הכנת דגימות FFPE בתפוקה גבוהה: מיצוי חלבונים וגזירת חומצות גרעין
באמצעות המכשיר האולטרסוני UIP400MTP לעיבוד בתפוקה גבוהה, Hielscher Ultrasonics מתמודדת עם האתגרים שבהכנת רקמות מקובעות בפורמלין ומשוקעות בפרפין (FFPE). גלו כיצד טיפול אולטרסוני מאפשר לעבד מספר גדול של דגימות FFPE לצורך הסרת פרפין, ליזיס של רקמות, הומוגניזציה, מיצוי חלבונים וגזירת DNA/RNA! נצלו את היתרונות של הכנת רקמות FFPE באמצעות אולטרסאונד – עיבוד מספר גדול של דגימות בצלחות מרובות באריות! השיגו דגימות באיכות גבוהה ומספר גדול של דגימות לקבלת תוצאות מחקר אמינות! ואחרון חביב, חסכו זמן וכסף!
סוניקציה בתפוקה גבוהה מקלה על הכנת דגימות FFPE
קיבוע בפורמלין ושיקוע בפרפין (FFPE) הם השיטה הנפוצה ביותר לשימור רקמות מוצקות ולאחסונן בארכיון. מיצוי ביומולקולות מדגימות רקמה מסוג FFPE כרוך לעיתים קרובות באתגרים משמעותיים בשל איכות הדגימות המאוחסנות. דגימות אלה, שהן נכס יקר ערך בביולוגיה מולקולרית ובמחקר קליני, מספקות מקור עשיר למידע ביולוגי למחקרים רטרוספקטיביים ולתיקוף סמנים ביולוגיים אבחוניים. עם זאת, תהליך הקיבוע בפורמלין והשיקוע בפרפין, אף שהוא משמר את המבנה והמורפולוגיה של הרקמה, מקשה על מיצוי חומצות גרעין וחלבונים באיכות גבוהה. פורמלין גורם לצילוב של חומצות גרעין וחלבונים, המוביל לקיטוע מולקולרי ולשינויים כימיים. גלו כיצד המכשיר האולטרסוני UIP400MTP לעיבוד בתפוקה גבוהה מתגבר על האתגרים שבהכנת דגימות FFPE!
מכשיר אולטרסוני להכנה יעילה של דגימות FFPE
- תהליך עבודה קל לשימוש: תהליכים פשוטים וידידותיים למשתמש.
- הסרת פרפין, מיצוי חלבונים, גזירת DNA / RNA
- עיבוד מהיר בתפוקה גבוהה: טיפול יעיל בצלחות מרובות באריות.
- הסרת פרפין יעילה: המסה משופרת של חלבונים.
- ממסים שאינם רעילים: הימנעות משימוש בממסים אורגניים מזיקים כגון קסילן.
מכשיר הסוניקציה UIP400MTP לעיבוד בתפוקה גבוהה לעיבוד דגימות FFPE בתפוקה גבוהה בצלחות מרובות באריות
התקדמות בטכניקות למיצוי חלבונים מרקמות FFPE
Hielscher Ultrasonics מתמודדת עם האתגרים שבהכנת דגימות FFPE בתפוקה גבוהה. סוניקציה משתמשת בגלים אולטרסוניים ליצירת תנודות מכניות וקוויטציה ממוקדת, המפרקות ביעילות מבנים תאיים ומשפרות את המסת הביומולקולות. טכניקה זו צברה פופולריות בזכות יכולתה להגביר את היעילות והתפוקה של מיצוי חומצות גרעין וחלבונים מרקמות FFPE, וכן של גזירת DNA ו-RNA להכנת ספריות. חשוב מאוד להדגיש שטיפול אולטרסוני באמצעות מכשיר הסוניקציה UIP400MTP לצלחות מרובות באריות שומר על שלמותן של ביומולקולות אלה לצורך יישומים בהמשך התהליך.
