya və Nuklein Turşusu Kəsmə

Yüksək məhsuldarlıqlı ultrasəs cihazı UIP400MTP ilə Hielscher Ultrasonics formalin fiksasiyası və parafinə daxil edilmiş (FFPE) toxuma hazırlığı problemlərini həll edir. FFPE deparafinizasiyası, toxuma lizisi, homogenizasiyası, zülalların çıxarılması və DNT/RNT-nin kəsilməsi üçün ultrasəsləşdirmənin çoxlu sayda FFPE nümunəsini necə emal etdiyini öyrənin! Ultrasonik FFPE toxuma hazırlığından faydalanın – çoxlu plitələrdə böyük nümunə nömrələrinin işlənməsi! Etibarlı tədqiqat nəticələri üçün yüksək keyfiyyətli nümunələr əldə edin və yüksək nümunə nömrələri əldə edin! Və nəhayət, vaxtınıza və pulunuza qənaət edin!

FFPE Nümunəsinin Hazırlanması Yüksək Verimli Sonikasiya ilə Asandırılır

Formalin fiksasiyası və parafinin yerləşdirilməsi (FFPE) bərk toxumaların qorunması və arxivləşdirilməsi üçün ən geniş yayılmış üsuldur. FFPE toxuma nümunələrindən biomolekulların çıxarılması çox vaxt saxlanılan nümunələrin keyfiyyətinə görə əhəmiyyətli problemlər yaradır. Molekulyar biologiya və klinik tədqiqatda əvəzsiz aktivlər olan bu nümunələr retrospektiv tədqiqatlar və diaqnostik biomarkerlərin təsdiqi üçün zəngin bioloji məlumat mənbəyi təmin edir. Bununla belə, formalin fiksasiyası və parafinin yerləşdirilməsi prosesi toxuma arxitekturasını və morfologiyasını qorumaqla yanaşı, yüksək keyfiyyətli nuklein turşularının və zülalların çıxarılmasını çətinləşdirir. Formalin molekulyar parçalanmaya və kimyəvi modifikasiyalara səbəb olan nuklein turşuları və zülalların çarpaz bağlanmasına səbəb olur. Yüksək məhsuldarlıqlı ultrasəs cihazı UIP400MTP-nin FFPE nümunəsinin hazırlanmasında çətinliklərin öhdəsindən necə gəldiyini öyrənin!

Effektiv FFPE Nümunəsinin Hazırlanması üçün Ultrasonikator

  • İstifadəsi asan iş axını: İstifadəçi üçün əlverişli olan sadələşdirilmiş proseslər.
  • Deparafinləşdirmə, Zülalların çıxarılması, DNT / RNT kəsilməsi
  • Sürətli yüksək məhsuldarlıqlı emal: çox quyulu lövhələrin səmərəli idarə edilməsi.
  • Effektiv deparafinləşdirmə: zülalların təkmil həlli.
  • Zəhərli olmayan həlledicilər: ksilen kimi zərərli üzvi həlledicilərin istifadəsindən çəkinir.

 

UIP400MTP çoxqulu boşqab ultrasəs cihazı zülal çıxarılması və DNT və RNT kəsilməsi üçün yüksək məhsuldarlıqda FFPE nümunələrini emal edə bilər.

UIP400MTP yüksək məhsuldarlıqlı sonikator çoxqulu plitələrdə yüksək məhsuldarlıqlı FFPE nümunəsinin emalı üçün

İnformasiya tələbi




Bizim qeyd Gizlilik Siyasəti.




