Protocol ASTM E2799-22 pentru evaluarea antimicrobiană

Hielscher UIP400MTP este un sonicator cu plăci cu mai multe godeuri puternic și eficient, conceput pentru a eficientiza etapa de sonicare în protocolul ASTM E2799-22. Prin furnizarea de energie ultrasonică uniformă pe întreaga placă de microtitru, UIP400MTP asigură detașarea constantă și fiabilă a biofilmelor de capace fără a deteriora celulele sau a compromite integritatea probei. Capacitatea sa de randament ridicat și funcționarea ușor de utilizat reduc semnificativ timpul de procesare, îmbunătățind în același timp reproductibilitatea, făcându-l o soluție ideală pentru laboratoarele care efectuează teste de viabilitate a biofilmului și teste de eficacitate antimicrobiană.

ASTM E2799

ASTM E2799 este o metodă de testare standardizată concepută pentru a evalua eficacitatea agenților antimicrobieni împotriva biofilmelor, concentrându-se în special pe Pseudomonas aeruginosa. Biofilmele sunt comunități microbiene complexe care aderă la suprafețe și prezintă o rezistență sporită la tratamentele antimicrobiene, ceea ce le face o provocare semnificativă în contexte medicale, industriale și de mediu. Această metodă utilizează testul Minimum Biofilm Eradication Concentration (MBEC) pentru a oferi un cadru fiabil și reproductibil pentru testarea dezinfectanților în condiții realiste de biofilm.

Cum contribuie sonicarea la ASTM E2799?

Sonicarea joacă un rol esențial în protocolul ASTM E2799 prin facilitarea detașării biofilmelor de pe suprafețele de testare, asigurând o evaluare precisă a viabilității microbiene după tratament. Prin utilizarea energiei ultrasonice controlate, protocolul realizează o perturbare eficientă și consistentă a biofilmului fără a deteriora celulele, permițând rezultate precise și reproductibile. Acest lucru face ca ASTM E2799 să fie un instrument esențial pentru avansarea cercetării biofilmului și dezvoltarea unor strategii antimicrobiene eficiente.

Cum se rulează testul MBEC în conformitate cu ASTM E2799-22

Protocolul ASTM E2799-22 prezintă pașii pentru evaluarea eficacității agenților antimicrobieni împotriva biofilmelor. Atunci când se utilizează sonicatorul Hielscher UIP400MTP cu plăci de microtitru, protocolul poate fi adaptat pentru a încorpora această metodă avansată de sonicare pentru detașarea biofilmului. Mai jos este o descriere a pașilor adaptați utilizării sonicatorului de microplăci UIP400MTP:

1. Pregătirea biofilmelor
   Pregătiți o placă sterilă cu 96 de godeuri cu capace detașabile.
   Inoculați puțurile cu o suspensie bacteriană standardizată într-un mediu de creștere adecvat.
   Așezați capacul cuiului pe farfurie, asigurându-vă că cuiele sunt complet scufundate în suspensia bacteriană.
   Incubați placa în condiții controlate (de exemplu, temperatură și timp) pentru a permite formarea biofilmului pe cuie.
2. Tratamentul cu agenți antimicrobieni
   După formarea biofilmului, se înlocuiește mediul cu un mediu proaspăt care conține agenții antimicrobieni de testat în concentrații diferite.
   Reatașați capacul cuiei și incubați în condițiile specificate în proiectul de încercare.
3. Pregătirea pentru detașarea biofilmului
   După tratament, clătiți capacul cuiului scufundându-l într-o soluție sterilă de clătire pentru a îndepărta agenții antimicrobieni reziduali și celulele planctonice slab aderente.
4. Detașarea biofilmului folosind sonicatorul UIP400MTP
   Pregătiți o placă proaspătă de microtitrare cu 96 de godeuri care conține un mediu de recuperare (de exemplu, bulion neutralizant).
   Detașați biofilmele plasând capacul cuiului în godeurile plăcii mediului de recuperare.
   Introduceți placa în UIP400MTP sonicator, asigurându-vă că capacul și placa sunt aliniate corect.
   Setați sonicatorul la 70%-80% amplitudine și sonicați timp de 3-4 minute în modul ciclu, pentru a asigura detașarea constantă a biofilmului fără liză celulară.
5. Evaluarea viabilității biofilmului
   După sonicare, se prelucrează mediul de recuperare care conține celule de biofilm detașate folosind tehnici microbiologice sau analitice standard, cum ar fi:
   • Numărul de unități formatoare de colonii (CFU): Efectuați diluții în serie și placă pe agar pentru numărarea celulelor viabile.
   • Măsurători ale densității optice (OD): Utilizați analiza spectrofotometrică pentru a evalua densitatea celulară.
   • Teste de viabilitate bazate pe fluorescență: Cuantificați celulele vii și moarte folosind coloranți fluorescenți.
6. Analiza datelor
   Comparați datele de viabilitate ale biofilmelor tratate și netratate pentru a determina eficacitatea agenților antimicrobieni.
   Calculați concentrația minimă de eradicare a biofilmului (MBEC) pe baza concentrației necesare pentru a elimina celulele viabile ale biofilmului.
7. Controlul calității
   Asigurați condiții consistente de sonicare prin calibrarea regulată a UIP400MTP și verificarea faptului că procesul de detașare a biofilmului nu duce la liză sau distrugere celulară semnificativă.
   Includeți controale adecvate, cum ar fi biofilme netratate și semifabricate, pentru a valida rezultatele.

Celulele de biofilm formate pe pini au fost dislocate prin sonicare (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Germania, UIP250MTP) timp de 5 minute în plăci cu 96 de godeuri care conțin mediu de cultură proaspăt pentru recuperarea celulelor.
(Imagine și studiu: ©de Oliveira et al., 2016)

Prin integrarea UIP400MTP în fluxul de lucru ASTM E2799-22, procesul de detașare a biofilmului este optimizat pentru consistență, eficiență și aplicații cu randament ridicat.