Ултразвучна припрема узорака за анализу THC
- Ултразвучна екстракција је доказана метода за производњу THC, али се може користити и у аналитичке сврхе.
- Ултразвучна обрада је уобичајена метода припреме узорака која се користи за анализу укупног садржаја THC у производима од канабиса.
- Ултразвучна екстракција се примењује на узорке пре TLC, GC и HPLC анализе.
Ултразвучна екстракција THC
THC, односно тетрахидроканабинол (делта-9-тетрахидроканабинол), јесте хемијско једињење које изазива већину психолошких ефеката марихуане. Познато је више од 400 различитих сојева канабиса. У зависности од конкретног соја, канабис може садржати свега 0,3 wt% THC. Код других сојева садржај THC може достићи и до 20 wt%.
И различити производи од канабиса знатно се разликују: просечна концентрација THC у марихуани креће се од 1 до 5%; у хашишу садржај THC износи од 5 до 15%, а у хашишовом уљу у просеку износи 20%. Количина THC у дозама марихуане за рекреативну употребу веома је променљива, а што је садржај THC у марихуани нижи, корисник мора да конзумира већу количину да би осетио жељене ефекте.
Ултразвучна припрема узорака користи се за анализу садржаја THC
- ради контроле квалитета производа са THC за рекреативну употребу,
- ради одређивања квалитета фармацеутских производа са THC,
- ради разликовања конопље за производњу дроге и конопље за производњу влакана.
За анализу THC обично се користе следеће хроматографске методе: танкослојна хроматографија (TLC), гасна хроматографија (GC) и течна хроматографија високих перформанси (HPLC)
Протокол ултразвучне припреме узорака за TLC анализу
Припрема узорака: За припрему узорака, осушени биљни материјал мора се мацерирати и самлети у хомоген прах. За ултразвучну екстракцију, у бочици се мешају 500mg праха биљке канабиса и 5mL смеше метанола и хлороформа (однос 9 : 1). Соникација се може спровести помоћу ултразвучног уређаја са микроврхом, уређаја VialTweeter или ултразвучног уређаја CupHorn. Соникација траје приближно 5 min. Након тога оставите узорак да мирује најмање 5 min. Разблажите бистри супернатант екстракционом смешом (v/v: 1 : 10). Слободни THC: 1μL на TLC плочу
Декарбоксилација: 100μL екстракта се упарава до сува. Остатак се загрева на 180℃ током 4 min. Додајте 500μL смеше метанола и хлороформа (v/v 9 : 1). Соницирајте 5 min. Разблажите бистри супернатант екстракционом смешом (v/v: 1 : 10).
Калибрација: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
TLC силика-гел F-254, Merck 5729
TLC скенер II, софтвер CATS3, Camag Muttenz Елуент:
Етилацетат : толуен : хлороформ = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Постхроматографска дериватизација: со Fast Blue 0,1% у 0,1 M NaOH
Дензитометрија на 550 nm
Тетрахидроканабинол (Δ9-THC) за анализу и екстракцију
Протокол ултразвучне припреме узорака за GC анализу
Припрема узорака: Осушени биљни материјал се мацерира и меље у хомоген прах. За екстракцију, у бочици се мешају 500mg праха биљке канабиса и 10mL смеше метанола и хексана (однос 9 : 1). Соникација се може спровести помоћу ултразвучног уређаја са сондом са микроврхом, уређаја VialTweeter или ултразвучног уређаја CupHorn. Соницирајте узорак 15–20 min. Промућкајте узорак и оставите га да мирује најмање 5 min. Разблажите бистри супернатант екстракционом смешом (v/v 1: 20).
Декарбоксилација: у уметку
Температура инјектора 250℃
Калибрација: од 5 ng/μL до 250 ng/μL
GC: HP 6890 са 5973 MSD и аутоматским узоркивачем 7683; инјектирање: 1μL, време без поделе тока: 2 min.
Колона: HP-5 MS, 30m, пречник 250 μm, дебљина филма 0,25 μm
Гас носилац: He, 35 psi, константан проток: 4 mL/min.
