Ultrazvuková príprava vzoriek na analýzu THC
- Ultrazvuková extrakcia je osvedčenou metódou získavania THC, možno ju však použiť aj na analytické účely.
- Ultrazvukové spracovanie je bežnou metódou prípravy vzoriek používanou na analýzu celkového obsahu THC v konopných produktoch.
- Vzorky sa pred analýzou TLC, GC a HPLC podrobujú ultrazvukovej extrakcii.
Ultrazvuková extrakcia THC
THC čiže tetrahydrokanabinol (delta-9-tetrahydrokanabinol) je chemická látka, ktorá spôsobuje väčšinu psychických účinkov marihuany. V rámci konopy je známych viac ako 400 rôznych odrôd. V závislosti od konkrétnej odrody môže konopa obsahovať len 0,3 hmotn. % THC. V iných odrodách môže obsah THC dosiahnuť až 20 hmotn. %.
Výrazne sa líšia aj jednotlivé konopné produkty: priemerná koncentrácia THC v marihuane sa pohybuje od 1 do 5 %; v hašiši je obsah THC od 5 do 15 % a v hašišovom oleji dosahuje v priemere 20 %. Množstvo THC v rekreačných dávkach marihuany je veľmi premenlivé a čím nižší je obsah THC v marihuane, tým viac jej musí používateľ skonzumovať, aby dosiahol požadované účinky.
Ultrazvuková príprava vzoriek sa používa na analýzu obsahu THC
- pri kontrole kvality rekreačných produktov s THC,
- pri určovaní kvality farmaceutických produktov s THC,
- pri rozlišovaní konopy na drogové účely a konopy na získavanie vlákna.
Na analýzu THC sa bežne používajú tieto chromatografické metódy: tenkovrstvová chromatografia (TLC), plynová chromatografia (GC) a vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC)
Postup ultrazvukovej prípravy vzoriek na analýzu TLC
Príprava vzoriek: Pri príprave vzoriek sa musí vysušený rastlinný materiál macerovať a pomlieť na homogénny prášok. Na ultrazvukovú extrakciu sa vo vialke zmieša 500mg prášku z konopy a 5mL zmesi metanolu a chloroformu (v pomere 9 : 1). Sonikáciu možno vykonať pomocou ultrazvukového homogenizátora s mikrohrotom, zariadenia VialTweeter alebo ultrazvukového zariadenia CupHorn. Sonikácia trvá približne 5 min. Potom nechajte vzorku stáť aspoň 5 min. Číry supernatant zrieďte extrakčnou zmesou (v/v: 1 : 10). Voľný THC: 1μL na TLC platňu
Dekarboxylácia: 100μL extraktu sa odparí do sucha. Zvyšok sa zahrieva pri 180℃ počas 4 min. Pridajte 500μL zmesi metanolu a chloroformu (v/v 9 : 1). Sonikujte 5 min. Číry supernatant zrieďte extrakčnou zmesou (v/v: 1 : 10).
Kalibrácia: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
TLC silikagél F-254, Merck 5729
TLC skener II, softvér CATS3, Camag Muttenz Eluent:
Etylacetát : toluén : chloroform = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Postchromatografická derivatizácia: soľ Fast Blue 0,1% v 0,1 M NaOH
Denzitometria pri 550 nm
Tetrahydrokanabinol (Δ9-THC) na analýzu a extrakciu
Postup ultrazvukovej prípravy vzoriek na analýzu GC
Príprava vzoriek: Vysušený rastlinný materiál sa maceruje a pomelie na homogénny prášok. Na extrakciu sa vo vialke zmieša 500mg prášku z konopy a 10mL zmesi metanolu a hexánu (v pomere 9 : 1). Sonikáciu možno vykonať pomocou sondového ultrazvukového zariadenia s mikrohrotom, zariadenia VialTweeter alebo ultrazvukového zariadenia CupHorn. Vzorku sonikujte 15–20 min. Vzorku pretrepte a nechajte ju stáť aspoň 5 min. Číry supernatant zrieďte extrakčnou zmesou (v/v 1: 20).
Dekarboxylácia: vo vložke
Teplota injektora 250℃
Kalibrácia: 5 ng/μL až 250 ng/μL
GC: HP 6890 s 5973 MSD a automatickým dávkovačom vzoriek 7683, nástrek: 1μL, čas bez delenia toku: 2 min.
Kolóna: HP-5 MS, 30m, priemer 250 μm, hrúbka filmu 0,25 μm
Nosný plyn: He, 35 psi, konštantný prietok: 4 mL/min.
