Подготовка на проби с висока производителност за митохондриална диагностика

Митохондриалната диагностика в изследванията и клиниките се извършва с помощта на различни техники като секвениране, PCR и биохимични анализи. Тези методи се използват за идентифициране на ДНК мутации и измерване на митохондриалната функция. Секвенирането помага за откриване на генетични мутации, докато PCR може да определи количествено специфични ДНК последователности. Биохимичните анализи оценяват функционалността на митохондриалните протеини и ензими.

Диагностиката на митохондриалните заболявания е особено трудна поради изразената клинична променливост на тези заболявания, както и поради сложното взаимодействие между два различно наследени генома: митохондриална ДНК (мтДНК) и ядрен геном.

Извличане и фрагментация на ДНК с помощта на соникация

Извличането на ДНК от мускулна тъкан е особено полезно, когато се подозират тъканно-специфични промени в мтДНК. Тези промени могат да включват делеции на мтДНК при хронична прогресивна външна офталмоплегия (CPEO), точкови мутации на мтДНК при митохондриални миопатии или изчерпване на мтДНК при синдром на Алперс. ДНК, извлечена от мускулна тъкан, може да се използва за различни генетични тестове, като Southern blot и PCR на дълги разстояния за делеции, PCR в реално време за изчерпване или секвениране за точкови мутации.
Соникацията, използваща интензивни ултразвукови вълни, се прилага за няколко приложения в митохондриалната диагностика. Използва се за лизиране на клетки за извличане на вътреклетъчно съдържание като митохондрии и ДНК, за срязване на ДНК като мтДНК и нДНК за секвениране и за хомогенизиране на проби.

Съвети за оптимална изолация на митохондриите чрез соникация:

• Контрол на температурата: Изпълнете всички стъпки при температурен диапазон от 0°C до 4°C. Това е от решаващо значение за поддържане на целостта и функционалността на митохондриите.
• Ефективност и бързина: Работете бързо и пречиствайте митохондриите само до степента, необходима за вашето конкретно приложение. Прекомерната манипулация може да доведе до значителни загуби на митохондриално съдържание.
• Разреждане на суспензии: Поддържайте ниски концентрации на клетъчни и органелни суспензии по време на процеса на изолиране. Това помага да се сведат до минимум рисковете от улавяне и аглутинация, като по този начин се подобрява чистотата на изолираните митохондрии.
• Обем на пробата: Изберете няколко малки препарата, а не един голям. Този подход обикновено води до по-добри добиви, тъй като увеличаването не увеличава пропорционално количеството възстановими митохондрии. Многоямковият плачен ултразвук UIP400MTP улеснява бързия и надежден лизис на клетките за изолиране на митохондриите, както и извличането на протеини от митохондриите.

Тези насоки ще направят процеса на изолиране с помощта на ултразвуков лизис и центрофугиране по-ефективен, като се получат висококачествени митохондриални препарати, подходящи за приложения надолу по веригата.

Хилшер Соникатори – Качество, произведено в Германия

Ултразвуковите апарати Hielscher са добре известни със своите най-високи стандарти за качество и дизайн. Здравината и лесната работа позволяват безпроблемното интегриране на нашите ултразвукови апарати в промишлени съоръжения. Тежките условия и взискателните условия се справят лесно с ултразвуковите апарати на Hielscher.

Hielscher Ultrasonics е сертифицирана по ISO компания и поставя специален акцент върху високопроизводителните ултразвукови уреди, отличаващи се с най-съвременна технология и удобство за потребителя. Разбира се, ултразвуковите апарати на Hielscher са съвместими с CE и отговарят на изискванията на UL, CSA и RoHs.