Ultrasonikasiyadan istifadə edərək göbələklərdən Beta-qlükanların çıxarılması

Laboratoriya sınaqları və ya istehsal məqsədləri üçün göbələklərdən beta-qlükanların çıxarılması göbələklərin doğranması, üyüdülməsi və ya əzilməsi, ultrasəs köməyi ilə ekstraksiya və beta-qlükanların çökməsinin birləşməsini əhatə edir. Burada laboratoriya miqyaslı təcrübə üçün nümunə həcmləri və çəkiləri ilə birlikdə beta-qlükanın çıxarılması prosesinin sadələşdirilmiş konturunu təqdim edirik. Nəzərə alın ki, xüsusi şərtlər və ölçülər göbələk növündən və tələb olunan beta-qlükan təmizliyindən asılı olaraq dəyişə bilər.

Materiallar və Avadanlıqlar

• Göbələklər (məsələn, 100 q doğranmış və ya dilimlənmiş göbələk)
• Soyuq distillə edilmiş su (məsələn, 500mL)
• Blender və ya öğütücü
• Şüşə qablar və ya şüşələr
• Filtr kağızı və ya vakuum filtrasiya qurğusu
• sentrifuqa (isteğe bağlı)
• Yağış üçün spirt (məsələn, etanol).
• Soyuducu
• Qurutma sobası

Beta-Qlukan Ekstraksiya Protokolu

1. Göbələkləri əzin və ya əzin (məsələn, Çaqa və ya Aslan’ Mane göbələyi) təqribən iri hissəciklərə çevrilir. 1 ilə 3 millimetr arasında. Məsələn, 100 q qurudulmuş göbələk hissəciklərindən istifadə edin.
2. Sonra göbələk hissəciklərini bir şüşə qaba və ya kolbaya əlavə edin.
3. Sonra, çıxarılacaq göbələk hissəcikləri olan şüşəyə 500 ml distillə edilmiş su əlavə edin. Su-göbələk nisbəti xüsusi göbələk növündən və hissəcik ölçüsündən asılı olaraq dəyişə bilər.
4. Şlamı qarışdırdıqdan sonra, ultrasəs laboratoriya homogenizatorundan istifadə edərək qarışığı sonikləşdirin (məsələn, 100% amplituda 22 mm sonotrode ilə UP400St və ya 100% amplituda 14 mm sonotrode ilə UP200Ht) və 90 ° C-dən aşağı temperaturda saxlayın. Aşağı temperaturlar ekstraksiya zamanı beta-qlükanlar kimi istiliyə həssas birləşmələri saxlamağa kömək edir. Təxminən sonikasiya edin. UP400St istifadə edərkən 5-10 dəqiqə və UP200Ht istifadə edərkən 10-10 dəqiqə. Nəzərə alın ki, temperatur və çıxarma vaxtı istifadə olunan ultrasəs gücündən asılı olaraq dəyişə bilər. Əlbəttə ki, daha böyük həcmlər daha uzun sonication vaxtlarını tələb edəcəkdir.
5. Sonicləşdirilmiş qarışığı filtr kağızından süzün və ya mayeni (çıxarılmış beta-qlükanlar ehtiva edən) bərk göbələk qalığından ayırmaq üçün vakuum filtrasiya qurğusundan istifadə edin.
6. Sonra spirt (məsələn, etanol) əlavə etməklə mayedən beta-qlükanları çökdürün. Tipik olaraq, yağıntı üçün 2-3 həcmdə spirt istifadə edə bilərsiniz.
7. Bundan sonra, beta-qlükanların çökməsinə imkan vermək üçün qarışığı bir neçə saat soyuducuda saxlayın.
8. Çöküntüdən sonra mayeni diqqətlə süzüb beta-qlükan çöküntüsünü toplaya bilərsiniz.
9. Nəhayət, beta-qlükanları sobada aşağı temperaturda (məsələn, 40-50°C) bütün spirt çıxarılana və quru toz əldə edənə qədər qurutun.

Göbələklər öz xüsusiyyətlərində müxtəliflik nümayiş etdirirlər. Beləliklə, beta-qlükanın çıxarılması prosesi xüsusi göbələk növləri, göbələklərin vəziyyəti (qurudulmuş və ya təzə), hissəcik ölçüsü və ekstraksiya temperaturu kimi amillərə görə fərqlənə bilər. Ekstraksiya prosedurunuzu optimallaşdırmaq üçün bərk-maye nisbətlərini dəyişdirmək, temperaturları tənzimləmək, müxtəlif həllediciləri araşdırmaq və müxtəlif sonikasiya müddətləri və amplituda parametrlərini sınaqdan keçirmək daxil olmaqla, müxtəlif parametrlərlə sınaqdan keçirin.

