Preparasi Sampel Ultrasonik untuk Analisis THC
- Ekstraksi ultrasonik merupakan metode yang telah terbukti untuk produksi THC, tetapi juga dapat digunakan untuk tujuan analitis.
- Sonikasi merupakan metode preparasi sampel yang umum digunakan untuk analisis kandungan total THC dalam produk kanabis.
- Ekstraksi ultrasonik diterapkan pada sampel sebelum analisis TLC, GC, dan HPLC.
Ekstraksi THC Ultrasonik
THC, atau tetrahidrokanabinol (delta-9-tetrahidrokanabinol), adalah zat kimia yang menyebabkan sebagian besar efek psikologis mariyuana. Pada spesies kanabis, dikenal lebih dari 400 galur yang berbeda. Bergantung pada galur kanabis tertentu, kandungan THC dalam kanabis dapat serendah 0,3 wt%. Pada galur lain, kandungan THC dapat mencapai 20 wt%.
Berbagai produk kanabis juga sangat bervariasi: konsentrasi rata-rata THC dalam mariyuana berkisar antara 1 hingga 5%; dalam hasis, kandungan THC berkisar antara 5 hingga 15%, dan dalam minyak hasis, rata-ratanya adalah 20%. THC dalam dosis mariyuana untuk penggunaan rekreasional sangat bervariasi, dan semakin rendah kandungan THC dalam mariyuana, semakin banyak yang harus dikonsumsi pengguna untuk merasakan efek yang diinginkan.
Preparasi sampel ultrasonik digunakan untuk menganalisis kandungan THC
- untuk pengendalian mutu produk THC rekreasional,
- untuk penentuan mutu produk THC farmasi,
- untuk membedakan hemp untuk narkotika dan hemp untuk serat.
Untuk analisis THC, metode kromatografi berikut umum digunakan: Kromatografi Lapis Tipis (TLC), Kromatografi Gas (GC), dan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (HPLC)
Protokol Preparasi Sampel Ultrasonik untuk Analisis TLC
Preparasi sampel: Untuk preparasi sampel, bahan tanaman kering harus dimaserasi dan digiling menjadi serbuk homogen. Untuk ekstraksi ultrasonik, 500mg serbuk tanaman kanabis dan 5mL campuran metanol-kloroform (rasio 9 : 1) dicampur dalam vial. Sonikasi dapat dilakukan menggunakan sonikator dengan ujung mikro, VialTweeter atau perangkat ultrasonik CupHorn. Waktu sonikasi sekitar 5 min. Setelah itu, diamkan sampel selama setidaknya 5 min. Encerkan supernatan jernih dengan campuran ekstraksi (v/v: 1 : 10). THC bebas: 1μL pada pelat TLC
Dekarboksilasi: 100μL ekstrak diuapkan hingga kering. Residu dipanaskan pada 180℃ selama 4 min. Tambahkan 500μL metanol-kloroform (v/v 9 : 1). Lakukan sonikasi selama 5 min. Encerkan supernatan jernih dengan campuran ekstraksi (v/v: 1 : 10).
Kalibrasi: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
Silika gel TLC F-254, Merck 5729
Pemindai TLC II, perangkat lunak CATS3, Camag Muttenz Eluen:
Etil asetat : Toluena : Kloroform = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Derivatisasi pascakromatografi: garam Fast Blue 0,1% dalam NaOH 0,1 M
Densitometri pada 550 nm
Tetrahidrokanabinol (Δ9-THC) untuk analisis dan ekstraksi
Protokol Preparasi Sampel Ultrasonik untuk Analisis GC
Preparasi sampel: Bahan tanaman kering dimaserasi dan digiling menjadi serbuk homogen. Untuk ekstraksi, 500mg serbuk tanaman kanabis dan 10mL campuran metanol-heksana (rasio 9 : 1) dicampur dalam vial. Sonikasi dapat dilakukan menggunakan perangkat ultrasonik tipe probe dengan ujung mikro, VialTweeter atau perangkat ultrasonik CupHorn. Lakukan sonikasi pada sampel selama 15–20 min. Kocok sampel dan diamkan selama setidaknya 5 min. Encerkan supernatan jernih dengan campuran ekstraksi (v/v 1: 20).
Dekarboksilasi: di dalam sisipan
Suhu injektor 250℃
Kalibrasi: 5 ng/μL hingga 250 ng/μL
GC: HP 6890 dengan 5973 MSD dan autosampler 7683 injeksi: 1μL, waktu tanpa pemisahan aliran (splitless): 2 min.
Kolom: HP-5 MS, 30m, diameter 250 μm, ketebalan film 0,25 μm
Gas pembawa: He, 35 psi, laju alir konstan: 4 mL/min.