 
Ultrasonication istifadə edərək FFPE Nümunəsinin Hazırlanması - Hielscher tərəfindən UIP400MTP çoxlu boşqab sonikatoru
 

FFPE toxumasından zülal çıxarma üsullarında irəliləyişlər

Hielscher Ultrasonics yüksək məhsuldarlıqlı FFPE nümunəsinin hazırlanmasında problemləri həll edir. Sonication mexaniki vibrasiya və fokuslanmış kavitasiya yaratmaq üçün ultrasəs dalğalarından istifadə edir, hüceyrə strukturlarını effektiv şəkildə pozur və biomolekulların həll edilməsini artırır. Bu texnika FFPE toxumalarından nuklein turşusu və zülal çıxarılmasının səmərəliliyini və məhsuldarlığını artırmaq, həmçinin kitabxananın hazırlanması üçün DNT və RNT kəsmə qabiliyyətinə görə populyarlıq qazanmışdır. UIP400MTP çoxqulu boşqab sonikatorundan istifadə edərək ultrasəsləşdirmənin aşağı axın tətbiqləri üçün bu biomolekulların bütövlüyünü qoruduğunu vurğulamaq çox vacibdir.

 

Videoda UIP400MTP ultrasəs nümunəsi hazırlama sistemi göstərilir ki, bu da yüksək intensivlikli ultrasəsdən istifadə etməklə istənilən standart çoxquyulu lövhələrdən etibarlı nümunə hazırlamağa imkan verir. UIP400MTP-nin tipik tətbiqlərinə hüceyrə lizisi, DNT, RNT və xromatinin kəsilməsi, həmçinin zülal çıxarılması daxildir.

Çox quyulu boşqab sonikasiyası üçün ultrasəs cihazı UIP400MTP

Video Miniatür

 

Yüksək məhsuldarlıqlı ultrasəsdən istifadə edərək nuklein turşusu kəsmə

96 quyulu lövhələr və digər çoxqulu plitələr UIP400MTP sonikatorundan istifadə etməklə ən yaxşı şəkildə işlənir. Bu ultrasəs sistemi yüksək məhsuldarlıqda liziz, DNT parçalanması və hüceyrənin həlli ilə işləmə nümunələri üçün idealdır.Yüksək məhsuldarlıq parametrlərində istifadə üçün çox quyulu ultrasəs cihazı UIP400MTP FFPE nümunələrinin hazırlanmasını yeni səviyyəyə gətirir. Bu multiwell-plate sonication metodu birdən çox nümunənin eyni vaxtda emalı üçün səmərəli və etibarlı bir həll təqdim edir. O, yeni nəsil sıralama (NGS), kəmiyyət PCR və proteomik analizlər də daxil olmaqla müxtəlif analitik üsullar üçün vacib olan DNT, RNT və zülalların sürətli və təkrarlana bilən çıxarılmasını asanlaşdırır. Amplituda, müddət və temperatur kimi sonication parametrlərinin optimallaşdırılması çıxarılan biomolekulların keyfiyyətini və kəmiyyətini daha da artırır.

Çoxqulu plitələr üçün UIP400MTP sonikatoru FFPE toxumasından DNT və RNT-nin parçalanması və kəsilməsi üçün əhəmiyyətli üstünlüklər təklif edir. Bu sistemin diqqətəlayiq xüsusiyyətlərindən biri, 150-200 baza cütü (bp) qısa fraqmentləri və ya 15-20 kilobaza cütlüyündən daha uzun fraqmentlər əldə etmək üçün sonikasiya intensivliyinin dəqiq tənzimlənməsini təmin edən dar DNT və RNT fraqment ölçülərinə nail olmaq qabiliyyətidir. kbp). Bu çox yönlülük UIP400MTP-ni həm qısa oxunan, həm də uzun müddət oxunan ardıcıllıq tətbiqləri üçün əvəzolunmaz edir, yeni nəsil ardıcıllıq (NGS) və bütün genom ardıcıllığı (WGS) üçün yüksək keyfiyyətli nəticələr təmin edir. Onun fraqment ölçüsünə dəqiq nəzarəti genomikanın bütün sahələrində tədqiqatçılar üçün çox vacibdir, çünki o, spesifikasiyalara uyğun nümunələr hazırlamağa imkan verir.

