Paraugu sagatavošana ar ultraskaņu THC analīzei
- Ultraskaņas ekstrakcija ir pārbaudīta metode THC iegūšanai, taču to var izmantot arī analītiskiem mērķiem.
- Apstrāde ar ultraskaņu ir izplatīta paraugu sagatavošanas metode, ko izmanto kopējā THC satura analīzei kaņepju produktos.
- Paraugus ekstrahē ar ultraskaņu pirms TLC, GC un HPLC analīzes.
THC ekstrakcija ar ultraskaņu
THC jeb tetrahidrokanabinols (delta-9-tetrahidrokanabinols) ir ķīmiskā viela, kas izraisa lielāko daļu marihuānas psiholoģiskās iedarbības. Kaņepēm ir zināmas vairāk nekā 400 dažādas šķirnes. Atkarībā no konkrētās kaņepju šķirnes THC saturs kaņepēs var būt tikai 0,3 wt%. Citās šķirnēs THC saturs var sasniegt līdz pat 20 wt%.
Arī dažādi kaņepju produkti būtiski atšķiras: vidējā THC koncentrācija marihuānā ir no 1 līdz 5%; hašišā THC saturs ir no 5 līdz 15%, bet hašiša eļļā tas vidēji ir 20%. THC saturs marihuānas devās, ko lieto izklaides nolūkos, ir ļoti mainīgs, un, jo zemāks ir THC saturs marihuānā, jo vairāk lietotājam tās jāpatērē, lai izjustu vēlamo iedarbību.
Paraugu sagatavošanu ar ultraskaņu izmanto THC satura analīzei
- izklaides nolūkiem paredzētu THC produktu kvalitātes kontrolei,
- farmaceitisko THC produktu kvalitātes noteikšanai,
- narkotisko kaņepju un šķiedras kaņepju atšķiršanai.
THC analīzei parasti izmanto šādas hromatogrāfijas metodes: plānslāņa hromatogrāfiju (TLC), gāzu hromatogrāfiju (GC) un augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju (HPLC)
Paraugu sagatavošanas protokols ar ultraskaņu TLC analīzei
Paraugu sagatavošana: lai sagatavotu paraugus, žāvētais augu materiāls jāmacerē un jāsamaļ viendabīgā pulverī. Ekstrakcijai ar ultraskaņu flakonā sajauc 500mg kaņepju auga pulvera un 5mL metanola un hloroforma maisījuma (attiecībā 9 : 1). Apstrādi ar ultraskaņu var veikt, izmantojot ultraskaņas apstrādes ierīci ar mikrouzgali, VialTweeter vai ultraskaņas ierīci CupHorn. Apstrāde ar ultraskaņu ilgst aptuveni 5 min. Pēc tam ļaujiet paraugam nostāvēties vismaz 5 min. Dzidro supernatantu atšķaidiet ar ekstrakcijas maisījumu (v/v: 1 : 10). Brīvais THC: 1μL uz TLC plāksnītes
Dekarboksilēšana: 100μL ekstrakta ietvaicē līdz sausam atlikumam. Atlikumu karsē 180℃ temperatūrā 4 min. Pievienojiet 500μL metanola un hloroforma maisījuma (v/v 9 : 1). Apstrādājiet ar ultraskaņu 5 min. Dzidro supernatantu atšķaidiet ar ekstrakcijas maisījumu (v/v: 1 : 10).
Kalibrēšana: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
TLC silikagels F-254, Merck 5729
TLC skeneris II, programmatūra CATS3, Camag Muttenz Eluents:
Etilacetāts : toluols : hloroforms = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Pēchromatogrāfiskā derivatizācija: Fast Blue sāls 0,1% šķīdumā 0,1 M NaOH
Densitometrija pie 550 nm
Tetrahidrokanabinols (Δ9-THC) analīzei un ekstrakcijai
Paraugu sagatavošanas protokols ar ultraskaņu GC analīzei
Paraugu sagatavošana: žāvēto augu materiālu macerē un samaļ viendabīgā pulverī. Ekstrakcijai flakonā sajauc 500mg kaņepju auga pulvera un 10mL metanola un heksāna maisījuma (attiecībā 9 : 1). Apstrādi ar ultraskaņu var veikt, izmantojot zondes tipa ultraskaņas ierīci ar mikrouzgali, VialTweeter vai ultraskaņas ierīci CupHorn. Apstrādājiet paraugu ar ultraskaņu 15–20 min. Sakratiet paraugu un ļaujiet tam nostāvēties vismaz 5 min. Dzidro supernatantu atšķaidiet ar ekstrakcijas maisījumu (v/v 1: 20).
Dekarboksilēšana: ieliktnī
Inžektora temperatūra 250℃
Kalibrēšana: no 5 ng/μL līdz 250 ng/μL
GC: HP 6890 ar 5973 MSD un 7683 automātisko paraugu padevēju; injekcija: 1μL, laiks bez plūsmas dalīšanas: 2 min.
Kolonna: HP-5 MS, 30m, diametrs 250 μm, plēves biezums 0,25 μm
Nesējgāze: He, 35 psi, nemainīgs plūsmas ātrums: 4 mL/min.