Oven: 100℃ selama 1min.; kenaikan suhu 15℃ /min. hingga 280℃; 280℃ selama 5 min. MSD: SCAN: m/e 35 – 550
Protokol Preparasi Sampel Ultrasonik untuk Analisis HPLC
Preparasi sampel (serupa dengan preparasi GC): Bahan tanaman kering dimaserasi dan digiling menjadi serbuk homogen. Untuk ekstraksi, 500mg serbuk tanaman kanabis dan 10mL campuran metanol-heksana (rasio 9 : 1) dicampur dalam vial. Sonikasi dapat dilakukan menggunakan sonikator tipe probe dengan ujung mikro, VialTweeter atau perangkat ultrasonik CupHorn. Lakukan sonikasi pada sampel selama 15–20 min. Kocok sampel dan diamkan selama setidaknya 5 min. Encerkan supernatan jernih dengan campuran ekstraksi (v/v 1: 20).
VialTweeter untuk preparasi sampel ultrasonik
Prakolom: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Kolom: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Eluen: isokratik 36% TEAP 25 mmol/L, 64% asetonitril kuantifikasi pada 210nm
Kalibrasi: 0,001 – 0,10 μg/μL
Kalibrasi: 0,01 – 0,50 μg/μL
Waktu retensi: untuk CBD: 6,2 min.; untuk CBN: 8,0 min.; untuk THC: 9,4 min.; untuk THC-A: 11,0 min
LOD: CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St dengan ujung mikro untuk sonikasi sampel
Literatur/Referensi
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Forensisch chemische Analysen von THC haltigem Hanfkraut. Von der DC via GC zur HPLC-Methode. Applica 2006.
Fakta yang Perlu Diketahui
Mariyuana terdiri atas bunga kering serta daun dan batang yang menopangnya dari tanaman Cannabis betina. Ini merupakan bentuk yang paling banyak dikonsumsi dan mengandung sekitar 3% hingga 20% THC. Bentuk mariyuana tertentu yang dikembangkan melalui pemuliaan intensif mencapai kandungan THC lebih dari 30%. Mariyuana merupakan bahan sumber untuk semua jenis produk kanabis lain yang mengandung THC. Untuk mengubah kanabinoid yang paling melimpah, asam tetrahidrokanabinolat (THCA), menjadi THC yang bersifat psikoaktif, proses dekarboksilasi harus dimulai. Oleh karena itu, kanabis dan ekstraknya harus dipanaskan atau didehidrasi untuk menyebabkan dekarboksilasi.
Kief mengacu pada serbuk kaya trikoma yang diayak dari daun dan bunga kanabis. Serbuk ini dikonsumsi dalam bentuk serbuk atau dipadatkan dan digunakan dalam lempengan hasis.
Hasis atau hash adalah lempengan atau bola resin pekat yang dibuat dari kief yang dipadatkan atau dari resin yang dikerok dari permukaan tanaman dan digulung menjadi bola. Warnanya beragam, dari hitam hingga cokelat keemasan, bergantung pada kemurnian dan sumbernya. Hasis dapat dikonsumsi secara oral atau diisap, misalnya dengan pipa, hookah, bong, bubbler, vaporizer, menggunakan pisau panas, diisap dalam lintingan, dicampur dengan kuncup kanabis atau tembakau, diisap melalui botol, atau digunakan sebagai bahan makanan.
Tingtur Kanabis mengacu pada ekstrak kanabinoid dalam alkohol. Kanabinoid diekstraksi dari tanaman kanabis menggunakan minuman beralkohol berkadar tinggi (terutama alkohol dari biji-bijian) untuk menghasilkan tingtur.
Minyak hasis adalah matriks kanabinoid berupa resin yang dihasilkan melalui ekstraksi pelarut, dibentuk menjadi massa yang mengeras atau kental. Minyak hasis merupakan salah satu produk kanabis dengan potensi paling kuat karena kadar senyawa psikoaktifnya yang tinggi. Penggunaan minyak hasis yang diekstraksi dengan butana dan karbon dioksida superkritis belakangan ini semakin populer.
Infus mengacu pada berbagai jenis infus kanabis yang berbeda satu sama lain berdasarkan beragam pelarut nonvolatil yang dapat digunakan untuk menghasilkan infus kanabis. Untuk menyiapkan infus tersebut, bahan tanaman kanabis dicampur dengan pelarut, lalu diperas dan disaring untuk memindahkan minyak dari tanaman ke dalam pelarut. Lemak kakao, mentega susu, minyak goreng, gliserin, dan pelembap kulit merupakan pelarut yang umum digunakan.
Mariyuana medis mengacu pada penggunaan tanaman Cannabis sebagai terapi herbal yang direkomendasikan dokter serta penggunaan THC dan kanabinoid sintetis. Penggunaan ini umumnya memerlukan resep, dan distribusinya biasanya dilakukan dalam kerangka yang ditetapkan oleh hukum setempat. Beberapa studi penelitian telah menunjukkan bahwa penggunaan kanabis atau turunannya memiliki efek terhadap, misalnya, mual dan muntah akibat kemoterapi, nyeri neuropatik, dan sklerosis multipel.