Beta-glikānu ekstrakcija no sēnēm, izmantojot ultrasonication

Beta-glikānu ekstrakcija no sēnēm laboratorijas testēšanas vai ražošanas nolūkos ietver sēņu sasmalcināšanas, sasmalcināšanas vai sasmalcināšanas kombināciju, ultrasoniski atbalstītu ekstrakciju un beta-glikānu nogulsnēšanu. Šeit ir vienkāršots beta-glikāna ekstrakcijas procesa izklāsts, kā arī piemēri apjomiem un svariem laboratorijas mēroga eksperimentam. Lūdzu, ņemiet vērā, ka īpašie apstākļi un mērījumi var atšķirties atkarībā no sēņu veida un nepieciešamās beta-glikāna tīrības.

Materiāli un aprīkojums

• Sēnes (piemēram, 100g sasmalcinātu vai sagrieztu sēņu)
• Auksti destilēts ūdens (piemēram, 500mL)
• Blenderis vai dzirnaviņas
• Stikla vārglāzes vai kolbas
• Filtrpapīrs vai vakuumfiltrēšanas iestatīšana
• Centrifūga (pēc izvēles)
• Spirts (piemēram, etanols) nogulsnēšanai
• Ledusskapis
• Žāvēšanas skapis

Beta-glikāna ekstrakcijas protokols

1. Sēnes sasmalcina vai sasmalcina (piemēram, Čaga vai Lauva’ Mane sēne) rupjās daļiņās, kuru izmērs ir aptuveni 1 līdz 3 milimetri. Piemēram, izmantojiet 100 g žāvētu sēņu daļiņu.
2. Tad sēņu daļiņas pievieno stikla vārglāzē vai kolbā.
3. Pēc tam vārglāzē pievieno 500 ml destilēta ūdens, kas satur ekstrahējamās sēņu daļiņas. Ūdens un sēņu attiecība var atšķirties atkarībā no konkrētā sēņu veida un daļiņu lieluma.
4. Pēc tam, kad esat sajaucis vircu, apstrādājiet maisījumu ar ultraskaņu, izmantojot ultraskaņas laboratorijas homogenizatoru (piemēram, UP400St ar 22 mm sonotrode 100% amplitūdā vai UP200Ht ar 14 mm sonotrodu 100% amplitūdā) un uzturiet temperatūru zem 90 ° C. Zemākas temperatūras palīdz saglabāt siltumjutīgus savienojumus, piemēram, beta-glikānus ekstrakcijas laikā. Sonicate apmēram 5 līdz 10 minūtes, lietojot UP400St un 10 līdz minūtes, ja izmantojat UP200Ht. Lūdzu, ņemiet vērā, ka temperatūra un ekstrakcijas laiks var atšķirties atkarībā no izmantotās ultraskaņas jaudas. Protams, lielākiem apjomiem būs nepieciešams ilgāks ultraskaņas apstrādes laiks.
5. Filtrējiet sonikēto maisījumu caur filtrpapīru vai izmantojiet vakuuma filtrēšanas iestatījumu, lai atdalītu šķidrumu (kas satur ekstrahētos beta-glikānus) no cietā sēņu atlikuma.
6. Pēc tam izgulsnējiet beta-glikānus no šķidruma, pievienojot spirtu (piemēram, etanolu). Parasti nokrišņiem var izmantot 2-3 tilpumus alkohola.
7. Pēc tam maisījumu vairākas stundas uzglabājiet ledusskapī, lai beta-glikāni varētu nogulsnēties.
8. Pēc nogulsnēšanas jūs varat rūpīgi dekantēt šķidrumu un savākt beta-glikāna nogulsnes.
9. Visbeidzot, izžāvējiet beta-glikānus cepeškrāsnī zemā temperatūrā (piemēram, 40-50 ° C), līdz viss spirts tiek noņemts un jūs iegūstat sausu pulveri.