FFPE toxumasında qabaqcıl həllər üçün bizimlə əlaqə saxlayın

FFPE nümunələrindən səmərəli biomolekulun bərpası, çıxarılan nuklein turşularının və zülalların bütövlüyünü qorumaq və nəticələrin təkrar istehsalını təmin etmək üçün UIP400MTP çoxqulu boşqab sonikatorunu kəşf edin. Bu texnologiya digər hazırlıq və analitik iş axınları ilə problemsiz şəkildə inteqrasiya edir, FFPE toxuma arxivlərindən istifadə edərək molekulyar araşdırmaları sadələşdirir və təkmilləşdirir.

İnformasiya tələbi




Bizim qeyd Gizlilik Siyasəti.




Fiksatorlar və onların təsiri

Fiksasiya hüceyrə strukturlarını qoruyan, biokimyəvi reaksiyaları dayandıran və deqradasiyanın qarşısını alan nümunənin hazırlanmasında mühüm addımdır. Xüsusi eksperimental tələblərdən asılı olaraq müxtəlif fiksatorlar istifadə olunur. Ən çox yayılmış iki fiksator formaldehid və paraformaldehiddir, zülalları və nuklein turşularını çarpaz bağlayır, hüceyrə və toxumaların morfologiyasını və antigenliyini qoruyur. Etanol, metanol və qlutaraldehid kimi digər fiksatorlar xüsusi tətbiqlər üçün istifadə olunur.

Formaldehid və paraformaldehid fiksatorları amin qrupları arasında metilen körpüləri əmələ gətirir və nəticədə zülalların çarpaz əlaqəsi yaranır. Bu proses hüceyrə komponentlərini effektiv şəkildə hərəkətsizləşdirir, sonrakı analiz addımları zamanı onların bütövlüyünü qoruyur. Bu fiksatorların təsiri konsentrasiya, pH və temperatur kimi amillərdən təsirlənə bilər və bu parametrlərin optimallaşdırılması hüceyrə strukturlarının optimal qorunmasını təmin etmək üçün çox vacibdir.

 
Ultrasonik FFPE Hazırlanmasının üstünlükləri
 

Ultrasəs fiksasiya edilmiş hüceyrələri və toxumaları pozmaq üçün adi üsullardan üstün olan güclü bir texnikadır. Ənənəvi lizis üsulları ilə müqayisədə bir sıra nəzərəçarpacaq üstünlüklər təklif edir:

  • Sürət və Səmərəlilik: Ultrasəs lizis mexaniki və ya kimyəvi lizis üsulları ilə müqayisədə emal müddətini əhəmiyyətli dərəcədə azaldan hüceyrələrin və toxumaların sürətli pozulmasını təmin edir. Ultrasəs zondunun yaratdığı yüksək tezlikli səs dalğaları mexaniki kəsici qüvvələr yaradır və sabit hüceyrə strukturlarının pozulmasına səbəb olur. Bu sürətli və səmərəli pozulma tədqiqatçılara qısa müddət ərzində böyük nümunə həcmlərini emal etməyə imkan verir.
  • Zərif və tənzimlənən: Ultrasonik lizis zülallar, nuklein turşuları və fermentlər kimi həssas biomolekulların zədələnməsini minimuma endirən yumşaq pozulma mexanizmi təklif edir. Həddindən artıq istilik və ya kəsmə qüvvələri yaradan mexaniki üsullardan fərqli olaraq, ultrasəs lizis hüceyrədaxili komponentlərin bütövlüyünü və funksionallığını qoruyarkən hüceyrələri pozmaq üçün idarə olunan kavitasiyadan istifadə edir.
  • Çox yönlülük: Ultrasəs lizis müxtəlif fiksatorlara tətbiq oluna bilər ki, bu da tədqiqatçılara geniş fiksasiya edilmiş nümunələrlə işləməyə imkan verir. Formaldehid, paraformaldehid və ya alternativ fiksatorlardan istifadə etməsindən asılı olmayaraq, ultrasəs lizis ardıcıl olaraq hüceyrə komponentlərinin optimal bərpasını təmin edərək səmərəli pozulma təmin edir.
  • Yüksək məhsuldarlıq və keyfiyyət: Ultrasəs lizis fiksasiya olunmuş hüceyrələri və toxumaları bərabər şəkildə pozmaq qabiliyyətinə görə bütöv hüceyrə komponentlərinin yüksək məhsuldarlığını asanlaşdırır. Bu, zülal analizi, nuklein turşusunun çıxarılması və enzimatik analizlər kimi aşağı axın tətbiqlərinə etibarlı və təkrarlana bilən nəticələr əldə etməyə imkan verir.
  • Avtomatlaşdırma uyğunluğu: Ultrasonik lizis asanlıqla avtomatlaşdırılmış sistemlərə inteqrasiya oluna bilər, bu da yüksək məhsuldarlıqlı nümunə emalına imkan verir. Bu uyğunluq tədqiqatçılara, xüsusən də irimiqyaslı tədqiqatlarda iş axınını tənzimləməyə və məhsuldarlığı artırmağa imkan verir.
Hüceyrə lizisi, DNT çıxarılması, DNT fraqmentasiyası, hüceyrənin həll edilməsi və zülalların təmizlənməsi üçün 96-Quyu Plitə Sonicatoru UIP400MTP.

