Ultrazvuková príprava vzorky na analýzu THC
- Ultrazvuková extrakcia je osvedčená metóda na výrobu THC, ale dá sa použiť aj na analytické účely.
- Ultrazvuk je bežná metóda prípravy vzoriek používaná na analýzu celkového obsahu THC v produktoch z kanabisu.
- Ultrazvuková extrakcia sa aplikuje na vzorky pred analýzou TLC, GC a HPLC.
Ultrazvuková extrakcia THC
THC alebo tetrahydrokanabinol (delta-9-tetrahydrokanabinol) je chemická látka, ktorá spôsobuje väčšinu psychologických účinkov marihuany. Pre druhy konope môže byť známych viac ako 400 rôznych kmeňov. V závislosti od konkrétneho kmeňa kanabisu môže mať kanabis len 0,3 hm. % THC. V iných kmeňoch môže obsah THC dosiahnuť až 20 hm.
Tiež rôzne produkty z kanabisu sa výrazne líšia: Priemerná koncentrácia THC v marihuane sa teda pohybuje medzi 1 až 5 %; v hašiši je obsah THC medzi 5 až 15% a v hašišovom oleji je to v priemere 20%. THC v rekreačných dávkach marihuany je veľmi variabilné a čím nižší je obsah THC v marihuane, tým viac musí užívateľ konzumovať, aby zažil požadované účinky.
Ultrazvuková príprava vzorky sa používa na analýzu obsahu THC
- na kontrolu kvality rekreačných produktov THC,
- na stanovenie kvality farmaceutických produktov THC,
- na rozlíšenie konope a vlákniny.
Na analýzu THC sa bežne používajú tieto chromatografické metódy: chromatografia na tenkej vrstve (TLC), plynová chromatografia (GC) a vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC)
Ultrazvukový protokol prípravy vzorky na analýzu TLC
Príprava vzorky: Na prípravu vzoriek sa sušený rastlinný materiál musí macerovať a rozomlieť na homogénny prášok. Na ultrazvukovú extrakciu sa v injekčnej liekovke zmieša 500 mg prášku rastliny konope a 5 ml zmesi metanolu a chloroformu (pomer 9 : 1). Sonikáciu je možné aplikovať pomocou ultrazvuk s mikro špičkou VialTweeter alebo ultrazvukový Cuphorn. Doba sonikácie trvá cca. 5 min. Potom nechajte vzorku odpočívať aspoň 5 minút. Číry supernatant sa zriedi extrakčnou zmesou (v/v: 1 : 10). Voľné THC: 1 μl na TLC platni
Dekarboxylácia: 100 μl extraktu sa odparí do sucha. Zvyšok sa zahrieva na 180 °C počas 4 minút. Pridajte 500 μl metanolu-chloroformu (v/v 9 : 1). Sonikujte 5 min. Číry supernatant sa zriedi extrakčnou zmesou (v/v: 1 : 10).
Kalibrácia: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
TLC silikagél F-254, Merck 5729
TLC skener II, softvér CATS3, Camag Muttenz Eluens:
Etylacetát : Toluol : Chloroform = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Postchromatografická derivatizácia: rýchla modrá soľ 0,1 % v 0,1 M NaOH
Dassitometria pri 550 nm
Tetrahydrokanabinol (Δ9-THC) na analýzu a extrakciu
Protokol prípravy ultrazvukových vzoriek pre analýzu GC
Príprava vzorky: Vysušený rastlinný materiál sa maceruje a rozomelie na homogénny prášok. Na extrakciu sa v injekčnej liekovke zmieša 500 mg prášku rastliny konope a 10 ml zmesi metanolu a hexánu (pomer 9 : 1). Sonikáciu je možné aplikovať pomocou Ultrazvukové zariadenie typu sondy s mikro špičkou VialTweeter alebo ultrazvukový Cuphorn. Sonikujte vzorku 15-20 minút. Vzorku pretrepte a nechajte aspoň 5 minút odpočívať. Číry supernatant sa zriedi extrakčnou zmesou (v/v 1: 20).
Dekarboxyliácia: v vložke
Teplota vstrekovača 250 °C
Kalibrácia: 5 ng/μl až 250 ng/μl
GC: HP 6890 s 5973 MSD a vstrekovaním automatického podávača vzoriek 7683: 1 μl, čas bez rozdelenia: 2 min.
Stĺpec: HP-5 MS, 30 m, priemer 250 μm, hrúbka filmu 0,25 μm
Nosný plyn: He, 35 psi, konštantný prietok: 4 ml/min.