גזירת חומצות גרעין באמצעות טיפול אולטרסוני בתפוקה גבוהה
המכשיר האולטרסוני UIP400MTP לפלטות מרובות בארות, המיועד לשימוש בתפוקה גבוהה, מעלה את הכנת דגימות ה-FFPE לרמה חדשה. שיטת סוניקציה זו לפלטות מרובות בארות מספקת פתרון יעיל ואמין לעיבוד בו-זמני של דגימות רבות. היא מאפשרת הפקה מהירה והדירה של DNA, RNA וחלבונים, החיוניים למגוון טכניקות אנליטיות, ובהן ריצוף הדור הבא (NGS), PCR כמותי ואנליזות פרוטאומיות. מיטוב פרמטרי הסוניקציה, כגון משרעת, משך וטמפרטורה, משפר עוד יותר את האיכות ואת הכמות של הביומולקולות המופקות.
מכשיר הסוניקציה UIP400MTP לפלטות מרובות בארות מציע יתרונות משמעותיים בפרגמנטציה ובגזירה של DNA ו-RNA מרקמת FFPE. אחת התכונות הבולטות של מערכת זו היא יכולתה להפיק מקטעי DNA ו-RNA בטווח גדלים צר, תוך מתן אפשרות לכוונון מדויק של עוצמת הסוניקציה לקבלת מקטעים קצרים של 150–200 זוגות בסיסים (bp) או מקטעים ארוכים יותר של 15–20 קילוזוגות בסיסים (kbp). רב-שימושיות זו הופכת את UIP400MTP לחיוני הן ליישומי ריצוף בקריאות קצרות והן ליישומי ריצוף בקריאות ארוכות, ומבטיחה תוצאות באיכות גבוהה בריצוף הדור הבא (NGS) ובריצוף הגנום המלא (WGS). השליטה המדויקת שלו בגודל המקטעים חיונית לחוקרים בכל תחומי הגנומיקה, שכן היא מאפשרת להכין דגימות בהתאם למפרטים.
צרו איתנו קשר לקבלת פתרונות מתקדמים לעבודה עם רקמת FFPE
גלו את מכשיר הסוניקציה UIP400MTP לפלטות מרובות בארות, המאפשר הפקה יעילה של ביומולקולות מדגימות FFPE, תוך שמירה על שלמותן של חומצות הגרעין והחלבונים המופקים והבטחת הדירות התוצאות. טכנולוגיה זו משתלבת באופן חלק בתהליכי עבודה אחרים להכנה ולאנליזה, ומייעלת ומשפרת מחקרים מולקולריים המשתמשים במאגרי רקמות FFPE.
חומרי קיבוע והשפעותיהם
קיבוע הוא שלב חיוני בהכנת דגימות, המשמר מבנים תאיים, עוצר תגובות ביוכימיות ומונע התפרקות. נעשה שימוש בחומרי קיבוע שונים בהתאם לדרישות הניסוי הספציפיות. שני חומרי הקיבוע הנפוצים ביותר הם פורמלדהיד ופאראפורמלדהיד, היוצרים קשרי צילוב בחלבונים ובחומצות גרעין ומשמרים את המורפולוגיה ואת האנטיגניות של תאים ורקמות. חומרי קיבוע אחרים, כגון אתנול, מתנול וגלוטראלדהיד, משמשים ליישומים מסוימים.
חומרי הקיבוע פורמלדהיד ופאראפורמלדהיד יוצרים גשרי מתילן בין קבוצות אמינו, וכתוצאה מכך נוצרים קשרי צילוב בין חלבונים. תהליך זה מקבע ביעילות רכיבים תאיים ומשמר את שלמותם בשלבי האנליזה הבאים. השפעותיהם של חומרי קיבוע אלה עשויות להיות מושפעות מגורמים כגון ריכוז, pH וטמפרטורה, ומיטוב פרמטרים אלה חיוני להבטחת שימור מיטבי של המבנים התאיים.
