Ultrasonikatsiya yordamida qo'ziqorinlardan beta-glyukanlarni olish
Materiallar va uskunalar
- Qo'ziqorinlar (masalan, 100 g tug'ralgan yoki dilimlenmiş qo'ziqorin)
- Sovuq distillangan suv (masalan, 500 ml)
- Blender yoki maydalagich
- Shisha idishlar yoki idishlar
- Filtr qog'ozi yoki vakuumli filtrlash moslamasi
- Santrifüj (ixtiyoriy)
- Yog'ingarchilik uchun spirt (masalan, etanol).
- Muzlatgich
- Quritish pechi
Beta-glyukan ekstraktsiya protokoli
- Qo'ziqorinlarni maydalang yoki maydalang (masalan, Chaga yoki Lion’ Mane qo'ziqorini) taxminan qo'pol zarrachalarga aylanadi. 1 dan 3 millimetrgacha. Misol uchun, 100 g quritilgan qo'ziqorin zarralaridan foydalaning.
- Keyin qo'ziqorin zarralarini shisha stakan yoki kolbaga qo'shing.
- Keyin ekstraksiya qilinadigan qo'ziqorin zarralari bo'lgan stakanga 500 ml distillangan suv qo'shing. Suv-qo'ziqorin nisbati o'ziga xos qo'ziqorin turiga va zarracha hajmiga qarab farq qilishi mumkin.
- Atlamani aralashtirgandan so'ng, ultratovushli laboratoriya gomogenizatori yordamida aralashmani soniklashtiring (masalan, 100% amplitudada 22 mm sonotrodli UP400St yoki 100% amplituda 14 mm sonotrode bilan UP200Ht) va 90 ° C dan past haroratni saqlang. Pastroq haroratlar ekstraksiya paytida beta-glyukanlar kabi issiqlikka sezgir birikmalarni saqlab qolishga yordam beradi. Taxminan sonikatsiya qiling. UP400St dan foydalanganda 5 dan 10 minutgacha va UP200Ht dan foydalanganda mos ravishda 10 dan 10 minutgacha. Iltimos, harorat va ekstraktsiya vaqti ishlatiladigan ultratovush quvvatiga qarab farq qilishi mumkinligini unutmang. Albatta, katta hajmlar ko'proq sonikatsiya vaqtlarini talab qiladi.
- Soniklangan aralashmani filtr qog'ozi orqali filtrlang yoki suyuqlikni (ajratilgan beta-glyukanlarni o'z ichiga olgan) qattiq qo'ziqorin qoldig'idan ajratish uchun vakuumli filtrlash moslamasidan foydalaning.
- Keyin spirtli ichimliklarni (masalan, etanol) qo'shib suyuqlikdan beta-glyukanlarni cho'ktiring. Odatda, yog'ingarchilik uchun siz 2-3 hajmli spirtdan foydalanishingiz mumkin.
- Shundan so'ng, beta-glyukanlarning cho'kishi uchun aralashmani muzlatgichda bir necha soat davomida saqlang.
- Yog'ingarchilikdan so'ng siz suyuqlikni ehtiyotkorlik bilan to'kib tashlashingiz va beta-glyukan cho'kmasini to'plashingiz mumkin.
- Nihoyat, beta-glyukanlarni pechda past haroratda (masalan, 40-50 ° C) barcha spirtli ichimliklar tozalanmaguncha quriting va siz quruq kukunga ega bo'lasiz.
Qo'ziqorinlar o'z xususiyatlarida farq qiladi. Demak, beta-glyukanni ekstraksiya qilish jarayoni qo'ziqorinning o'ziga xos turi, qo'ziqorin holati (quritilgan yoki yangi), zarracha hajmi va ekstraktsiya harorati kabi omillarga qarab farq qilishi mumkin. Ekstraksiya jarayonini optimallashtirish uchun turli parametrlar bilan tajriba o'tkazishni o'ylab ko'ring, jumladan qattiq-suyuqlik nisbatlarini o'zgartirish, haroratni sozlash, turli erituvchilarni o'rganish va turli sonikatsiya davomiyligi va amplituda sozlamalarini sinab ko'ring.
