Ultrasonikasiyadan istifadə edərək göbələklərdən Beta-qlükanların çıxarılması
Materiallar və Avadanlıqlar
- Göbələklər (məsələn, 100 q doğranmış və ya dilimlənmiş göbələk)
- Soyuq distillə edilmiş su (məsələn, 500mL)
- Blender və ya öğütücü
- Şüşə qablar və ya şüşələr
- Filtr kağızı və ya vakuum filtrasiya qurğusu
- sentrifuqa (isteğe bağlı)
- Yağış üçün spirt (məsələn, etanol).
- Soyuducu
- Qurutma sobası
Beta-Qlukan Ekstraksiya Protokolu
- Göbələkləri əzin və ya əzin (məsələn, Çaqa və ya Aslan’ Mane göbələyi) təqribən iri hissəciklərə çevrilir. 1-dən 3 millimetrə qədər. Məsələn, 100 q qurudulmuş göbələk hissəciklərindən istifadə edin.
- Sonra göbələk hissəciklərini bir şüşə qaba və ya kolbaya əlavə edin.
- Sonra, çıxarılacaq göbələk hissəcikləri olan şüşəyə 500 ml distillə edilmiş su əlavə edin. Su-göbələk nisbəti xüsusi göbələk növündən və hissəcik ölçüsündən asılı olaraq dəyişə bilər.
- Şlamı qarışdırdıqdan sonra ultrasəs laboratoriya homogenizatorundan istifadə edərək qarışığı sonikləşdirin (məsələn, 100% amplituda 22 mm sonotrode ilə UP400St və ya 100% amplituda 14 mm sonotrode ilə UP200Ht) və 90 ° C-dən aşağı temperaturda saxlayın. Aşağı temperaturlar ekstraksiya zamanı beta-qlükanlar kimi istiliyə həssas birləşmələri saxlamağa kömək edir. Təxminən sonikasiya edin. UP400St istifadə edərkən müvafiq olaraq 5-10 dəqiqə və UP200Ht istifadə edərkən 10-10 dəqiqə. Nəzərə alın ki, temperatur və çıxarma vaxtı istifadə olunan ultrasəs gücündən asılı olaraq dəyişə bilər. Əlbəttə ki, daha böyük həcmlər daha uzun sonication vaxtlarını tələb edəcəkdir.
- Sonicləşdirilmiş qarışığı filtr kağızı vasitəsilə süzün və ya mayeni (çıxarılmış beta-qlükanlar ehtiva edən) bərk göbələk qalığından ayırmaq üçün vakuum filtrasiya qurğusundan istifadə edin.
- Sonra spirt (məsələn, etanol) əlavə etməklə mayedən beta-qlükanları çökdürün. Tipik olaraq, yağıntı üçün 2-3 həcmdə spirt istifadə edə bilərsiniz.
- Bundan sonra, beta-qlükanların çökməsinə imkan vermək üçün qarışığı bir neçə saat soyuducuda saxlayın.
- Çöküntüdən sonra mayeni diqqətlə süzüb beta-qlükan çöküntüsünü toplaya bilərsiniz.
- Nəhayət, beta-qlükanları sobada aşağı temperaturda (məsələn, 40-50°C) bütün spirt çıxarılana və quru toz əldə edənə qədər qurutun.
Göbələklər öz xüsusiyyətlərində müxtəliflik nümayiş etdirirlər. Beləliklə, beta-qlükanın çıxarılması prosesi xüsusi göbələk növləri, göbələklərin vəziyyəti (qurudulmuş və ya təzə), hissəcik ölçüsü və ekstraksiya temperaturu kimi amillərə görə fərqlənə bilər. Çıxarma prosedurunuzu optimallaşdırmaq üçün bərk-maye nisbətlərini dəyişdirmək, temperaturları tənzimləmək, müxtəlif həllediciləri araşdırmaq və müxtəlif sonikasiya müddətləri və amplituda parametrlərini sınaqdan keçirmək daxil olmaqla, müxtəlif parametrlərlə sınaqdan keçirin.
Beta-qlükanın ultrasəsli enzimatik çıxarılması
Ultrasonik yardımlı enzimatik ekstraksiya fermentlərin və ultrasəs dalğalarının birləşməsindən istifadə edərək göbələklərdən beta-qlükanlar çıxarmaq üçün istifadə edilən bir üsuldur. Bu proses göbələklərin hüceyrə divarlarını parçalamaq və beta-qlükanların sərbəst buraxılmasını asanlaşdırmaqla ekstraksiya səmərəliliyini artırır.
Göbələklərdən Beta-Qlukan Ekstraksiyasının Artırılması
Tələblərinizə cavab verən beta-qlükan hasilatı protokolunu qurduqdan sonra, hasilat prosesini genişləndirmək sadə bir cəhd ola bilər.