יתרונות ההכנה האולטרסונית של דגימות FFPE
טיפול אולטרסוני הוא טכניקה רבת-עוצמה לפירוק תאים ורקמות מקובעים, העולה בביצועיה על טכניקות מקובלות. הוא מציע כמה יתרונות בולטים על פני שיטות ליזיס מסורתיות:
- מהירות ויעילות: ליזיס אולטרסוני מאפשר פירוק מהיר של תאים ורקמות, ומקצר באופן משמעותי את זמן העיבוד בהשוואה לשיטות ליזיס מכניות או כימיות. גלי קול בתדר גבוה, הנוצרים באמצעות הסונוטרודה, יוצרים כוחות גזירה מכניים הגורמים לפירוק המבנים התאיים המקובעים. פירוק מהיר ויעיל זה מאפשר לחוקרים לעבד נפחי דגימות גדולים בפרק זמן קצר.
- עדינות ואפשרות לכוונון: ליזיס אולטרסוני מציע מנגנון פירוק עדין הממזער נזק לביומולקולות רגישות כגון חלבונים, חומצות גרעין ואנזימים. בשונה משיטות מכניות המייצרות חום או כוחות גזירה מופרזים, ליזיס אולטרסוני משתמש בקוויטציה מבוקרת לפירוק תאים תוך שמירה על שלמותם ותפקודם של הרכיבים התוך-תאיים.
- רב-שימושיות: ניתן להשתמש בליזיס אולטרסוני בדגימות שטופלו בחומרי קיבוע שונים, וכך לאפשר לחוקרים לעבוד עם מגוון רחב של דגימות מקובעות. בין שמשתמשים בפורמלדהיד, בפאראפורמלדהיד או בחומרי קיבוע חלופיים, ליזיס אולטרסוני מספק באופן עקבי פירוק יעיל, המבטיח השבה מיטבית של מרכיבי התאים.
- תפוקה ואיכות גבוהות: ליזיס אולטרסוני מאפשר הפקה בכמויות גדולות של מרכיבי תאים שלמים, הודות ליכולתו לפרק תאים ורקמות מקובעים באופן אחיד. כך ניתן לקבל תוצאות אמינות ושחזוריות ביישומי המשך כגון אנליזת חלבונים, מיצוי חומצות גרעין ומבחנים אנזימטיים.
- תאימות לאוטומציה: ניתן לשלב ליזיס אולטרסוני בקלות במערכות אוטומטיות, וכך לאפשר עיבוד דגימות בתפוקה גבוהה. תאימות זו מאפשרת לחוקרים לייעל את תהליך העבודה שלהם ולהגדיל את הפרודוקטיביות, במיוחד במחקרים רחבי היקף.
קבלו את הפרוטוקול המפורט להסרת פרפין ולמיצוי חלבונים באמצעות מכשיר הסוניקציה הרב־מבחנתי VialTweeter!
מכשיר הסוניקציה UIP400MTP לפלטות עם 96 באריות לסוניקציה של פלטות מיקרוטיטר ופלטות מרובות באריות
ליזיס אולטרסוני חולל מהפכה בפירוק תאים ורקמות מקובעים, ומציע יתרונות רבים לעומת שיטות ליזיס מסורתיות. המהירות, היעילות, הבררנות, הרבגוניות, התפוקה הגבוהה והתאימות לאוטומציה הופכות אותו לכלי הכרחי במחקר בביולוגיה מולקולרית ובביוטכנולוגיה. Hielscher Ultrasonics מציעה מכשירי סוניקציה ללא מגע וכן מכשירי סוניקציה מסוג גשוש, ומספקת את ההומוגנייזר האולטרסוני המתאים ביותר ליישום שלכם במדעי החיים. בין שברצונכם לעבד דגימות בודדות, דגימות מרובות או מספר גדול מאוד של דגימות בו־זמנית, נציע לכם את מכשיר הסוניקציה הטוב ביותר התואם את דרישות המחקר והאבחון שלכם.
