Extracția matricei extracelulare cu sonicatorul cu 96 de godeuri UIP400MTP

Metodele tradiționale de extracție a matricei extracelulare (EM) implică adesea mai mulți pași pentru a perturba matricea biofilmului. Cu toate acestea, aceste tehnici pot fi consumatoare de timp și inconsecvente, ceea ce duce la variabilitate a rezultatelor. Cu sonicatorul cu plăci cu 96 de godeuri UIP400MTP, procesul de extracție EM este facilitat semnificativ, oferind o perturbare extrem de eficientă, precisă și uniformă a biofilmului în formate de mare randament. UIP400MTP folosește ultrasunete focalizate pentru a genera cavitație controlată, descompunând în mod eficient matricea biofilmului, păstrând în același timp viabilitatea și integritatea celulelor încorporate în biofilm. Utilizarea UIP400MTP îmbunătățește reproductibilitatea și acuratețea testelor din aval, cum ar fi analizele metabolomice și proteomice, testele de viabilitate și studiile de susceptibilitate la antimicrobiene. Prin eficientizarea extracției EM, UIP400MTP permite cercetătorilor să obțină rezultate consistente și de înaltă calitate, oferind o perspectivă mai profundă asupra dinamicii biofilmului și a interacțiunilor cu agenții externi.

extracția matricei extracelulare

Matricea extracelulară (EM) este o componentă critică a biofilmelor formate de microorganisme precum Candida albicans. Compusă din polizaharide, proteine, lipide și ADN extracelular, EM oferă integritate structurală, mediază aderența la suprafețe și contribuie semnificativ la rezistența antimicrobiană. Extragerea și analiza EM este esențială pentru înțelegerea biologiei biofilmului, elucidarea mecanismelor de rezistență la medicamente și identificarea de noi ținte terapeutice.

Protocol pentru extracția matricei extracelulare (EM) din biofilmele de Candida albicans folosind UIP400MTP

Acest protocol se concentrează pe extragerea matricei extracelulare (EM) a biofilmelor statice de Candida albicans. Integrarea UIP400MTP sonicator pentru a înlocui pasii tradiționali de răzuire sau pe bază de enzime pentru o eficiență și reproductibilitate îmbunătățite.

Materiale necesare

Instrucțiuni pas cu pas pentru extracția EM

1. Formarea biofilmului static
   Pentru biofilme statice, inoculați C. albicans în godeurile unei plăci cu 96 de godeuri folosind mediul RPMI-1640. Fiecare godeț ar trebui să conțină un volum consistent de inocul (de exemplu, 200 μL per godeu).
   Incubați placa la 37°C în condiții statice timp de 24 de ore pentru a permite formarea biofilmului pe suprafețele puțului.
2. Pregătirea biofilmului pentru extracție
   După incubație, aspirați ușor și aruncați mediul uzat din fiecare puț fără a perturba biofilmul.
   Clătiți fiecare puț cu atenție cu PBS steril (de exemplu, 200 μL) pentru a îndepărta celulele slab atașate și resturile planctonice. Repetați acest pas de două ori.
   Adăugați PBS proaspăt sau tampon de extracție (de exemplu, 200 μL) în fiecare godeț pentru a pregăti sonicarea.
3. Sonicare cu UIP400MTP
   Așezați placa cu 96 de godeuri care conține PBS sau tampon de extracție în tava UIP400MTP sonicatorului. Pentru a plasa corect placa cu mai multe godeuri, urmați instrucțiunile din manual.
   Sonicați timp de 5-6 minute la o setare ușoară (amplitudine de 60%, mod puls), asigurând întreruperea uniformă a structurii biofilmului și eliberarea componentelor EM.
   Utilizați controlul temperaturii UIP400MTP sonicator (senzor de temperatură și setări) pentru a evita încălzirea excesivă sau deteriorarea probei.
4. Tratamentul cu rășină schimbătoare de cationi (CER)
   Transferați lichidul sonicat din fiecare puț pe o nouă placă cu 96 de godeuri.
   Se adaugă un volum dublu de suspensie CER (preparată în PBS sau tampon) în fiecare godeu (de exemplu, 400 μL volum total pe godeu).
   Sigilați placa și incubați-o pe un agitator de plăci sau rotator la 400 rpm timp de 3 ore pentru a permite legarea și izolarea componentelor EM.
5. Separare și filtrare
   Centrifugați placa la 2.000 × g timp de 10 minute pentru a separa rășina și celulele de supranatant.
   Transferați cu grijă supernatantul care conține EM din fiecare godeț pe o nouă placă cu 96 de godeuri.
   Filtrați supernatantul printr-un filtru de 0,22 μm folosind un sistem de colector de vid pe bază de plăci sau echivalent pentru a obține un extract EM curat.
6. Analiza EM
   Utilizați tehnici precum UPLC-Q-TOF-MS pentru profilarea metabolitelor nețintite sau utilizați teste specifice (de exemplu, BCA pentru proteine, trigliceride și kituri de cuantificare a carbohidraților) pentru a caracteriza componentele EM.

Extracția matricei extracelulare cu randament ridicat

Eficiența ridicată a extracției matricei extracelulare (EM) cu sonicatorul UIP400MTP a revoluționat pregătirea probelor pentru testele care necesită o analiză precisă a proprietăților biofilmului. UIP400MTP folosește unde ultrasonice pentru a perturba cu precizie și uniformitate matricea biofilmului, permițând eliberarea eficientă a componentelor EM, păstrând în același timp viabilitatea și integritatea celulelor. Această abordare îmbunătățește semnificativ fiabilitatea testelor, cum ar fi testele de viabilitate a biofilmului, studiile proteomice și metabolomice și evaluările susceptibilității la antimicrobiene.

Pentru testele de recuperare a biofilmului, cum ar fi numărarea unităților formatoare de colonii (CFU), extracția EM cu UIP400MTP asigură accesul neobstrucționat al reactivilor la celulele încorporate în biofilm. În mod similar, analizele proteomice și metabolomice, cum ar fi UPLC-Q-TOF-MS, beneficiază de izolarea cu randament ridicat a proteinelor, lipidelor și metaboliților. De asemenea, UIP400MTP acceptă testarea precisă a susceptibilității la antimicrobiene, permițând determinarea precisă a valorilor MIC și MBEC ale biofilmului. În plus, extracția eficientă facilitată de UIP400MTP ajută la testele de activitate enzimatică, cuantificarea componentelor și studiile structurale, oferind informații valoroase despre rolul matricelor extracelulare în arhitectura, aderența și mecanismele de rezistență ale biofilmului.

Această metodă de extracție reproductibilă, cu randament ridicat, optimizează pregătirea EM, asigurând rezultate superioare într-o gamă largă de teste legate de biofilm.