Пећ: 100℃ током 1min.; пораст температуре од 15℃ /min. до 280℃; 280℃ током 5 min. MSD: СКЕНИРАЊЕ: m/e 35 – 550
Протокол ултразвучне припреме узорака за HPLC анализу
Припрема узорака (аналогно припреми за GC): Осушени биљни материјал се мацерира и меље у хомоген прах. За екстракцију, у бочици се мешају 500mg праха биљке канабиса и 10mL смеше метанола и хексана (однос 9 : 1). Соникација се може спровести помоћу ултразвучног уређаја са сондом са микроврхом, уређаја VialTweeter или ултразвучног уређаја CupHorn. Соницирајте узорак 15–20 min. Промућкајте узорак и оставите га да мирује најмање 5 min. Разблажите бистри супернатант екстракционом смешом (v/v 1: 20).
VialTweeter за ултразвучну припрему узорака
Предколона: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Колона: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Елуент: изократски 36% TEAP 25 mmol/L, 64% ацетонитрила; квантификација на 210nm
Калибрација: 0,001 – 0,10 μg/μL
Калибрација: 0,01 – 0,50 μg/μL
Ретенционо време: за CBD: 6,2 min.; за CBN: 8,0 min.; за THC: 9,4 min.; за THC-A: 11,0 min
LOD: CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St са микроврхом за соникацију узорака
Литература/Референце
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Форензичко-хемијске анализе биљног материјала конопље који садржи THC. Од танкослојне хроматографије преко GC до HPLC методе. Applica 2006.
Корисне чињенице
Марихуана се састоји од осушених цветова и листова и стабљика испод њих са женске биљке канабиса. То је најчешће конзумиран облик и садржи приближно 3% до 20% THC. Посебни облици марихуане добијени интензивном селекцијом достижу садржај THC већи од 30%. Марихуана је полазни материјал за све друге врсте производа од канабиса који садрже THC. Да би се најзаступљенији канабиноид, тетрахидроканабинолна киселина (THCA), претворио у психоактивни THC, мора се покренути процес декарбоксилације. Због тога се канабис и његови екстракти морају загрејати или дехидрирати како би дошло до декарбоксилације.
Киф означава прах богат трихомима, који се издваја просејавањем листова и цветова канабиса. Конзумира се у облику праха или се пресује и користи у погачама хашиша.
Хашиш или хаш представља погачу или куглицу концентроване смоле, која се производи од пресованог кифа или од смоле која се струже са површине биљке и обликује у куглице. Јавља се у различитим бојама, од црне до златносмеђе, у зависности од чистоће и порекла. Може се конзумирати орално или пушити, нпр. у лули, наргили, бонгу, воденој лули са мехурићима, испаривачу, помоћу врелог ножа, у џоинтима, помешан са цветовима канабиса или дуваном, удисањем дима из боце или се користити као састојак хране.
Тинктура канабиса означава екстракт канабиноида у алкохолу. Канабиноиди се екстрахују из биљке канабиса коришћењем алкохолних дестилата високе јачине (углавном алкохола од житарица) да би се добила тинктура.
Хашишово уље је смоласта матрица канабиноида добијена екстракцијом растварачем, у облику очврсле или вискозне масе. Хашишово уље је један од најпотентнијих производа од канабиса због високог садржаја психоактивног једињења. Употреба хашишовог уља екстрахованог бутаном и суперкритичним угљен-диоксидом у последње време постаје све популарнија.
Инфузије означавају различите врсте инфузија канабиса које се међусобно разликују по широком избору неиспарљивих растварача који се могу користити за њихову производњу. Да би се припремила таква инфузија, биљни материјал канабиса меша се са растварачем, а затим пресује и филтрира како би се уља из биљке пренела у растварач. Какао-маслац, млечни маслац, јестиво уље, глицерин и хидратантна средства за кожу често се користе као растварачи.
Медицинска марихуана означава употребу биљке канабиса као биљне терапије по препоруци лекара, као и употребу синтетичког THC и канабиноида. За овакву употребу углавном је потребан рецепт, а дистрибуција се обично одвија у оквиру дефинисаном локалним законима. Неколико истраживачких студија показало је да употреба канабиса или његових деривата делује против, на пример, мучнине и повраћања изазваних хемиотерапијом, неуропатског бола и мултипле склерозе.