קראו עוד על מכשירי הסוניקציה ללא מגע של Hielscher להכנת דגימות מרובות ולהכנת דגימות בתפוקה גבוהה!
- השקעה חד־פעמית
- השתמשו בחומרים המתכלים שלכם
- ללא עלויות חוזרות עבור אביזרים וחומרים מתכלים ייעודיים של היצרן
- תפוקה גבוהה
- בקרה מדויקת
- טכנולוגיה מתקדמת ביותר
- אמינות ועמידות
- בקרת תהליך מדויקת הניתנת לכוונון
- ברמה תעשייתית: ניתן להפעיל ברציפות 24/7
- קל ובטוח לתפעול
- דרישות תחזוקה נמוכות
מכשיר הסוניקציה לפלטות UIP400MTP מתאים לכל פלטה עם 96 באריות, לכל פלטת מיקרוטיטר ולכל פלטה מרובת באריות.
תכנון, ייצור וייעוץ – איכות תוצרת גרמניה
מכשירי האולטרסאונד של Hielscher ידועים בסטנדרטים הגבוהים ביותר של איכות ותכנון. עמידות ותפעול קל מאפשרים לשלב את מכשירי האולטרסאונד שלנו בצורה חלקה במתקנים תעשייתיים. מכשירי האולטרסאונד של Hielscher מתמודדים בקלות עם תנאים קשים וסביבות תובעניות.
Hielscher Ultrasonics היא חברה בעלת הסמכת ISO, השמה דגש מיוחד על מכשירי אולטרסאונד עתירי ביצועים המשלבים טכנולוגיה מתקדמת ביותר וידידותיות למשתמש. כמובן, מכשירי האולטרסאונד של Hielscher תואמים לדרישות CE ועומדים בדרישות UL, CSA ו־RoHs.
צרו איתנו קשר! / שאלו אותנו!
מכשיר האולטרסאונד UIP400MTP: הכנת דגימות FFPE בתפוקה גבוהה בפלטה מרובת באריות
שאלות נפוצות
להלן תשובות לשאלות נפוצות הנוגעות להכנת רקמות FFPE ולסוניקציה של דגימות FFPE.
כיצד מכינים רקמת FFPE?
שלבי הכנת רקמת FFPE: טיפול ועיבוד קפדניים של רקמה טרייה חיוניים להפקת דגימות FFPE באיכות גבוהה. הבטחת השימור של המבנה התאי, חומצות הגרעין והחלבונים חיונית לניתוח מדויק בהמשך. כל שלב – מאיסוף ועד הטבעה – דורש דיוק כדי לשמור על שלמות הדגימה לצורך מגוון בדיקות, כולל בדיקה היסטולוגית, אימונוהיסטוכימיה ומחקרים מולקולריים. כאשר תהליך הקיבוע וההטבעה מבוצע כראוי, הוא מבטיח שהרקמה המשומרת משקפת במדויק את המצב בגוף החי, ומאפשר תוצאות אבחוניות ומחקריות אמינות.
נדריך אתכם לאורך 6 השלבים העיקריים בתהליך ההטבעה של דגימות רקמת FFPE.
- איסוף הרקמה
ביופסיות מיונקים חיים ותרביות רקמה הן מקורות מתאימים להשגת רקמה טרייה להכנת דגימות FFPE.
חשוב להשתמש בטכניקה אספטית: השתמשו בכלים ובכפפות סטריליים כדי למנוע זיהום. רצוי לאסוף רקמות בסביבה סטרילית, כגון חדר ניתוח או מנדף זרימה למינרית.
