بروتوكول ASTM E2799-22 لتقييم مضادات الميكروبات
Hielscher UIP400MTP هو سونيكاتير لوحة متعددة الآبار قوية وفعالة مصممة لتبسيط خطوة صوتنة في بروتوكول ASTM E2799-22. من خلال توفير طاقة موسعة بالموجات فوق الصوتية عبر لوحة الميكروتيتر بأكملها ، يضمن UIP400MTP فصلا متسقا وموثوقا للأغشية الحيوية عن أغطية الوتد دون الإضرار بالخلايا أو المساس بسلامة العينة. تعمل قدرتها عالية الإنتاجية وتشغيلها سهل الاستخدام على تقليل وقت المعالجة بشكل كبير مع تعزيز قابلية التكاثر ، مما يجعلها حلا مثاليا للمختبرات التي تجري فحوصات جدوى الأغشية الحيوية واختبار فعالية مضادات الميكروبات.
ASTM E2799
ASTM E2799 هي طريقة اختبار موحدة مصممة لتقييم فعالية العوامل المضادة للميكروبات ضد الأغشية الحيوية ، مع التركيز بشكل خاص على Pseudomonas aeruginosa. الأغشية الحيوية هي مجتمعات ميكروبية معقدة تلتصق بالأسطح وتظهر مقاومة متزايدة للعلاجات المضادة للميكروبات ، مما يجعلها تحديا كبيرا في سياقات الرعاية الصحية والصناعية والبيئية. تستخدم هذه الطريقة مقايسة الحد الأدنى لتركيز استئصال الأغشية الحيوية (MBEC) لتوفير إطار عمل موثوق به وقابل للتكرار لاختبار المطهرات في ظل ظروف الأغشية الحيوية الواقعية.
96 لوحة حسنا صوتي UIP400MTP للفحص عالي الإنتاجية
كيف تساهم صوتنة في ASTM E2799?
يلعب صوتنة دورا مهما في بروتوكول ASTM E2799 من خلال تسهيل فصل الأغشية الحيوية عن أسطح الاختبار ، مما يضمن تقييما دقيقا للبقاء الميكروبي بعد العلاج. باستخدام طاقة الموجات فوق الصوتية التي يتم التحكم فيها ، يحقق البروتوكول تعطيلا فعالا ومتسقا للأغشية الحيوية دون الإضرار بالخلايا ، مما يتيح نتائج دقيقة وقابلة للتكرار. هذا يجعل ASTM E2799 أداة أساسية لتطوير أبحاث الأغشية الحيوية وتطوير استراتيجيات فعالة لمضادات الميكروبات.
كيفية تشغيل اختبار MBEC وفقا لمعيار ASTM E2799-22
يحدد بروتوكول ASTM E2799-22 خطوات تقييم فعالية العوامل المضادة للميكروبات ضد الأغشية الحيوية. عند استخدام Hielscher UIP400MTP ميكروتيتر لوحة سونيكاتور، يمكن تكييف البروتوكول لدمج هذه الطريقة الصوتية المتقدمة لانفصال الأغشية الحيوية. فيما يلي وصف للخطوات المصممة خصيصا لاستخدام UIP400MTP الصوتنة الدقيقة:
- تحضير الأغشية الحيوية
قم بإعداد صفيحة ميكروتيتر معقمة سعة 96 بئرا بأغطية ربط قابلة للفصل.
تلقيح الآبار بتعليق بكتيري موحد في وسط نمو مناسب.
ضع غطاء الوتد على اللوحة ، مع التأكد من غمر الأوتاد بالكامل في التعليق البكتيري.
احتضان اللوحة في ظل ظروف خاضعة للرقابة (على سبيل المثال ، درجة الحرارة والوقت) للسماح بتكوين الأغشية الحيوية على الأوتاد. - العلاج بالعوامل المضادة للميكروبات
بعد تكوين الأغشية الحيوية ، استبدل الوسط بوسط جديد يحتوي على عوامل الاختبار المضادة للميكروبات بتركيزات مختلفة.
أعد توصيل غطاء الوتد واحتضانه وفقا للشروط المحددة في تصميم الاختبار. - التحضير لانفصال الأغشية الحيوية
بعد العلاج ، اشطف غطاء الوتد عن طريق غمره في محلول شطف معقم لإزالة العوامل المضادة للميكروبات المتبقية وخلايا العوالق الملتصقة بشكل فضفاض. - انفصال الأغشية الحيوية باستخدام UIP400MTP Sonicator
قم بإعداد صفيحة ميكروتيتر جديدة سعة 96 بئرا تحتوي على وسيط استرداد (على سبيل المثال ، مرق تحييد).
افصل الأغشية الحيوية عن طريق وضع غطاء الوتد في آبار لوحة وسط الاسترداد.
أدخل اللوحة في جهاز الصوتنة UIP400MTP ، مع التأكد من محاذاة الغطاء واللوحة بشكل صحيح.
اضبط الصوتنة على سعة 70٪ -80٪ والصوتنة لمدة 3-4 دقائق في وضع الدورة ، لضمان انفصال الأغشية الحيوية بشكل متسق دون تحلل الخلايا. - تقييم جدوى الأغشية الحيوية
بعد الصوتنة ، قم بمعالجة وسط الاسترداد الذي يحتوي على خلايا الأغشية الحيوية المنفصلة باستخدام تقنيات ميكروبيولوجية أو تحليلية قياسية ، مثل:- عدد وحدة تشكيل المستعمرة (CFU): قم بإجراء عمليات تخفيف تسلسلية ولوحة على أجار لتعداد الخلايا القابل للحياة.
- قياسات الكثافة الضوئية (OD): استخدم التحليل الطيفي الضوئي لتقييم كثافة الخلايا.