Rúra: 100 °C po dobu 1 min.; zvýšenie teploty o 15 °C /min. až 280 °C; 280 °C počas 5 min. MSD: SCAN: m/e 35 – 550
Ultrazvukový protokol prípravy vzoriek pre analýzu HPLC
Príprava vzorky (analóg prípravy GC): Vysušený rastlinný materiál sa maceruje a melie na homogénny prášok. Na extrakciu sa v injekčnej liekovke zmieša 500 mg prášku rastliny konope a 10 ml zmesi metanolu a hexánu (pomer 9 : 1). Sonikáciu je možné aplikovať pomocou ultrazvukový ultrazvuk typu sondy s mikro špičkou VialTweeter alebo ultrazvukový Cuphorn. Sonikujte vzorku 15-20 minút. Vzorku pretrepte a nechajte aspoň 5 minút odpočívať. Číry supernatant sa zriedi extrakčnou zmesou (v/v 1: 20).
VialTweeter na ultrazvukovú prípravu vzoriek
Predstĺpec: LiChrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50963)
Stĺpec: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Eluent: izokratická 36% TEAP 25 mmol/l, 64% acetonitrilová kvantifikácia pri 210nm
Kalibrácia: 0,001 – 0,10 μg/μl
Kalibrácia: 0,01 – 0,50 μg/μl
Retenčná doba: pre CBD: 6,2 min.; pre CBN: 8,0 min.; pre THC: 9,4 min.; pre THC-A: 11,0 min
LOD: CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St s mikrohrotom na sonikáciu vzoriek
Literatúra/Referencie
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Forensisch chemische Analysen von THC haltigem Hanfkraut. Von der DC via GC zur HPLC-Methode. Aplikácia 2006.
Fakty, ktoré stoja za to vedieť
marihuana pozostáva zo sušených kvetov a podľahlých listov a stoniek samičej rastliny konope. Ide o najrozšírenejšiu formu a obsahuje približne 3 % až 20 % THC. Špecifické, vysoko vyšľachtené formy marihuany dosahujú obsah THC viac ako 30 %. Marihuana je východiskovým materiálom všetkých ostatných odrôd konopného produktu obsahujúceho THC. Na premenu najrozšírenejšieho kanabinoidu, kyseliny tetrahydrokanabinolovej (THCA), na psychoaktívne THC, je potrebné začať proces dekarbiolizácie. Preto sa konope a jeho extrakty musia zahriať alebo dehydratovať, aby sa spôsobila dekarboxylácia.
Kief Vzťahuje sa na prášok bohatý na trichómy, ktorý sa preosieva z listov a kvetov konope. Konzumuje sa buď v práškovej forme alebo lisovaný a používa sa do hašišových koláčov.
hašiš alebo hash je koncentrovaný živicový koláč alebo guľa, ktorá sa vyrába buď z lisovaného kiefu, alebo zo živice, ktorá sa zoškrabe z povrchu rastliny a zvinie do guľôčok. Vyskytuje sa v rôznych farbách od čiernej po zlatohnedú v závislosti od čistoty a zdroja. Môže sa konzumovať perorálne alebo fajčiť, napr. v fajke, vodnej fajke, bongu, bubblere, vaporizéri, pomocou horúceho noža, údiť v kĺboch, zmiešať s púčikmi kanabisu alebo tabakom, údiť ako toky z fliaš alebo použiť ako prísada do potravín.
Konopná tinktúra Vzťahuje sa na extrakt kanabinoidov v alkohole. Kanabinoidy sa extrahujú z rastliny konope pomocou vysoko odolných liehovín (väčšinou obilného alkoholu) na vytvorenie tinktúry.
hašišový olej je živicová matrica kanabinoidov vyrobená extrakciou rozpúšťadlom, formovaná do stvrdnutej alebo viskóznej hmoty. Hašišový olej je jedným z najúčinnejších kanabisových produktov vďaka vysokej hladine psychoaktívnych zlúčenín. Používanie hašišového oleja extrahovaného v butáne a superkritickom oxide uhličitom si v poslednej dobe získava čoraz väčšiu popularitu.
Infúzie Odkazujú na rôzne druhy nálevov z kanabisu, ktoré sa navzájom líšia širokou škálou neprchavých rozpúšťadiel, ktoré možno použiť na výrobu infúzie kanabisu. Na prípravu takejto infúzie sa rastlinná hmota kanabisu zmieša s rozpúšťadlom a potom sa lisuje a filtruje, aby sa oleje z rastliny preniesli do rozpúšťadla. Kakaové maslo, mliečne maslo, kuchynský olej, glycerín a zvlhčovače pokožky sú bežne používané rozpúšťadlá.
Lekárska marihuana odkazuje na použitie rastliny konope ako bylinnej terapie odporúčanej lekárom, ako aj syntetického THC a kanabinoidov. Toto použitie vo všeobecnosti vyžaduje lekársky predpis a distribúcia sa zvyčajne uskutočňuje v rámci definovanom miestnymi zákonmi. Niekoľko výskumných štúdií ukázalo, že užívanie kanabisu alebo jeho derivátov pôsobí napr. proti nevoľnosti a zvracaniu vyvolanému chemoterapiou, neuropatickej bolesti a roztrúsenej skleróze.