מכיוון שהדגימה שברירית מאוד, חיוני לטפל בה בעדינות: צמצמו עיכובים בעיבוד והתחילו בשלבי עיבוד הרקמה הבאים מיד לאחר הכריתה. הדבר חיוני למניעת אוטוליזה ופירוק. שמרו את הרקמה בטמפרטורת החדר; הימנעו מהקפאה, שכן היא עלולה לגרום להיווצרות גבישי קרח ולנזק לרקמה. - קיבוע הרקמה
ראשית, הרקמה מטופלת בתמיסת קיבוע: השתמשו בפורמלין 10% מבופר לערך הגבה ניטרלי (NBF), השקול לפורמלדהיד 4% במים, מבופר ל-pH ניטרלי.
הטבילו את הרקמה במלואה בפורמלין. הקפידו על יחס נפחים של חומר מקבע לרקמה של לפחות 10:1. זמן הקיבוע נע בדרך כלל בין 6 ל-24 שעות, בהתאם לסוג הרקמה ולגודלה. חשוב שהחומר המקבע יוכל לחדור היטב לכל הרקמה. עם זאת, קיבוע יתר עלול להוביל להצלבה המקשה על חשיפת אנטיגנים, ואילו קיבוע חסר עלול לגרום לשימור לקוי של הרקמה. - חיתוך הרקמה
שנית, חתכו את הרקמה לעובי של כ-3–5 mm כדי לאפשר חדירה מספקת של החומר המקבע. הקפידו על כיוון נכון של הרקמה כדי לכלול מבנים היסטולוגיים רלוונטיים. הדבר מקל על תהליך המיצוי כאשר הרקמה משמשת בהמשך לניתוח. - עיבוד הדגימה המקובעת
כעת יש לייבש את הרקמה המקובעת: לאחר הקיבוע יש לייבש את הרקמה כדי להבטיח חדירה מלאה של שעוות הפרפין. העבירו את הרקמה דרך סדרת תמיסות אתנול בריכוזים עולים (70%, 80%, 90% ו-100%) כדי לסלק מים.
הבהרה באמצעות קסילן: שעוות פרפין אינה מסיסה במים, אך מסיסה בקסילן. לכן יש להחליף את המים שברקמה בקסילן. אולם הקסילן עצמו אינו מסיס במים אך מסיס באלכוהול, ולכן נדרש שלב ביניים שבו המים מוחלפים תחילה באלכוהול. הטבילו את הרקמה בקסילן או בתחליף קסילן כדי לסלק את האתנול ולהכין את הרקמה להספגה בפרפין.
הספגה באמצעות פרפין: הטביעו את הרקמה בשעוות פרפין מותכת והבטיחו הספגה מלאה. שלב זה כולל בדרך כלל כמה החלפות של הפרפין כדי להבטיח הספגה יסודית. - הטבעת הרקמה
בשלב זה הרקמה מעוצבת בתבנית ליצירת גוש רקמה: הניחו את הרקמה בתבנית בכיוון הרצוי וצקו עליה פרפין מותך. הניחו לפרפין להתמצק באמצעות קירור בטמפרטורת החדר או על משטח קר. - הכנת חתכים והתקנה על זכוכיות נושא
מיקרוטומיה: כדי לפרוס את הרקמה המוטבעת, השתמשו במיקרוטום לחיתוך חתכים דקים (בדרך כלל 4–5 מיקרומטר) מגוש הפרפין. לאחר מכן התקינו את הדגימה באמצעות הנחת החתכים על זכוכיות נושא לצורך צביעה וניתוח מיקרוסקופי בהמשך.
לבסוף, בדקו את האיכות ההיסטולוגית: בחנו את החתכים הראשונים תחת מיקרוסקופ כדי לוודא שהקיבוע והעיבוד תקינים. התאימו את הפרוטוקולים לפי הצורך בהתאם לסוג הרקמה ולאיכות שנצפתה.
ניתן להשתמש ברקמות FFPE להפקת RNA, DNA וחלבונים, וכן לזיהוי סימנים לסרטן או למחלה אחרת. ניתן לאחסן אותן במשך שנים, והן מרכיב חיוני באופן שבו חוקרים ורופאים משתמשים בדגימות רקמה לצורכי אבחון ומחקר.