96 quyu boşqab sonikator UIP400MTP mikrotiter və çoxqulu plitələrin sonikasiyası üçün

Ultrasəs lizis fiksasiya olunmuş hüceyrələrin və toxumaların pozulmasında inqilab etdi və ənənəvi lizis üsulları ilə müqayisədə çoxsaylı üstünlüklər təqdim etdi. Onun sürəti, səmərəliliyi, seçmə qabiliyyəti, universallığı, yüksək məhsuldarlığı və avtomatlaşdırma uyğunluğu onu molekulyar biologiya və biotexnologiya tədqiqatlarında əvəzsiz alətə çevirir. Təmassız sonikatorları və həmçinin zond tipli sonikatorları təklif edən Hielscher Ultrasonics, həyat elmi tətbiqiniz üçün ən uyğun ultrasəs homogenizatorunu təklif edir. Tək nümunələri, çoxsaylı nümunələri və ya çox yüksək nümunə nömrələrini eyni vaxtda emal etmək istəsəniz, biz sizə tədqiqat və diaqnostika tələblərinizə uyğun gələn ən yaxşı sonikatoru təklif edəcəyik.
Çox nümunəli və yüksək məhsuldarlıqlı nümunə hazırlamaq üçün Hielscher kontaktsız sonikatorları haqqında daha çox oxuyun!

UIP400MTP Multiwell-Plate Sonicator ilə FFPE Nümunə Hazırlığı

  • birdəfəlik investisiya
  • öz istehlak materiallarından istifadə edin
  • xüsusi aksesuarlar və istehlak materialları üçün təkrarlanan xərclər yoxdur
  • yüksək məhsuldarlıq
  • dəqiq nəzarət
  • ən müasir texnologiya
  • etibarlılıq & möhkəmlik
  • tənzimlənən, dəqiq proses nəzarəti
  • sənaye dərəcəsi: davamlı olaraq 24/7 işlədilə bilər
  • idarə etmək asan və təhlükəsizdir
  • aşağı təmir

 
Sonicatorların həyat elmindəki tətbiqləri haqqında daha çox oxuyun!

Yüksək məhsuldarlıqlı nümunə hazırlamaq üçün sonikator! UIP400MTP plitə sonikatoru 96 quyulu lövhələrdə bioloji nümunələrin lizisi, zülal çıxarılması, DNT parçalanması və hüceyrə həllini asanlaşdırır.

İstənilən 96-quyu plitələr, mikrotiter plitələr və çoxqulu lövhələr üçün boşqab sonikatoru UIP400MTP.

Dizayn, İstehsalat və Konsaltinq – Keyfiyyətli Almaniya istehsalı

Hielscher ultrasəs cihazları ən yüksək keyfiyyət və dizayn standartları ilə tanınır. Sağlamlıq və asan əməliyyat ultrasəs aparatlarımızın sənaye obyektlərinə rahat inteqrasiyasına imkan verir. Kobud şərtlər və tələbkar mühitlər Hielscher ultrasəs cihazları tərəfindən asanlıqla idarə olunur.