Beta-glyukanning ultratovushli enzimatik ekstraktsiyasi
Ultrasonik yordamchi fermentativ ekstraktsiya fermentlar va ultratovush to'lqinlarining kombinatsiyasidan foydalangan holda qo'ziqorinlardan beta-glyukanlarni olish uchun ishlatiladigan usuldir. Bu jarayon qo'ziqorinlarning hujayra devorlarini parchalash va beta-glyukanlarni chiqarishni osonlashtirish orqali ekstraksiya samaradorligini oshiradi.
Qo'ziqorinlardan beta-glyukan ekstraktsiyasini kengaytirish
Sizning talablaringizga javob beradigan beta-glyukan ekstraksiya protokolini o'rnatganingizdan so'ng, ekstraksiya jarayonini kengaytirish oddiy harakat bo'lishi mumkin.
To'plamni ajratib olish hajmini oshirish
Agar siz partiyani ajratib olish usuli yordamida hajmni oshirishni rejalashtirmoqchi bo'lsangiz, qattiq-suyuqlik nisbati va boshqa barcha parametrlarni o'zgarmagan holda partiya hajmini oshirishni tavsiya qilamiz. Agar siz bir xil ultratovushli gomogenizatordan foydalanishni davom ettirsangiz, sonikatsiya vaqtini mutanosib ravishda oshirishni unutmang. Hajmi 1 litrdan oshgan partiyalar uchun siz zarracha suspenziyasini saqlab qolish va ekstraktsiyaning bir xilligini yaxshilash uchun sekin aralashtirgichni qo'shishni ko'rib chiqishingiz mumkin. Quyidagi rasmda laboratoriya aralashtirgichi bilan birgalikda UP400St ultratovushli gomogenizatordan foydalangan holda 8 litrli partiyali ekstraksiya qurilmasi ko'rsatilgan.
UP400St Sonicator bilan 8L partiyali qo'ziqorin ekstraktsiyasini o'rnatish
Sonikatsiyadan so'ng beta-glyukan ekstraktini vakuumli filtrlash
Inline qo'ziqorin ekstrakti
Qo'ziqorinlardan ko'proq miqdorda beta-glyukanlarni doimiy ravishda ajratib olishga qiziqqanlar uchun Hielscher Ultrasonics botanika materialini olish uchun mo'ljallangan oqim xujayrasi reaktorlarini taklif qiladi. Agar bu sizga tegishli bo'lsa, qo'shimcha ma'lumot olish uchun biz bilan bevosita bog'lanishingizni tavsiya qilamiz. Bizning texnik guruhimiz sizning maxsus ehtiyojlaringiz uchun eng mos sozlashni aniqlashda yordam berishdan mamnun bo'ladi. Biroq, yuqorida aytib o'tilgan qo'ziqorin turlari bilan laboratoriya miqyosida tajriba o'tkazish aniq jarayon talablarini tushunishda bebaho bo'lishi mumkin. Quyidagi rasmda beta-glyukanlarni soatiga taxminan 50 dan 200 litrgacha bo'lgan qo'ziqorinli erituvchi atala olish uchun UIP4000hdT ultratovushli gomogenizatorga ega katta oqim hujayrali reaktor ko'rsatilgan.
Qo'ziqorin turlarining empirik beta-glyukan kontsentratsiyasi
Quyida siz turli xil qo'ziqorin turlaridan olingan empirik beta-glyukan kontsentratsiyasi ro'yxatini topasiz.
| Qo'ziqorin turlari | Jami 1,3-1,6-b-D-glyukan (g/100 g quruq massa) |
|---|---|
| Boletus pinophilus | 9,8% |
| Suillus granulatus | 13,3% |
| Craterellus cornucopioides | 4,5% |
| Suillus variegatus | 13,7% |
| Hydnum repandum | 4,1% |
| Gyroporus cyanescens | 14,3% |
| Tricholomopsis rutilans | 10,2% |
| Agaricus bisporus (portobello) | 4% |
| Agaricus bisporus (cremini) | 4% |
| Auricularia auricular-judae | 16,8% |
Tahlil qilingan yovvoyi va madaniy qo'ziqorinlarda 1,3-1,6-b-D-glyukan miqdori, Manba: Mirończuk-Chodakowska va boshqalar. (2017): Polsha qo'ziqorinlarining yovvoyi o'sadigan turlarida 1,3-1,6-B-D-glyukan tarkibini miqdoriy baholash. Rocz Panstw Zakl Hig 2017; 68 (3): 281-290.
