Protocolul ASTM E2799-22 pentru evaluarea antimicrobiană

Hielscher UIP400MTP este un sonicator puternic și eficient pentru plăci cu godeuri multiple, conceput pentru a eficientiza etapa de sonicare din protocolul ASTM E2799-22. Prin furnizarea uniformă a energiei ultrasonice pe întreaga placă de microtitrare, UIP400MTP asigură detașarea constantă și fiabilă a biofilmelor de pe capacele cu știfturi, fără a deteriora celulele sau a compromite integritatea probelor. Capacitatea sa de procesare a unui număr mare de probe și operarea ușoară reduc semnificativ timpul de procesare, sporind totodată reproductibilitatea, ceea ce îl face o soluție ideală pentru laboratoarele care efectuează teste de viabilitate a biofilmelor și teste de eficacitate antimicrobiană.

ASTM E2799

ASTM E2799 este o metodă de testare standardizată, concepută pentru a evalua eficacitatea agenților antimicrobieni împotriva biofilmelor, concentrându-se în mod specific pe Pseudomonas aeruginosa. Biofilmele sunt comunități microbiene complexe care aderă la suprafețe și prezintă o rezistență crescută la tratamentele antimicrobiene, ceea ce le face o provocare semnificativă în domeniul sănătății, în industrie și în mediul înconjurător. Această metodă utilizează testul concentrației minime de eradicare a biofilmului (MBEC) pentru a oferi un cadru fiabil și reproductibil pentru testarea dezinfectanților în condiții realiste de biofilm.

Cum contribuie sonicarea la ASTM E2799?

Sonicarea joacă un rol esențial în protocolul ASTM E2799, facilitând detașarea biofilmelor de pe suprafețele de testare și asigurând o evaluare precisă a viabilității microbiene după tratament. Prin utilizarea unei energii ultrasonice controlate, protocolul realizează o dezintegrare eficientă și constantă a biofilmului fără a deteriora celulele, permițând obținerea unor rezultate precise și reproductibile. Acest lucru face din ASTM E2799 un instrument esențial pentru avansarea cercetării biofilmelor și dezvoltarea unor strategii antimicrobiene eficiente.

Cum se efectuează testul MBEC în conformitate cu ASTM E2799-22

Protocolul ASTM E2799-22 descrie etapele de evaluare a eficacității agenților antimicrobieni împotriva biofilmelor. Atunci când se utilizează sonicatorul pentru plăci de microtitrare Hielscher UIP400MTP, protocolul poate fi adaptat pentru a încorpora această metodă avansată de sonicare pentru detașarea biofilmului. Mai jos este prezentată o descriere a etapelor adaptate utilizării sonicatorului pentru microplăci UIP400MTP:

1. Prepararea biofilmelor
   Pregătiți o placă de microtitrare sterilă cu 96 de godeuri, cu capace cu știfturi detașabile.
   Inoculați godeurile cu o suspensie bacteriană standardizată într-un mediu de cultură adecvat.
   Așezați capacul cu știfturi pe placă, asigurându-vă că știfturile sunt complet imersate în suspensia bacteriană.
   Incubați placa în condiții controlate (de ex., temperatură și timp) pentru a permite formarea biofilmului pe știfturi.
2. Tratamentul cu agenți antimicrobieni
   După formarea biofilmului, înlocuiți mediul cu mediu proaspăt care conține agenții antimicrobieni testați în diferite concentrații.
   Remontați capacul cu știfturi și incubați în condițiile specificate în designul testului.
3. Pregătirea pentru detașarea biofilmului
   După tratament, clătiți capacul cu știfturi prin imersarea acestuia într-o soluție sterilă de clătire, pentru a îndepărta agenții antimicrobieni reziduali și celulele planctonice slab aderente.
4. Detașarea biofilmului cu ajutorul sonicatorului UIP400MTP
   Pregătiți o placă de microtitrare proaspătă cu 96 de godeuri care conține un mediu de recuperare (de ex., bulion neutralizant).
   Detașați biofilmele introducând capacul cu știfturi în godeurile plăcii cu mediu de recuperare.
   Introduceți placa în sonicatorul UIP400MTP, asigurându-vă că, capacul și placa sunt aliniate corect.
   Setați sonicatorul la o amplitudine de 70%–80% și sonicați timp de 3–4 minute în modul ciclic, pentru a asigura o detașare constantă a biofilmului fără liză celulară.
5. Evaluarea viabilității biofilmului
   După sonicare, procesați mediul de recuperare care conține celulele de biofilm detașate utilizând tehnici microbiologice sau analitice standard, cum ar fi:
   • Numărarea unităților formatoare de colonii (CFU): efectuați diluții seriale și însămânțați pe agar pentru numărarea celulelor viabile.
   • Măsurători ale densității optice (OD): utilizați analiza spectrofotometrică pentru a evalua densitatea celulară.
   • Teste de viabilitate bazate pe fluorescență: cuantificați celulele vii și moarte utilizând coloranți fluorescenți.
6. Analiza datelor
   Comparați datele de viabilitate ale biofilmelor tratate și netratate pentru a determina eficacitatea agenților antimicrobieni.
   Calculați concentrația minimă de eradicare a biofilmului (MBEC) pe baza concentrației necesare pentru eliminarea celulelor viabile din biofilm.
7. Controlul calității
   Asigurați condiții de sonicare constante prin calibrarea regulată a UIP400MTP și prin verificarea faptului că procesul de detașare a biofilmului nu duce la o liză sau distrugere celulară semnificativă.
   Includeți controale adecvate, cum ar fi biofilme netratate și probe martor conținând doar mediu, pentru a valida rezultatele.

Celulele de biofilm formate pe știfturi au fost detașate prin sonicare (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Germania, UIP250MTP) timp de 5 min în plăci cu 96 de godeuri care conțineau mediu de cultură proaspăt pentru recuperarea celulelor.
(Imagine și studiu: ©de Oliveira et al., 2016)

Prin integrarea UIP400MTP în fluxul de lucru ASTM E2799-22, procesul de detașare a biofilmului este optimizat pentru constanță, eficiență și aplicații de procesare a unui număr mare de probe.