Hielscher Ultrasonics, ISO sertifikatlı bir şirkətdir və ən müasir texnologiya və istifadəçi dostu olan yüksək performanslı ultrasəs cihazlarına xüsusi diqqət yetirir. Əlbəttə ki, Hielscher ultrasəs cihazları CE-yə uyğundur və UL, CSA və RoHs tələblərinə cavab verir.

Bizimlə əlaqə saxlayın! / Bizdən soruşun!

Əlavə məlumat üçün müraciət edin

UIP400MTP çox quyulu boşqab ultrasəs cihazı, onun FFPE nümunəsinin hazırlanmasında tətbiqləri və qiymətləri haqqında əlavə məlumat tələb etmək üçün aşağıdakı formadan istifadə edin. Genomika və proteomikada tətbiqinizi sizinlə müzakirə etməkdən şad olarıq!









Bizim qeyd edin Gizlilik Siyasəti.




Çox Quyu Plitələrində Yüksək Keçirici RNT Sıralaması

UIP400MTP Ultrasonikator: Multi-Well-Plate-də yüksək məhsuldarlıqlı FFPE nümunə hazırlığı



Tez-tez verilən suallar
Aşağıda biz FFPE toxumasının hazırlanmasına və FFPE nümunələrinin ultrasəslənməsinə aid olan tez-tez verilən suallara cavab veririk.

FFPE toxuması necə hazırlanır?

FFPE Toxumasının Hazırlanması üçün addımlar: Təzə toxumanın diqqətlə idarə edilməsi və emalı yüksək keyfiyyətli FFPE nümunələrinin yaradılması üçün vacibdir. Hüceyrə arxitekturasının, nuklein turşularının və zülalların qorunmasının təmin edilməsi aşağı axın analizinin dəqiq aparılması üçün vacibdir. Hər bir addım – toplamadan yerləşdirməyə qədər – müxtəlif analizlər, o cümlədən histoloji müayinə, immunohistokimya və molekulyar tədqiqatlar üçün nümunənin bütövlüyünü qorumaq üçün dəqiqlik tələb edir. Düzgün yerinə yetirildikdə, bu fiksasiya və yerləşdirmə prosesi qorunan toxumanın in vivo vəziyyəti dəqiq əks etdirməsini təmin edir və etibarlı diaqnostika və tədqiqat nəticələrinə imkan verir.
Biz sizə FFPE toxuma nümunələrinin yerləşdirilməsi prosesinin 6 əsas addımını təqdim edirik.

