Ultrazvučna priprema uzorka za THC analizu
- Ultrazvučna ekstrakcija dokazana je metoda za proizvodnju THC-a, ali se može koristiti iu analitičke svrhe.
- Ultrazvučna obrada je uobičajena metoda pripreme uzorka koja se koristi za analizu ukupnog sadržaja THC-a u proizvodima od kanabisa.
- Ultrazvučna ekstrakcija se primjenjuje na uzorke prije TLC, GC i HPLC analize.
Ultrazvučna ekstrakcija THC-a
THC ili tetrahidrokanabinol (delta-9-tetrahidrokanabinol) je kemikalija koja uzrokuje većinu psiholoških učinaka marihuane. Za vrstu kanabisa može biti poznato više od 400 različitih sojeva. Ovisno o specifičnoj vrsti kanabisa, kanabis može sadržavati samo 0,3 težinskih postotaka THC-a. U drugim sojevima sadržaj THC-a može doseći i do 20 tež.%.
Također se različiti proizvodi od kanabisa značajno razlikuju: tako se prosječna koncentracija THC-a u marihuani kreće između 1 do 5%; u hašišu je udio THC-a između 5 i 15%, au ulju hašiša prosječno 20%. THC u rekreacijskim dozama marihuane vrlo je varijabilan i što je niži sadržaj THC-a u marihuani, to više korisnik mora konzumirati kako bi iskusio željene učinke.
Za analizu sadržaja THC-a koristi se ultrazvučna priprema uzorka
- za kontrolu kvalitete rekreacijskih THC proizvoda,
- za određivanje kvalitete farmaceutskih THC proizvoda,
- za razlikovanje droge od konoplje i vlakana konoplje.
Za analizu THC-a obično se koriste sljedeće kromatografske metode: tankoslojna kromatografija (TLC), plinska kromatografija (GC) i tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti (HPLC).
Protokol ultrazvučne pripreme uzorka za TLC analizu
Priprema uzorka: Za pripremu uzoraka osušeni biljni materijal mora biti maceriran i samljeven u homogeni prah. Za ultrazvučnu ekstrakciju, 500 mg praha biljke kanabisa i 5 mL smjese metanola i kloroforma (omjer 9:1) pomiješano je u bočici. Sonikacija se može primijeniti pomoću ultrazvučni uređaj s mikro vrhom, VialTweeter ili ultrazvuk kuphorn. Vrijeme ultrazvuka traje cca. 5 minuta. Nakon toga ostavite uzorak da odstoji najmanje 5 minuta. Razrijedite bistri supernatant smjesom za ekstrakciju (v/v: 1 : 10). Slobodni THC: 1 μL na TLC ploči
Dekarboksilacija: 100 μL ekstrakta se ispari do suhog. Ostatak se zagrijava na 180 ℃ 4 minute. Dodati 500 μL metanol-kloroforma (v/v 9 : 1). Sonicirati 5 min. Razrijedite bistri supernatant smjesom za ekstrakciju (v/v: 1 : 10).
Kalibracija: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
TLC silika gel F-254, Merck 5729
TLC skener II, softver CATS3, Camag Muttenz Eluens:
Etilacetat : Toluol : Kloroform = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Postkromatografska derivatizacija: brza plava sol 0,1% u 0,1 M NaOH
Denzitometrija na 550 nm
Tetrahidrokanabinol (Δ9-THC) za analizu i ekstrakciju
Protokol ultrazvučne pripreme uzorka za GC analizu
Priprema uzorka: Osušeni biljni materijal se macerira i melje u homogeni prah. Za ekstrakciju se u bočici pomiješa 500 mg praha biljke kanabisa i 10 ml smjese metanola i heksana (omjer 9:1). Sonikacija se može primijeniti pomoću a ultrazvučni uređaj tipa sonde s mikro vrhom, VialTweeter ili ultrazvuk kuphorn. Sonicirati uzorak 15-20 min. Protresite uzorak i ostavite da odstoji najmanje 5 minuta. Razrijedite bistri supernatant smjesom za ekstrakciju (v/v 1:20).
Dekarboksilacija: u umetku
Temperatura injektora 250 ℃
Kalibracija: 5 ng/μL do 250 ng/μL
GC: HP 6890 s 5973 MSD i 7683 autosampler injekcija: 1 μL, vrijeme bez razdvajanja: 2 min.
Kolona: HP-5 MS, 30 m, promjer 250 μm, debljina filma 0,25 μm
Plin nosač: He, 35 psi, konstantan protok: 4 mL/min.