Krāsns: 100℃ 1min.; temperatūras paaugstināšana par 15℃ /min. līdz 280℃; 280℃ 5 min. MSD: SCAN: m/e 35 – 550
Paraugu sagatavošanas protokols ar ultraskaņu HPLC analīzei
Paraugu sagatavošana (analoģiski sagatavošanai GC analīzei): žāvēto augu materiālu macerē un samaļ viendabīgā pulverī. Ekstrakcijai flakonā sajauc 500mg kaņepju auga pulvera un 10mL metanola un heksāna maisījuma (attiecībā 9 : 1). Apstrādi ar ultraskaņu var veikt, izmantojot zondes tipa ultraskaņas apstrādes ierīci ar mikrouzgali, VialTweeter vai ultraskaņas ierīci CupHorn. Apstrādājiet paraugu ar ultraskaņu 15–20 min. Sakratiet paraugu un ļaujiet tam nostāvēties vismaz 5 min. Dzidro supernatantu atšķaidiet ar ekstrakcijas maisījumu (v/v 1: 20).
VialTweeter paraugu sagatavošanai ar ultraskaņu
Priekškolonna: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Kolonna: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Eluents: izokrātiski 36% TEAP 25 mmol/L, 64% acetonitrila; kvantitatīvā noteikšana pie 210nm
Kalibrēšana: 0,001 – 0,10 μg/μL
Kalibrēšana: 0,01 – 0,50 μg/μL
Aiztures laiks: CBD: 6,2 min.; CBN: 8,0 min.; THC: 9,4 min.; THC-A: 11,0 min
Noteikšanas robeža (LOD): CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St ar mikrouzgali paraugu apstrādei ar ultraskaņu
Literatūra/atsauces
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): THC saturošu kaņepju lakstu tiesu ķīmiskās analīzes. No plānslāņa hromatogrāfijas caur GC līdz HPLC metodei. Applica 2006.
Noderīgi fakti
Marihuāna sastāv no sievišķā kaņepju auga žāvētiem ziediem un zem tiem esošajām lapām un stublājiem. Šis ir visplašāk patērētais veids, un tas satur aptuveni 3% līdz 20% THC. Īpašās, intensīvi selekcionētās marihuānas formās THC saturs pārsniedz 30%. Marihuāna ir izejmateriāls visiem pārējiem THC saturošu kaņepju produktu veidiem. Lai visvairāk sastopamo kanabinoīdu – tetrahidrokanabinolskābi (THCA) – pārvērstu psihoaktīvajā THC, jāierosina dekarboksilēšanas process. Tādēļ kaņepes un to ekstrakti jākarsē vai jādehidratē, lai izraisītu dekarboksilēšanu.
Kīfs ir ar trihomiem bagāts pulveris, ko izsijā no kaņepju lapām un ziediem. To lieto pulvera veidā vai sapresē un izmanto hašiša plācenīšos.
Hašišs jeb hašs ir koncentrētu sveķu plācenītis vai lodīte, ko iegūst vai nu no presēta kīfa, vai no sveķiem, kurus nokasa no auga virsmas un saveļ lodītēs. Atkarībā no tīrības un izcelsmes tā krāsa var būt no melnas līdz zeltaini brūnai. To var lietot iekšķīgi vai smēķēt, piemēram, pīpē, ūdenspīpē, bongā, ūdens filtrācijas pīpē, iztvaicētājā, izmantojot sakarsētu nazi, tītajās cigaretēs, sajauktu ar kaņepju ziedkopām vai tabaku, ieelpot dūmus no pudeles vai izmantot kā pārtikas sastāvdaļu.
Kaņepju tinktūra ir kanabinoīdu ekstrakts spirtā. Lai iegūtu tinktūru, kanabinoīdus no kaņepju auga ekstrahē, izmantojot augstas stiprības spirtu (galvenokārt graudu spirtu).
Hašiša eļļa ir sveķaina kanabinoīdu matrica, ko iegūst ar šķīdinātāja ekstrakciju un izveido sacietējušā vai viskozā masā. Hašiša eļļa ir viens no spēcīgākajiem kaņepju produktiem, jo tajā ir augsts psihoaktīvā savienojuma saturs. Ar butānu un superkritisko oglekļa dioksīdu ekstrahētas hašiša eļļas lietošana pēdējā laikā kļūst arvien populārāka.
Izvilkumi ir dažādi kaņepju izvilkumu veidi, kas savstarpēji atšķiras ar plašo negaistošo šķīdinātāju klāstu, ko var izmantot kaņepju izvilkuma iegūšanai. Lai sagatavotu šādu izvilkumu, kaņepju auga materiālu sajauc ar šķīdinātāju un pēc tam presē un filtrē, lai eļļas no auga pārietu šķīdinātājā. Bieži izmantoti šķīdinātāji ir kakao sviests, piena sviests, pārtikas eļļa, glicerīns un ādas mitrināšanas līdzekļi.
Medicīniskā marihuāna apzīmē kaņepju auga izmantošanu ārsta ieteiktā augu terapijā, kā arī sintētiskā THC un kanabinoīdu lietošanu. Šādai lietošanai parasti ir nepieciešama recepte, un izplatīšana parasti notiek vietējos tiesību aktos noteiktajā kārtībā. Vairāki pētījumi ir parādījuši, ka kaņepju vai to atvasinājumu lietošana iedarbojas pret, piemēram, ķīmijterapijas izraisītu sliktu dūšu un vemšanu, neiropātiskām sāpēm un multiplo sklerozi.