מהן הבעיות והאתגרים הנפוצים בעבודה עם רקמת FFPE?
דגימות רקמה מקובעות בפורמלין ומשוקעות בפרפין (FFPE) נמצאות בשימוש נרחב במחקר ובאבחון, אך הן מציבות כמה אתגרים ובעיות נפוצות:
- פירוק של ביומולקולות: קיבוע ממושך עלול להוביל לפירוק של DNA, RNA וחלבונים, ולהקשות על הפקת חומצות גרעין או חלבונים באיכות גבוהה ליישומים בהמשך התהליך. קיבוע נכון (הימנעות מקיבוע חסר ומקיבוע יתר) חיוני לשימור הרקמה.
- מיסוך אנטיגנים: תהליך הקיבוע עלול למסך אתרים אנטיגניים ולהפחית את יעילות קשירת הנוגדנים באימונוהיסטוכימיה ובבדיקות אימונולוגיות אחרות. לעיתים קרובות נדרש לשם כך שחזור אנטיגנים, הליך שבו מוסר המיסוך של אפיטופ ומשוחזרת הקשירה בין האפיטופ לנוגדן. עם זאת, לא תמיד ניתן לשחזר את האנטיגניות במלואה.
- שונות באיכות הקיבוע: הבדלים בזמני הקיבוע ובתנאיו עלולים להוביל לאיכות לא אחידה של הדגימות, ולהשפיע על שחזוריות התוצאות ועל האפשרות להשוות ביניהן. השתמשו בפרוטוקולי קיבוע אמינים והימנעו מקיבוע חסר ומקיבוע יתר.
- נזק ל־DNA וקיטוע שלו: קיבוע דגימות FFPE בפורמלין עלול לגרום לסוגים שונים של נזק ל־DNA, ובהם דה־אמינציה של ציטוזין (מוטציות מ־C ל־T), נזק חמצוני (למשל, 8-oxo-guanine המוביל למוטציות מ־G ל־T), וכן פגיעות פיזיות כגון חתכים חד־גדיליים, פערים ואתרים חסרי בסיס, המעכבים את פעילותו של DNA פולימראז. תהליך הקיבוע בפורמלין עלול לגרום לקיטוע של DNA, ולהקשות על אנליזות גנטיות וגנומיות כגון PCR וריצוף.
- איכות ה־RNA: RNA המופק מרקמות FFPE הוא לעיתים קרובות מקוטע ובעל שינויים כימיים, דבר המקשה על ביצוע אנליזות טרנסקריפטומיות באיכות גבוהה.
- שינויים בחלבונים: פורמלין עלול לגרום לשינויים כימיים בחלבונים, המשפיעים על המבנה והתפקוד שלהם ועלולים להפריע לאנליזות פרוטאומיות.
- ארטיפקטים בעיבוד הדגימות: במהלך תהליך השיקוע והחיתוך, מאמץ מכני וחום עלולים ליצור ארטיפקטים ולגרום נזק נוסף לרקמה.
- שונות בין אצוות: הבדלים בפרוטוקולי הקיבוע והשיקוע בין אצוות שונות עלולים להוביל לשונות משמעותית בתוצאות, ולהקשות על השוואות בין מחקרים.
- בעיות אחסון: אחסון ממושך של בלוקי FFPE עלול להוביל לפירוק נוסף ולפגיעה בשלמות חומצות הגרעין לאורך זמן, ולהשפיע על התאמתן של דגימות ארכיוניות למחקרים רטרוספקטיביים.
יצירת קשרי צילוב: קיבוע בפורמלין גורם ליצירת קשרי צילוב בחלבונים ובחומצות גרעין, העלולים להקשות על אנליזה מולקולרית ולהשפיע על הדיוק של אימונוהיסטוכימיה ובדיקות אחרות.