Beta-qlükanın ultrasəsli enzimatik çıxarılması

Ultrasonik yardımlı enzimatik ekstraksiya fermentlərin və ultrasəs dalğalarının birləşməsindən istifadə edərək göbələklərdən beta-qlükanlar çıxarmaq üçün istifadə edilən bir üsuldur. Bu proses göbələklərin hüceyrə divarlarını parçalamaq və beta-qlükanların sərbəst buraxılmasını asanlaşdırmaqla ekstraksiya səmərəliliyini artırır.

Göbələklərdən Beta-Qlukan Ekstraksiyasının Ölçüsü

Tələblərinizə cavab verən beta-qlükan hasilatı protokolunu qurduqdan sonra, hasilat prosesini genişləndirmək sadə bir cəhd ola bilər.

Batch Extraction Scale-Up

Partiya çıxarma metodundan istifadə edərək miqyasını böyütməyi planlaşdırırsınızsa, bərk-maye nisbətlərini və bütün digər parametrləri sabit saxlayaraq partiyanın həcmini artırmağı tövsiyə edirik. Eyni ultrasəs homogenizatordan istifadə etməyə davam etsəniz, sonikasiya müddətini mütənasib olaraq artırdığınızdan əmin olun. Həcmi 1 litrdən çox olan partiyalar üçün hissəciklərin asqısını saxlamaq və ekstraksiya vahidliyini yaxşılaşdırmaq üçün yavaş qarışdırıcıdan istifadə etmək istəyə bilərsiniz. Aşağıdakı şəkildə laboratoriya qarışdırıcısı ilə birlikdə UP400St ultrasəs homogenizatorundan istifadə edən 8 litrlik partiya çıxarma qurğusu göstərilir.

Inline göbələk çıxarılması

Göbələklərdən davamlı olaraq daha böyük miqdarda beta-qlükanlar çıxarmaqda maraqlı olanlar üçün Hielscher Ultrasonics botanika materialının çıxarılması üçün nəzərdə tutulmuş axın hüceyrə reaktorlarını təklif edir. Bu sizə aiddirsə, əlavə məlumat üçün birbaşa bizimlə əlaqə saxlamağınızı tövsiyə edirik. Texniki komandamız sizin xüsusi ehtiyaclarınız üçün ən uyğun quraşdırmanın müəyyən edilməsində kömək etməkdən məmnun olacaq. Bununla belə, xüsusi göbələk növlərinizlə əvvəllər qeyd olunan laboratoriya miqyaslı təcrübənin aparılması dəqiq proses tələblərini başa düşmək üçün əvəzolunmaz ola bilər. Aşağıdakı şəkildə saatda təxminən 50-200 litr göbələk həlledici şlamında beta-qlükanlar çıxarmaq üçün UIP4000hdT ultrasəs homogenizatoru olan böyük axın hüceyrə reaktoru göstərilir.

Göbələk Növlərinin Empirik Beta-Qlukan Konsentrasiyası

Aşağıda müxtəlif göbələk növlərindən çıxarılan empirik beta-qlükan konsentrasiyasının siyahısını tapa bilərsiniz.

Göbələk növləri	Cəmi 1,3-1,6-β-D-qlükan (q/100q quru kütlə)
Boletus pinophilus	9,8%
Suillus granulatus	13,3%
Craterellus cornucopioides	4,5%
Suillus variegatus	13,7%
Hydnum repandumu	4,1%
Gyroporus cyanescens	14,3%
Tricholomopsis rutilans	10,2%
Agaricus bisporus (portobello)	4%
Agaricus bisporus (cremini)	4%
Auricularia auricular-judae	16,8%

Təhlil edilən yabanı və becərilən göbələklərdə 1,3-1,6-β-D-qlükan tərkibi, Mənbə:Mirończuk-Chodakowska et al. (2017): Yeməli Polşa Göbələklərinin Yabanı Yetişən Növlərində 1,3-1,6-Β-D-Qlukan Tərkibinin Kəmiyyət Qiymətləndirilməsi. Rocz Panstw Zakl Hig 2017;68(3):281-290.