Batch Extraction Scale-Up
Partiya çıxarma metodundan istifadə edərək miqyasını böyütməyi planlaşdırırsınızsa, bərk-maye nisbətlərini və bütün digər parametrləri sabit saxlayaraq partiyanın həcmini artırmağı tövsiyə edirik. Eyni ultrasəs homogenizatordan istifadə etməyə davam etsəniz, sonikasiya müddətini mütənasib olaraq artırdığınızdan əmin olun. Həcmi 1 litrdən çox olan partiyalar üçün hissəciklərin asqısını saxlamaq və ekstraksiya vahidliyini yaxşılaşdırmaq üçün yavaş qarışdırıcıdan istifadə etmək istəyə bilərsiniz. Aşağıdakı şəkildə laboratoriya qarışdırıcısı ilə birlikdə UP400St ultrasəs homogenizatorundan istifadə edən 8 litrlik partiya çıxarma qurğusu göstərilir.
UP400St Sonicator ilə 8L Toplu Göbələk Çıxarma Quraşdırma
Sonication sonra Beta-Qlukan Ekstraktının vakuum filtrasiyası
Inline göbələk çıxarılması
Göbələklərdən davamlı olaraq daha çox miqdarda beta-qlükanlar çıxarmaqda maraqlı olanlar üçün Hielscher Ultrasonics botanika materialının çıxarılması üçün nəzərdə tutulmuş axın hüceyrə reaktorlarını təklif edir. Bu sizə aiddirsə, əlavə məlumat üçün birbaşa bizimlə əlaqə saxlamağınızı tövsiyə edirik. Texniki komandamız sizin xüsusi ehtiyaclarınız üçün ən uyğun quraşdırmanın müəyyən edilməsində kömək etməkdən məmnun olacaq. Bununla belə, xüsusi göbələk növlərinizlə əvvəllər qeyd olunan laboratoriya miqyaslı təcrübənin aparılması dəqiq proses tələblərini başa düşmək üçün əvəzolunmaz ola bilər. Aşağıdakı şəkildə saatda təxminən 50-200 litr göbələk həlledici şlamında beta-qlükanlar çıxarmaq üçün UIP4000hdT ultrasəs homogenizatoru olan böyük axın hüceyrə reaktoru göstərilir.
UIP4000hdT Ultrasəs Homogenizatoru Saatda 50-200L Göbələk-Holvent Bulamaç
Göbələk Növlərinin Empirik Beta-Qlukan Konsentrasiyası
Aşağıda müxtəlif göbələk növlərindən çıxarılan empirik beta-qlükan konsentrasiyasının siyahısını tapa bilərsiniz.
| Göbələk növləri | Beta qlükan tərkibi (% çəki) |
|---|---|
| Termitomyces fuliginosus R. Heim | 1% |
| Boletus colossus R. Heim | 3% |
| Russula densifolia Secr. keçmiş Gillet | 25% |
| Russula cyanoxantha (Schaeff.) Fr. | 29% |
| Russula alboareolata Hongo | 42% |
| Russula qusma (Schaeff.) Pers. | 10% |
| Russula delica Fr. | 38% |
| Pycnoporus cinnabarinus (Jacq.) P. Karst. | 35% |
| Amanita hemibapha (Berk. & Broome) Sacc. | 5% |
| Amanita Princeps Corner & Bas | 9% |
| Amanita caesarea (Scop.) Pers. | 4% |
| Heimiella retispora (Pat. & CF Baker) Boedijn | 19% |
| Cortinarius claricolor var. turmalis (Fr.) Quadr | 13% |
| Termitomyces tylerianus Otieno | 12% |
| Termitomyces microcarpus (Berk. & Broome) R. Heim | 8% |
| Termitomyces eurhizus (Berk.) R. Heim | 7% |
| Polyporellus varius (Pers.) P. Karst. | 2% |
| Pycnoporus coccineus (Fr.) Bondartsev & Müğənni | 45% |
| Lentinus squarrosulus Mont. | 2% |
| Daedaleopsis confragosa (Bolton) J. Schröt | 3% |
| Pycnoporus sanguineus (L.) Fr. | 35% |
| Amanita hemibapha (Berk. & Broome) Sacc. | 5% |
| Amanita virgineoides Bas | 1% |
| Agaricus silvaticus Schaeff. | 3% |
| Chlorophyllum molibdites (G. Mey.) Massee | 3% |
| Ganoderma lucidum (Curtis) P. Karst. | 33% |
| Amauroderma rugosum (Blume & T. Nees) Torrend | 4% |
| Suillus bovinus var. bovinus (Pers.) Kuntze | 1% |
| Clitocybe suaveolens (Schumach.) P. Kumm. S | 9% |
| Cleroderma verrucosum (Bull.) Pers. | 9% |
| Heimiella retispora (Pat. & CF Baker) | 19% |
| Lentinula edodes (Berk.) Pegler | 34% |
| Pycnoporus cinnabarinus (Jacq.) P. Karst. | 35% |
Yabanı göbələk növlərinin beta-qlükan konsentrasiyası, Mənbə: Boonyanuphap, Jaruntorn & Hansawasdi, Çanida. (2010). Subtropik quru meşədə, Taylandda vəhşi göbələk icmalarını ehtiva edən Beta qlükanın məkan paylanması. Mantar müxtəlifliyi. 46. 29-42. 10.1007/s13225-010-0067-8.