SonoStation: Ultrasonik ishlov berish uchun mobil kalit tizimi – ultratovushli disperserlar, nasos, aralashtirgich va tankdan iborat
UIP4000hdT ultratovushli gomogenizator soatiga taxminan 50 dan 200 litrgacha qo'ziqorin eritmasini qayta ishlash uchun
Qo'ziqorinlarning beta-glyukan ekstrakti konsentratsiyasini miqdoriy aniqlash
Ekstraksiyadan keyin beta-glyukan kontsentratsiyasini beta-glyukan turiga va tahlilning o'ziga xos talablariga qarab turli usullar yordamida aniqlash mumkin. Beta-glyukan kontsentratsiyasini aniqlashning umumiy usullari quyida keltirilgan. Albatta, usulni tanlash talab qilinadigan aniqlik va mavjud uskunalar kabi omillarga bog'liq.
-
Gravimetrik usul
- Printsip: Bu usul beta-glyukanlarni etanol bilan cho'ktirishga, so'ngra cho'kmani quritishga va tortishga asoslangan.
- Jarayon: namuna suvda eritiladi, beta-glyukanlarni cho'ktirish uchun etanol bilan ishlanadi, so'ngra cho'kma yig'iladi, quritiladi va tortiladi.
- Afzalliklari: oddiy va keng qo'llaniladi.
- Cheklovlar: Boshqa usullarga nisbatan kamroq aniqlik.
-
Kolorimetrik usullar
- Printsip: Ushbu usullar beta-glyukan kontsentratsiyasiga mutanosib ravishda rang o'zgarishini keltirib chiqaradigan maxsus reagentlar bilan rang reaktsiyalarini o'z ichiga oladi.
-
Misollar:
- Fenol-sulfat kislota usuli: Bu usul namunani konsentrlangan sulfat kislota va fenol bilan davolashni o'z ichiga oladi, bu eritmani to'q sariq rangga aylantiradi. Rangning intensivligi beta-glyukan kontsentratsiyasiga mutanosib.
- Anthrone usuli: Anthrone reaktivi ko'k-yashil rang hosil qilish uchun beta-glyukanlar bilan reaksiyaga kirishadi va rang intensivligi o'lchanadi.
- Afzalliklari: sezgir va yuqori o'tkazuvchanlik tahlili uchun mos.
- Cheklovlar: boshqa birikmalarning shovqini va maxsus reagentlarga bo'lgan ehtiyoj.
-
Enzimatik tahlillar
- Printsip: Enzimatik tahlillar beta-glyukanlarni oddiy shakarlarga ajratish uchun b-glyukanaza kabi fermentlardan foydalanadi va chiqarilgan shakar miqdori aniqlanadi.
- Afzalliklari: Yuqori aniqlik va aniqlik.
- Cheklovlar: maxsus jihozlar va reaktivlarni talab qiladi.
-
Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (HPLC)
- Printsip: HPLC birikmalarni xromatografik ustun bilan o'zaro ta'siriga qarab ajratadi va miqdorini belgilaydi.
- Jarayon: Beta-glyukanlar monosaxaridlarga gidrolizlanadi va hosil bo'lgan shakar HPLC yordamida ajratiladi va miqdori aniqlanadi.
- Afzalliklari: Yuqori aniqlik va murakkab namunalar uchun mos.
- Cheklovlar: maxsus uskunalar va tajriba talab qiladi.
-
Maxsus immunoassaylar
- Printsip: Immunoassaylar beta-glyukanlarga xos antikorlardan ularning konsentratsiyasini aniqlash uchun foydalanadi.
-
Misollar:
- ELISA (ferment bilan bog'langan immunosorbent tahlili): Ushbu usulda ferment bilan bog'langan antikor beta-glyukanlarga bog'langanda rang o'zgarishini keltirib chiqaradi.
- Yanal oqim tahlillari: Bu test chizig'ida ko'rinadigan natijani ta'minlaydigan tezkor testlar.
- Afzalliklari: Yuqori o'ziga xoslik va sezgirlik.
- Cheklovlar: maxsus antikorlarni talab qiladi va qimmatroq bo'lishi mumkin.