  • Toxuma Kolleksiyası
    Canlı məməlilərdən və toxuma mədəniyyətlərindən alınan biopsiyaların hər ikisi FFPE nümunəsinin hazırlanması üçün təzə toxuma əldə etmək üçün əlverişli mənbələrdir.
    Aseptik texnikadan istifadə etmək vacibdir: Çirklənməmək üçün steril alətlər və əlcəklərdən istifadə edin. İdeal olaraq, toxumaları steril bir mühitdə toplayın, məsələn, cərrahi dəst və ya laminar axın başlığı.
    Nümunə çox kövrək olduğundan, onun həssas istifadəsi vacibdir: Emalda gecikmələri minimuma endirin və kəsildikdən sonra dərhal toxuma emalına başlayın. Bu, avtoliz və deqradasiyanın qarşısını almaq üçün çox vacibdir. Toxumanı otaq temperaturunda saxlayın; buz kristallarının əmələ gəlməsinə və toxumaların zədələnməsinə səbəb ola biləcəyi üçün donmadan çəkinin.
  • Dokuların fiksasiyası
    Əvvəlcə toxuma fiksator məhlulu ilə müalicə olunur: Neytral pH-a qədər tamponlanmış suda 4% formaldehidə bərabər olan 10% neytral tamponlu formalin (NBF) istifadə edin.
    Toxumanı tamamilə formalinə batırın. Ən azı 10:1 olan fiksator-toxuma həcm nisbətini təmin edin. Fiksasiya müddəti adətən toxuma növündən və ölçüsündən asılı olaraq 6 ilə 24 saat arasında dəyişir. Fiksatorun toxumaya hərtərəfli nüfuz edə bilməsi vacibdir. Bununla belə, həddindən artıq fiksasiya antigenin axtarışını çətinləşdirən çarpaz əlaqəyə səbəb ola bilər, zəif fiksasiya isə toxumaların zəif qorunması ilə nəticələnə bilər.
  • Dokuların kəsilməsi
    İkincisi, fiksatorun adekvat nüfuz etməsi üçün toxumanı təxminən 3-5 mm qalınlığa qədər kəsin. Müvafiq histoloji strukturları tutmaq üçün toxumanın düzgün oriyentasiyasını təmin edin. Bu, toxuma daha sonra analiz üçün istifadə edildikdə ekstraksiya prosesini asanlaşdırır.
  • Sabit Nümunənin Emalı
    İndi sabit toxuma susuzlaşdırılmalıdır: Fiksasiyadan sonra parafin mumunun hərtərəfli nüfuz etməsini təmin etmək üçün toxuma susuzlaşdırılmalıdır. Suyu çıxarmaq üçün toxumanı pilləli etanol seriyasından (70%, 80%, 90% və 100%) keçirin.
    Ksilenlə təmizləmə: Parafin mumu suda həll olunmur, lakin ksilendə həll olunur. Buna görə də toxumadakı su ksilenlə əvəz edilməlidir. Bununla belə, ksilenin özü suda həll olunmur, lakin spirtdə həll olunur, suyun ilkin olaraq spirtlə əvəz olunduğu bir ara addım tələb olunur. Etanolu çıxarmaq və toxumanı parafin infiltrasiyasına hazırlamaq üçün toxumanı ksilen və ya ksilen əvəzedicisinə batırın.
    Parafin istifadə edərək infiltrasiya: Toxumanı ərinmiş parafin mumuna yerləşdirin, tam infiltrasiyanı təmin edin. Bu addım adətən hərtərəfli emprenye təmin etmək üçün parafinin bir neçə dəyişdirilməsini əhatə edir.
  • Toxumanın yerləşdirilməsi
    Bu mərhələdə toxuma bir toxuma blokuna qəliblənir: Toxumanı istədiyiniz oriyentasiyalı bir qəlibə qoyun və üzərinə ərimiş parafin tökün. Parafinin otaq temperaturunda və ya soyuq boşqabda soyudularaq bərkiməsinə icazə verin.
  • Bölmə və montaj
    Mikrotomiya: Yerləşdirilmiş toxumanı dilimləmək üçün parafin blokundan nazik kəsiklər (adətən 4-5 mikrometr) kəsmək üçün mikrotomdan istifadə edin. Sonra nümunə montaj edilir, sonrakı boyanma və mikroskopik analiz üçün bölmələr şüşə slaydlara yerləşdirilir.
    Nəhayət, histologiyanın keyfiyyətini yoxlayın: Düzgün fiksasiya və emaldan əmin olmaq üçün mikroskop altında ilk bölmələri qiymətləndirin. Protokolları toxuma növünə və müşahidə olunan keyfiyyətə əsasən lazım olduqda tənzimləyin.

 
FFPE toxumaları RNT, DNT və zülalları bərpa etmək, həmçinin xərçəng və ya digər xəstəliyin əlamətlərini aşkar etmək üçün istifadə edilə bilər. Onlar illərlə saxlanıla bilər və tədqiqatçılar və həkimlərin diaqnoz və tədqiqat üçün toxuma nümunələrindən necə istifadə etməsinin vacib hissəsidir.

FFPE toxuması ilə bağlı ümumi problemlər və çətinliklər hansılardır?