- فحوصات الجدوى القائمة على التألق: تحديد الخلايا الحية والميتة باستخدام الأصباغ الفلورية.
- تحليل البيانات
قارن بيانات الجدوى للأغشية الحيوية المعالجة وغير المعالجة لتحديد فعالية العوامل المضادة للميكروبات.
احسب الحد الأدنى لتركيز استئصال الأغشية الحيوية (MBEC) بناء على التركيز المطلوب للقضاء على خلايا الأغشية الحيوية القابلة للحياة. - مراقبة الجودة
ضمان ظروف صوتنة متسقة من خلال معايرة UIP400MTP بانتظام والتحقق من أن عملية انفصال الأغشية الحيوية لا تؤدي إلى تحلل كبير للخلايا أو تدميرها.
قم بتضمين عناصر التحكم المناسبة ، مثل الأغشية الحيوية غير المعالجة والفراغات المتوسطة فقط ، للتحقق من صحة النتائج.
تم إزاحة خلايا الأغشية الحيوية المتكونة على المسامير عن طريق الصوتنة (Hielscher Ultrasound Technology ، Teltow ، ألمانيا ، UIP250MTP) لمدة 5 دقائق في 96 بئر تحتوي على وسط ثقافة طازج لاستعادة الخلايا.
(صورة ودراسة: ©دي أوليفيرا وآخرون ، 2016)
من خلال دمج UIP400MTP في سير عمل ASTM E2799-22 ، تم تحسين عملية فصل الأغشية الحيوية من أجل الاتساق والكفاءة والتطبيقات عالية الإنتاجية.
الأدب / المراجع
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- ASTM E2799-22 Standard Test Method for Testing Disinfectant Efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC Assay
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
أسئلة مكررة
ما هو ASTM E2799؟
ASTM E2799 هي طريقة اختبار قياسية أنشأتها ASTM International لاختبار فعالية المطهر ضد Pseudomonas aeruginosa Biofilm باستخدام اختبار MBEC. تستخدم هذه الطريقة على نطاق واسع لتقييم تكوين الأغشية الحيوية ، وفعالية مضادات الميكروبات ، والتفاعلات السطحية للمواد ، مما يتيح إجراء مقارنات موحدة في الأبحاث المتعلقة بالأغشية الحيوية.
ما هو الفرق بين ASTM E2799-22 و ASTM E2799-11 و ASTM E2799-12 و ASTM E2799-17؟
ASTM E2799 هي طريقة اختبار موحدة تقيم فعالية المطهرات ضد الأغشية الحيوية الزائفة الزنجارية باستخدام مقايسة MBEC (الحد الأدنى لتركيز استئصال الأغشية الحيوية). خضعت هذه الطريقة لعدة مراجعات لتعزيز دقتها وقابليتها للتطبيق.
- ASTM E2799-11: كان هذا هو الإصدار الأولي للمعيار ، حيث وضع الإجراءات الأساسية لتقييم فعالية المطهر ضد المتصورة الزنجارية الأغشية الحيوية باستخدام مقايسة MBEC.
- ASTM E2799-12: تضمنت هذه المراجعة تحديثات فنية طفيفة لتحسين الوضوح ومعالجة الغموض المحدد في إصدار 2011.
- ASTM E2799-17: في هذا التحديث ، تم إجراء تعديلات أكثر أهمية على البروتوكول ، بما في ذلك التعديلات على عملية زراعة الأغشية الحيوية ، وتطبيق العلاج ، وإجراءات التحييد ، بهدف تعزيز قابلية التكاثر والمواءمة مع التطورات في أبحاث الأغشية الحيوية.
- ASTM E2799-22: تعكس المراجعة الأخيرة أحدث الفهم العلمي والتطورات التكنولوجية في دراسات الأغشية الحيوية. يتضمن منهجيات محسنة لنمو الأغشية الحيوية ومعالجتها وتحليلها ، مما يضمن بقاء طريقة الاختبار ذات صلة وفعالة لتقييمات فعالية المطهر الحالية.
تم إجراء كل مراجعة ل ASTM E2799 لتحسين موثوقية الطريقة وقابليتها للتكرار وأهميتها ، مما يضمن بقائها مواكبة للتقدم العلمي والتكنولوجي في مجال أبحاث الأغشية الحيوية.
ما هو الفرق بين فحوصات MBEC و MBIC؟
يكمن الاختلاف الرئيسي بين فحوصات MBEC (الحد الأدنى لتركيز استئصال الأغشية الحيوية) و MBIC (الحد الأدنى من تركيز مثبط الأغشية الحيوية) في تركيزها:
فحوصات MBEC قياس أقل تركيز لعامل مضاد للميكروبات مطلوب للقضاء تماما على الأغشية الحيوية المكونة مسبقا ، وتقييم قدرة المادة على قتل الكائنات الحية الدقيقة المضمنة في الأغشية الحيوية.
فحوصات MBIC تحديد أقل تركيز لعامل مضاد للميكروبات يمنع التكوين الأولي للأغشية الحيوية ، وتقييم قدرته على تثبيط نمو الأغشية الحيوية.
كلا المقياسين حاسمان لفهم فعالية مضادات الميكروبات ضد الأغشية الحيوية ولكنهما يستهدفان مراحل مختلفة من دورة حياة الأغشية الحيوية.
تعرف على كيفية استخدام جهاز الصوتنة UIP400MTP microplate لإزاحة الأغشية الحيوية في فحوصات MBIC!
Hielscher الفوق صوتيات بتصنيع الخالط بالموجات فوق الصوتية عالية الأداء من المختبر ل الحجم الصناعي.