Göbələklərin Beta-Qlükan Ekstraktı Konsentrasiyasının Kəmiyyəti
Ekstraksiyadan sonra beta-qlükanın konsentrasiyası beta-qlükanın növündən və analizin xüsusi tələblərindən asılı olaraq müxtəlif üsullarla ölçülə bilər. Beta-qlükan konsentrasiyasını ölçmək üçün ümumi üsullar aşağıda verilmişdir. Əlbəttə ki, metodun seçimi tələb olunan dəqiqlik və mövcud avadanlıq kimi amillərdən asılıdır.
-
Qravimetrik üsul
- Prinsip: Bu üsul beta-qlükanların etanol ilə çökdürülməsinə, sonra isə çöküntünün qurudulmasına və çəkilməsinə əsaslanır.
- Prosedur: Nümunə suda həll edilir, beta-qlükanları çökdürmək üçün etanol ilə müalicə olunur, sonra çöküntü toplanır, qurudulur və çəkilir.
- Üstünlükləri: Sadə və geniş istifadə olunur.
- Məhdudiyyətlər: Digər üsullarla müqayisədə daha az dəqiqdir.
-
Kolorimetrik üsullar
- Prinsip: Bu üsullar beta-qlükan konsentrasiyasına mütənasib rəng dəyişikliyi yaradan xüsusi reagentlərlə rəng reaksiyalarını əhatə edir.
-
Nümunələr:
- Fenol-Sülfat turşusu metodu: Bu üsul nümunənin konsentratlaşdırılmış sulfat turşusu və məhlulu narıncı rəngə çevirən fenolla müalicə edilməsini nəzərdə tutur. Rəng intensivliyi beta-qlükan konsentrasiyası ilə mütənasibdir.
- Anthrone Metod: Anthrone reagenti mavi-yaşıl rəng yaratmaq üçün beta-qlükanlar ilə reaksiya verir və rəng intensivliyi ölçülür.
- Üstünlükləri: Həssas və yüksək məhsuldarlıq analizi üçün uyğundur.
- Məhdudiyyətlər: Digər birləşmələrin müdaxiləsi və xüsusi reagentlərə ehtiyac.
-
Enzimatik sınaqlar
- Prinsip: Enzimatik analizlər beta-qlükanları daha sadə şəkərlərə parçalamaq üçün β-qlükanaza kimi fermentlərdən istifadə edir və sərbəst buraxılan şəkərlərin miqdarı ölçülür.
- Üstünlükləri: Yüksək dəqiqlik və dəqiqlik.
- Məhdudiyyətlər: Xüsusi avadanlıq və reagentlər tələb olunur.
-
Yüksək Performanslı Maye Xromatoqrafiyası (HPLC)
- Prinsip: HPLC birləşmələri xromatoqrafik sütunla qarşılıqlı təsirinə əsasən ayırır və kəmiyyətini müəyyən edir.
- Prosedur: Beta-qlükanlar monosaxaridlərə hidrolizə olunur və nəticədə yaranan şəkərlər HPLC ilə ayrılır və miqdarı müəyyən edilir.
- Üstünlükləri: Yüksək dəqiqlik və mürəkkəb nümunələr üçün uyğundur.
- Məhdudiyyətlər: Xüsusi avadanlıq və təcrübə tələb edir.
-
Xüsusi İmmunoanalizlər
- Prinsip: İmmunoanalizlər onların konsentrasiyasını ölçmək üçün beta-qlükanlara xas olan antikorlardan istifadə edir.
-
Nümunələr:
- ELISA (Fermentlə Bağlı İmmunosorbent Təhlili): Bu üsulda fermentlə əlaqəli antikor beta-qlükanlara bağlandıqda rəng dəyişikliyi yaradır.
- Lateral Flow Assays: Bunlar test zolağında görünən nəticəni təmin edən sürətli testlərdir.
- Üstünlükləri: Yüksək spesifiklik və həssaslıq.
- Məhdudiyyətlər: Xüsusi antikorlar tələb olunur və daha bahalı ola bilər.