Formalinlə Sabit, Parafinlə Gömülü (FFPE) toxuma nümunələri tədqiqat və diaqnostikada geniş istifadə olunur, lakin onlar bir sıra problemlər və ümumi problemlər yaradır:

  • Biomolekulların deqradasiyası: Uzun müddətli fiksasiya DNT, RNT və zülalların deqradasiyasına gətirib çıxara bilər ki, bu da aşağı axın tətbiqləri üçün yüksək keyfiyyətli nuklein turşularının və ya zülalların çıxarılmasını çətinləşdirir. Düzgün fiksasiya (az və həddindən artıq fiksasiyadan qaçınmaq) toxumanın qorunması üçün vacibdir.
  • Çarpaz əlaqə: Formalin fiksasiyası zülalların və nuklein turşularının çarpaz bağlanmasına səbəb olur ki, bu da molekulyar analizə mane ola bilər və immunohistokimya və digər analizlərin düzgünlüyünə təsir göstərir.

  • Antigen maskalanması: Fiksasiya prosesi immunohistokimya və digər immunoloji analizlərdə antikorların bağlanmasının effektivliyini azaldaraq, antigenik yerləri maskalaya bilər. Bu, tez-tez antigen axtarışını tələb edir, bu prosedurlar vasitəsilə epitopun maskalanması tərsinə çevrilir və epitop-antikor bağlanması bərpa olunur. Bununla belə, tam antigenlik həmişə bərpa olunmaya bilər.
  • Dəyişən Fiksasiya Keyfiyyəti: Fiksasiya vaxtları və şərtlərindəki fərqlər nümunə keyfiyyətinin uyğunsuzluğuna gətirib çıxara bilər, nəticələrin təkrarlanma və müqayisəliliyinə təsir göstərə bilər. Etibarlı fiksasiya protokollarından istifadə edin və az və həddindən artıq fiksasiyadan qaçın.
  • DNT zədələnməsi və parçalanması: FFPE nümunələrinin formalinlə fiksasiyası müxtəlif növ DNT zədələnməsinə səbəb ola bilər, o cümlədən sitozin deaminasiyası (C-dən T mutasiyaları), oksidləşdirici zədələnmələr (məsələn, G-dən T mutasiyalarına səbəb olan 8-okso-guanin), həmçinin nicks kimi fiziki pozulmalar, boşluqlar və DNT polimeraz fəaliyyətinə mane olan abazik yerlər. Formalin fiksasiyası prosesi DNT-nin parçalanmasına səbəb ola bilər, PCR və ardıcıllıq kimi genetik və genomik analizləri çətinləşdirir.
  • RNT keyfiyyəti: FFPE toxumalarından çıxarılan RNT tez-tez parçalanır və kimyəvi cəhətdən dəyişdirilir, bu da yüksək keyfiyyətli transkriptomik analizlərin aparılmasını çətinləşdirir.
  • Protein modifikasiyası: Formalin zülallarda kimyəvi dəyişikliklərə səbəb ola bilər, onların strukturuna və funksiyasına təsir edir, bu da proteomik analizlərə mane ola bilər.
  • Nümunə Emalı Artefaktları: Yerləşdirmə və bölmə prosesi zamanı mexaniki gərginlik və istilik artefaktları təqdim edə və toxumanın daha çox zədələnməsinə səbəb ola bilər.
  • Partiyadan Partiya Dəyişkənliyi: Fərqli partiyalar arasında fiksasiya və yerləşdirmə protokollarında dəyişikliklər nəticələrdə əhəmiyyətli dəyişkənliyə səbəb ola bilər və tədqiqatlar arasında müqayisələri çətinləşdirir.
  • Saxlama Problemləri: FFPE bloklarının uzunmüddətli saxlanması zamanla əlavə deqradasiyaya və nuklein turşusunun bütövlüyünün itirilməsinə gətirib çıxara bilər ki, bu da retrospektiv tədqiqatlar üçün arxiv nümunələrinin canlılığına təsir göstərir.

Optimallaşdırılmış protokollardan istifadə, nümunə ilə ehtiyatlı davranma və qabaqcıl texnikaların tətbiqi FFPE toxumalarından alınan məlumatların keyfiyyətini və etibarlılığını yaxşılaşdırmağa kömək edir.

FFPE və dondurulmuş toxuma arasındakı fərq nədir?