שימוש בפרוטוקולים שעברו אופטימיזציה, טיפול קפדני בדגימות ויישום טכניקות מתקדמות מסייעים לשפר את האיכות והאמינות של הנתונים המתקבלים מרקמות FFPE.
מה ההבדל בין רקמת FFPE לרקמה קפואה?
רקמת FFPE (מקובעת בפורמלין ומשוקעת בפרפין) נשמרת באמצעות קיבוע הרקמה בפורמלין ולאחר מכן שיקועה בשעוות פרפין, דבר המאפשר אחסון ממושך בטמפרטורת החדר תוך שמירה על מורפולוגיית הרקמה. לעומת זאת, רקמה קפואה נשמרת במהירות באמצעות הקפאה, המשמרת טוב יותר את שלמות חומצות הגרעין והחלבונים, אך מחייבת אחסון בטמפרטורות נמוכות מאוד.
באילו חומרים כימיים משתמשים לשיקוע רקמות בתהליך FFPE?
הכימיקלים המשמשים להטבעת FFPE כוללים בדרך כלל פורמלין לקיבוע ושעוות פרפין להטבעה. לצורך הטבעת FFPE, רקמות מקובעות בדרך כלל באמצעות פורמלין מבופר ניטרלי בריכוז 10% (v/v) (FA) או באמצעות תמיסת פורמלדהיד בריכוז 4% (w/v) (PFA), שהוכנה זה עתה מאבקת פאראפורמלדהיד. פורמלין, שהוא תמיסה של פורמלדהיד במים, מבופר ל-pH ניטרלי כדי לשמר את מורפולוגיית הרקמה ולמנוע צילוב יתר. גם התמיסה המבוססת על פאראפורמלדהיד מספקת קיבוע יעיל באמצעות צילוב חלבונים, ובכך מייצבת את מבנה הרקמה לקראת הטבעתה בהמשך בשעוות פרפין. כימיקלים אלה חיוניים לשמירה על שלמות הרקמה ועל המורפולוגיה שלה במהלך תהליך הקיבוע וההטבעה.
כיצד מסירים את הפרפין מדגימות FFPE?
כדי להסיר פרפין מדגימות FFPE, חתכי הרקמה עוברים בדרך כלל סדרת שטיפות בקסילן ולאחריה הידרציה מחדש באמצעות סדרת תמיסות כוהל בריכוזים מדורגים, ולבסוף במים. מאחר שקסילן רעיל מאוד וכרוך בסיכונים בריאותיים כגון בעיות נשימה, גירוי בעור והשפעות אפשריות לטווח ארוך בעקבות חשיפה חוזרת, הסרת פרפין באמצעות אולטרסאונד מסתמנת כחלופה מבטיחה במעבדות רבות. שיטה זו משתמשת בגלים אולטרסוניים עוצמתיים להסרה יעילה ובטוחה של פרפין ללא צורך בממסים רעילים כגון קסילן, ובכך מפחיתה את הסיכון לצוות המעבדה ויוצרת סביבת עבודה בטוחה יותר.
למשך כמה זמן עליי לקבע את הרקמות שלי כדי לקבל דגימות FFPE באיכות טובה?
ההמלצות הכלליות לגבי משך הקיבוע מציעות בדרך כלל לקבע דגימות רקמה בפורמלין למשך 24 עד 48 שעות. משך זמן זה מספיק בדרך כלל לשימור מורפולוגיית הרקמה והמבנים התאיים, תוך צמצום קיבוע יתר, העלול להוביל לצילוב מופרז ולפירוק של חומצות גרעין וחלבונים. עם זאת, זמן הקיבוע המיטבי יכול להשתנות בהתאם לגודל הרקמה ולסוגה, כאשר דגימות קטנות או עדינות יותר דורשות זמני קיבוע קצרים יותר. חיוני לאזן בין קיבוע מספק למניעת אוטוליזה ופירוק של הרקמה לבין הימנעות מקיבוע ממושך, שעלול להקשות על אנליזות מולקולריות בהמשך.