Pec: 100℃ počas 1min.; zvyšovanie teploty o 15℃ /min. na 280℃; 280℃ počas 5 min. MSD: SCAN: m/e 35 – 550
Postup ultrazvukovej prípravy vzoriek na analýzu HPLC
Príprava vzoriek (obdobne ako pri príprave na GC): Vysušený rastlinný materiál sa maceruje a pomelie na homogénny prášok. Na extrakciu sa vo vialke zmieša 500mg prášku z konopy a 10mL zmesi metanolu a hexánu (v pomere 9 : 1). Sonikáciu možno vykonať pomocou sondového ultrazvukového homogenizátora s mikrohrotom, zariadenia VialTweeter alebo ultrazvukového zariadenia CupHorn. Vzorku sonikujte 15–20 min. Vzorku pretrepte a nechajte ju stáť aspoň 5 min. Číry supernatant zrieďte extrakčnou zmesou (v/v 1: 20).
VialTweeter na ultrazvukovú prípravu vzoriek
Predkolóna: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Kolóna: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Eluent: izokraticky 36% TEAP 25 mmol/L, 64% acetonitrilu, kvantifikácia pri 210nm
Kalibrácia: 0,001 – 0,10 μg/μL
Kalibrácia: 0,01 – 0,50 μg/μL
Retenčný čas: pre CBD: 6,2 min.; pre CBN: 8,0 min.; pre THC: 9,4 min.; pre THC-A: 11,0 min
LOD: CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St s mikrohrotom na sonikáciu vzoriek
Literatúra/Referencie
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Forensisch chemische Analysen von THC haltigem Hanfkraut. Von der DC via GC zur HPLC-Methode. Applica 2006.
Užitočné informácie
Marihuana pozostáva zo sušených kvetov a pod nimi vyrastajúcich listov a stoniek samičej rastliny konopy. Ide o najrozšírenejšiu formu konzumácie a obsahuje približne 3 % až 20 % THC. Špecifické, intenzívne šľachtené formy marihuany dosahujú obsah THC vyšší ako 30 %. Marihuana je východiskovým materiálom pre všetky ostatné druhy konopných produktov obsahujúcich THC. Na premenu najhojnejšie zastúpeného kanabinoidu, kyseliny tetrahydrokanabinolovej (THCA), na psychoaktívny THC sa musí iniciovať proces dekarboxylácie. Preto sa konopa a jej extrakty musia zahriať alebo dehydratovať, aby došlo k dekarboxylácii.
Kief označuje prášok bohatý na trichómy, ktorý sa získava preosievaním listov a kvetov konopy. Konzumuje sa buď vo forme prášku, alebo sa lisuje a používa na výrobu hašišových plátov.
Hašiš čiže hash je koncentrovaná živica vo forme plátu alebo guľôčky, ktorá sa vyrába buď z lisovaného kiefu, alebo zo živice zoškrabanej z povrchu rastliny a vytvarovanej do guľôčok. Vyskytuje sa v rôznych farbách od čiernej po zlatohnedú v závislosti od čistoty a pôvodu. Môže sa konzumovať ústami alebo fajčiť, napríklad vo fajke, vodnej fajke, bongu, malej vodnej fajke typu bubbler, vaporizéri, pomocou horúceho noža, v jointoch, zmiešaný s konopnými kvetmi alebo tabakom, vdychovaním dymu zachyteného vo fľaši alebo sa môže používať ako prísada do jedál.
Konopná tinktúra označuje extrakt kanabinoidov v alkohole. Na výrobu tinktúry sa kanabinoidy extrahujú z konopy pomocou liehovín s vysokým obsahom alkoholu (väčšinou obilného liehu).
Hašišový olej je živicová matrica kanabinoidov získaná extrakciou rozpúšťadlom, ktorá tvorí stuhnutú alebo viskóznu hmotu. Hašišový olej patrí pre svoj vysoký obsah psychoaktívnej látky medzi najúčinnejšie konopné produkty. Používanie hašišového oleja extrahovaného butánom a superkritickým oxidom uhličitým si v poslednom čase získava čoraz väčšiu obľubu.
Výluhy označujú rôzne druhy konopných výluhov, ktoré sa navzájom líšia širokou škálou neprchavých rozpúšťadiel použiteľných na ich výrobu. Na prípravu takéhoto výluhu sa rastlinný materiál konopy zmieša s rozpúšťadlom a potom sa lisuje a filtruje, aby oleje prešli z rastliny do rozpúšťadla. Bežne používanými rozpúšťadlami sú kakaové maslo, mliečne maslo, kuchynský olej, glycerín a hydratačné prípravky na pokožku.
Liečebná marihuana označuje používanie konopy ako bylinnej liečby odporúčanej lekárom, ako aj používanie syntetického THC a kanabinoidov. Takéto použitie spravidla vyžaduje lekársky predpis a distribúcia zvyčajne prebieha v rámci vymedzenom miestnymi zákonmi. Viaceré výskumné štúdie preukázali, že používanie konopy alebo jej derivátov pôsobí napríklad proti nevoľnosti a vracaniu vyvolaným chemoterapiou, neuropatickej bolesti a skleróze multiplex.