FFPE (Formalin-Fixed, Parafin-Embedded) toxuması formalin istifadə edərək toxumanı fiksasiya etmək üçün saxlanılır və sonra parafin mumuna daxil edilir, bu da toxuma morfologiyasını saxlamaqla otaq temperaturunda uzunmüddətli saxlanmağa imkan verir. Bunun əksinə olaraq, dondurulmuş toxuma dondurulmaqla sürətlə qorunur, bu da nuklein turşularının və zülalların bütövlüyünü daha yaxşı qoruyur, lakin çox aşağı temperaturda saxlanmasını tələb edir.

FFPE-nin yerləşdirilməsi üçün hansı kimyəvi maddələr istifadə olunur?

FFPE-nin yerləşdirilməsi üçün istifadə edilən kimyəvi maddələrə adətən fiksasiya üçün formalin və yerləşdirmə üçün parafin mumu daxildir. FFPE-nin yerləşdirilməsi üçün toxumalar adətən ya 10% (h/v) neytral tamponlanmış formalin (FA) və ya paraformaldehid tozundan hazırlanmış təzə hazırlanmış 4% (ağırlıq/həc) formaldehid məhlulundan (PFA) istifadə etməklə bərkidilir. Formaldehidin suda məhlulu olan formalin toxuma morfologiyasını qorumaq və həddindən artıq çarpaz əlaqənin qarşısını almaq üçün neytral pH-a qədər tamponlanır. Paraformaldehid əsaslı məhlul həmçinin zülalları çarpaz bağlamaqla effektiv fiksasiyanı təmin edir və bununla da parafin mumuna sonradan daxil olmaq üçün toxuma strukturunu sabitləşdirir. Bu kimyəvi maddələr fiksasiya və yerləşdirmə prosesi zamanı toxuma bütövlüyünü və morfologiyasını qorumaq üçün vacibdir.

FFPE nümunələrindən parafin necə çıxarılır?

FFPE nümunələrindən parafini çıxarmaq üçün toxuma bölmələri adətən bir sıra ksilen yuyulmasına məruz qalır, ardınca bir sıra spirtlər və nəhayət su vasitəsilə rehidratasiya aparılır. Ksilen yüksək zəhərli olduğundan, tənəffüs problemləri, dəri qıcıqlanması və təkrar məruz qalma ilə potensial uzunmüddətli təsirlər kimi sağlamlıq riskləri yaratdığından, ultrasəs parafinin çıxarılması bir çox laboratoriyalarda perspektivli bir alternativ kimi ortaya çıxır. Bu üsul ksilen kimi zəhərli həlledicilərə ehtiyac olmadan parafini səmərəli və təhlükəsiz şəkildə çıxarmaq üçün intensiv ultrasəs dalğalarından istifadə edir və bununla da laboratoriya işçiləri üçün riski azaldır və daha təhlükəsiz iş mühiti yaradır.

Yaxşı FFPE nümunə keyfiyyəti üçün toxumalarımı nə qədər fiksasiya etməliyəm?

Fiksasiya müddəti üçün ümumi tövsiyələr adətən toxuma nümunələrinin formalin içərisində 24-48 saat ərzində fiksasiyasını təklif edir. Bu müddət ümumiyyətlə toxuma morfologiyasını və hüceyrə strukturlarını qorumaq üçün kifayətdir, eyni zamanda həddindən artıq fiksasiyanı minimuma endirir, bu da nuklein turşularının və zülalların həddindən artıq çarpaz bağlanmasına və deqradasiyasına səbəb ola bilər. Bununla belə, optimal fiksasiya müddəti toxumanın ölçüsündən və növündən asılı olaraq dəyişə bilər, daha kiçik və ya daha incə nümunələr daha qısa fiksasiya müddətini tələb edir. Aşağı axın molekulyar analizləri çətinləşdirə biləcək uzunmüddətli fiksasiyadan qaçarkən toxuma avtolizinin və deqradasiyasının qarşısını almaq üçün adekvat fiksasiyanı tarazlaşdırmaq çox vacibdir.

Prosesinizi müzakirə etməkdən məmnun olarıq.

Let's get in contact.