Sēnēm piemīt atšķirības to īpašībās. Tādējādi beta-glikāna ekstrakcijas process var atšķirties atkarībā no tādiem faktoriem kā konkrētas sēņu sugas, sēņu stāvoklis (žāvētas vai svaigas), daļiņu izmērs un ekstrakcijas temperatūra. Lai optimizētu ekstrakcijas procedūru, apsveriet iespēju eksperimentēt ar dažādiem parametriem, tostarp mainīt cietās un šķidrās attiecības attiecības, pielāgot temperatūru, izpētīt dažādus šķīdinātājus un pārbaudīt dažādus ultraskaņas apstrādes ilgumus un amplitūdas iestatījumus.

Ultrasoniski atbalstīta beta-glikāna fermentatīvā ekstrakcija

Ultraskaņas fermentatīvā ekstrakcija ir metode, ko izmanto, lai iegūtu beta-glikānus no sēnēm, izmantojot fermentu un ultraskaņas viļņu kombināciju. Šis process uzlabo ekstrakcijas efektivitāti, sadalot sēņu šūnu sienas un veicinot beta-glikānu izdalīšanos.

Beta-glikāna ekstrakcijas no sēnēm palielināšana

Kad esat izveidojis beta-glikāna ekstrakcijas protokolu, kas atbilst jūsu prasībām, ekstrakcijas procesa paplašināšana var būt vienkāršs darbs.

Partijas ekstrakcijas palielināšana

Ja plānojat palielināt mērogu, izmantojot partijas ekstrakcijas metodi, iesakām palielināt partijas apjomu, vienlaikus saglabājot nemainīgu cietvielu un šķidruma attiecību un visus pārējos parametrus. Ja jūs turpināt izmantot to pašu ultraskaņas homogenizatoru, pārliecinieties, ka proporcionāli palielināsiet ultraskaņas apstrādes laiku. Partijām, kas pārsniedz 1 litru, iespējams, vēlēsities apsvērt lēna maisītāja iekļaušanu, lai saglabātu daļiņu suspensiju un uzlabotu ekstrakcijas viendabīgumu. Zemāk redzamajā attēlā parādīts 8 litru partijas ekstrakcijas iestatījums, izmantojot UP400St ultraskaņas homogenizatoru kombinācijā ar laboratorijas maisītāju.

Inline sēņu ekstrakcija

Tiem, kas vēlas nepārtraukti iegūt lielākus beta-glikānu daudzumus no sēnēm, Hielscher Ultrasonics piedāvā plūsmas šūnu reaktorus, kas paredzēti botānisko materiālu ekstrakcijai. Ja tas attiecas uz jums, mēs iesakām sazināties ar mums tieši, lai iegūtu vairāk informācijas. Mūsu tehniskā komanda ar prieku palīdzēs noteikt vispiemērotāko iestatījumu jūsu īpašajām vajadzībām. Tomēr iepriekš minētā laboratorijas mēroga eksperimenta veikšana ar jūsu konkrētajām sēņu sugām var būt nenovērtējama, lai izprastu precīzas procesa prasības. Zemāk redzamajā attēlā parādīts liels plūsmas šūnu reaktors ar UIP4000hdT ultraskaņas homogenizatoru beta-glikānu ekstrakcijai ar aptuveni 50 līdz 200 litriem sēņu šķīdinātāja vircas stundā.

Sēņu sugu empīriskā beta-glikāna koncentrācija

Zemāk jūs atradīsit empīriskās beta-glikāna koncentrācijas sarakstu, kas iegūts no dažādām sēņu sugām.

Sēņu sugas	Kopā 1,3-1,6-β-D-glikāns (g uz 100g sausās masas)
Baravikas pinophilus	9,8%
Suillus granulatus	13,3%
Craterellus cornucopioides	4,5%
Suillus variegatus	13,7%
Hydnum repandum	4,1%
Gyroporus cyanescens	14,3%
Tricholomopsis rutilans	10,2%
Agaricus bisporus (portobello)	4%
Agaricus bisporus (cremini)	4%
Auricularia auricular-judae	16,8%

1,3-1,6-β-D-glikāna saturs analizētajās savvaļas audzēšanas un kultivētajās sēnēs, t Avots:Mirończuk-Chodakowska et al. (2017): 1,3-1,6-β-D-glikāna satura kvantitatīvs novērtējums savvaļā augošās ēdamo poļu sēņu sugās. Rocz Panstw Zakl Hig 2017; 68(3):281-290.