Pećnica: 100 ℃ 1 min.; porast temperature od 15℃/min. do 280 ℃; 280 ℃ 5 min. MSD: SKEN: m/e 35 – 550
Protokol ultrazvučne pripreme uzorka za HPLC analizu
Priprema uzorka (analogno GC prep): Osušeni biljni materijal se macerira i melje u homogeni prah. Za ekstrakciju se u bočici pomiješa 500 mg praha biljke kanabisa i 10 ml smjese metanola i heksana (omjer 9:1). Sonikacija se može primijeniti pomoću a ultrasonicator tipa sonde s mikro vrhom, VialTweeter ili ultrazvuk kuphorn. Sonicirati uzorak 15-20 min. Protresite uzorak i ostavite da odstoji najmanje 5 minuta. Razrijedite bistri supernatant smjesom za ekstrakciju (v/v 1:20).
VialTweeter za ultrazvučnu pripremu uzorka
Predkolona: LiChrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50963)
Kolona: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Eluens: izokratski 36% TEAP 25 mmol/L, 64% acetonitril kvantifikacija na 210 nm
Kalibracija: 0,001 – 0,10 μg/μL
Kalibracija: 0,01 – 0,50 μg/μL
Vrijeme zadržavanja: za CBD: 6,2 min.; za CBN: 8,0 min.; za THC: 9,4 min.; za THC-A: 11,0 min
LOD: CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St s mikrovrhom za sonikaciju uzorka
Literatura/Reference
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006.): Forensisch chemische Analysen von THC haltigem Hanfkraut. Iz DC putem GC pomoću HPLC metode. Aplikacija 2006.
Činjenice koje vrijedi znati
marihuana sastoji se od suhih cvjetova i listova i stabljika ženske biljke kanabisa. Ovo je oblik koji se najviše konzumira i sadrži cca. 3% do 20% THC-a. Specifični, visoko uzgojeni oblici marihuane postižu sadržaj THC-a veći od 30%. Marihuana je izvorni materijal za sve druge vrste proizvoda od kanabisa koji sadrže THC. Kako bi se najzastupljeniji kanabinoid, tetrahidrokanabinolna kiselina (THCA), pretvorio u psihoaktivni THC, mora se pokrenuti proces dekarboilacije. Stoga se kanabis i njegovi ekstrakti moraju zagrijati ili dehidrirati kako bi izazvali dekarboksilaciju.
hašiš odnosi se na prah, bogat trihomima, koji se prosijava iz lišća i cvjetova kanabisa. Konzumira se ili u prahu ili komprimiran i koristi se u kolačima od hašiša.
hašiš ili hašiš je koncentrirani kolač od smole ili kuglica koja se proizvodi ili od prešanog kifa ili od smole koja se sastruže s površine biljke i uvalja u kuglice. Pojavljuje se u različitim bojama od crne do zlatno smeđe, ovisno o čistoći i izvoru. Može se konzumirati oralno ili pušiti, npr. u luli, nargili, bongu, bubbleru, isparivaču, pomoću vrućeg noža, pušiti u jointima, miješati s pupoljcima kanabisa ili duhanom, pušiti kao toke u boci ili koristiti kao sastojak hrane.
tinktura kanabisa odnosi se na ekstrakt kanabinoida u alkoholu. Kanabinoidi se ekstrahiraju iz biljke kanabisa korištenjem jakih alkoholnih pića (uglavnom žitnog alkohola) za stvaranje tinkture.
hašiš ulje je smolasta matrica kanabinoida proizvedena ekstrakcijom otapalom, oblikovana u stvrdnutu ili viskoznu masu. Hašiš ulje jedan je od najjačih proizvoda od kanabisa zbog visoke razine psihoaktivnog spoja. Korištenje hašiš ulja ekstrahiranog u butanu i superkritičnom ugljičnom dioksidu nedavno je steklo sve veću popularnost.
Infuzije odnosi se na različite vrste infuzija kanabisa koje se međusobno razlikuju po velikom izboru nehlapljivih otapala koja se mogu koristiti za proizvodnju infuzije kanabisa. Za pripremu takve infuzije, biljna tvar kanabisa se pomiješa s otapalom, zatim se preša i filtrira kako bi se ulja iz biljke prenijela u otapalo. Kakao maslac, maslac od mliječnih proizvoda, ulje za kuhanje, glicerin i ovlaživači kože često su korištena otapala.
medicinska marihuana odnosi se na upotrebu biljke kanabis kao biljne terapije koju preporučuju liječnici, kao i na sintetski THC i kanabinoide. Za ovu upotrebu općenito je potreban recept, a distribucija se obično vrši unutar okvira definiranog lokalnim zakonima. Nekoliko istraživanja pokazalo je da uporaba kanabisa ili njegovih derivata djeluje protiv npr. mučnine i povraćanja izazvanih kemoterapijom, neuropatske boli i multiple skleroze.