Înlocuiți răzuirea celulelor cu UIP400MTP Sonicator de mare randament

Detașarea și extragerea liniilor celulare aderente din plăcile cu mai multe godeuri pentru analiza multi-omică este o sarcină zilnică în laboratoare. Detașarea celulelor de mare randament folosind sonicatorul cu plăci cu mai multe godeuri înlocuiește UIP400MTP răzuirea manuală a celulelor, ceea ce duce la randamente mai mari de ARN, lipide totale și metaboliți polari totali. O nouă metodă integrează sonicatorul Hielscher UIP400MTP cu stația de lucru de manipulare a lichidelor Beckman Coulter i7, permițând procesarea eficientă și reproductibilă și eficientă a celulelor pentru extracția ARN, metaboliți și lipide. Metoda prezentată depășește metodele tradiționale de răzuire manuală a celulelor prin obținerea unei reproductibilități și randament superioare în diferite tipuri de celule și condiții experimentale.

Simplificați detașarea celulelor cu UIP400MTP Sonicator pentru microplăci

Sistemele de cultură celulară aderente joacă un rol critic în cercetarea toxicologică și biomedicală. În acest context, Cruchley-Fuge et al. (2024) au abordat o provocare semnificativă în cadrul proiectului PrecisionTox axat pe utilizarea tehnologiilor omice pentru evaluarea riscurilor chimice. Proiectul a vizat o analiză de mare randament a mii de probe tratate cu diverse substanțe chimice. Pentru a satisface această cerere, cercetătorii au dezvoltat un flux de lucru automatizat care combină sonicatorul UIP400MTP cu protocoale de extracție bifazică stabilite pentru analiza cromatografiei lichide-spectrometrie de masă (LC-MS). Studiul lor evaluează eficacitatea UIP400MTP Multi-Well Plate Sonicator în detașarea celulelor aderente în comparație cu răzuirea manuală și alte metode tradiționale.

Eficientizarea multi-omică: extracția automată a celulelor aderente cu UIP400MTP

Echipa de cercetători Laura Cruchley-Fuge de la Universitatea din Birmingham a utilizat trei linii celulare umane: HepG2 (celule canceroase hepatice), HepaRG (celule diferențiate asemănătoare hepatocitelor) și H295R (celule canceroase suprarenale). Aceste celule au fost cultivate în plăci cu 24 și 96 de godeuri și expuse la substanțe chimice de testat, cum ar fi aflatoxina B1 și forskolina.

Proiectare experimentală:

• Faza 1: Optimizarea setărilor de putere ale sonicatorului UIP400MTP și compararea cu răzuirea manuală a celulelor și băile de apă sonice. Celulele HepG2 au fost utilizate pentru a evalua recuperarea ARN-ului, a metaboliților și a lipidelor.
• Faza 2: Integrarea UIP400MTP într-un flux de lucru de extracție bifazică folosind sistemul Beckman Coulter i7. Validarea a fost efectuată folosind celule HepaRG și H295R.

Flux de lucru de extracție: Fluxul de lucru a cuprins expunerea la substanțe chimice în plăci cu mai multe godeuri, detașarea celulelor folosind UIP400MTP și extracția bifazică prin Bligh & Vopsitor (B&D) metoda. Analiza LC-MS a fost efectuată folosind un Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 pentru compuși lipofili și polari. The B&Metoda D, un standard de aur pentru cuantificarea lipidelor, implică o extracție în două etape cu metanol, cloroform și apă, urmată de cuantificarea lipidelor în faza de cloroform.

UIP400MTP sonicator cu microplăci facilitează detașarea liniilor celulare aderente de plăci cu mai multe godeuri și vase Petri

Rezultatele:

• Faza 1: Condițiile optime de sonicare au fost identificate la 60% putere.
  UIP400MTP a produs cea mai mare recuperare a ARN-ului cu o reproductibilitate excepțională în comparație cu răzuirea manuală și băile sonice.
  Recuperarea metaboliților polari a fost consecventă între metode, în timp ce recuperarea lipidelor a fost semnificativ superioară cu UIP400MTP.
• Faza 2: Validarea celulelor HepaRG și H295R a demonstrat o reproductibilitate ridicată în datele lipidomice și metabolomice, așa cum indică scorurile PCA strâns grupate.
  Tratamentele cu aflatoxină B1 și forskolină au fost diferențiate în mod eficient de control, subliniind sensibilitatea și fiabilitatea metodei.

“Dispozitivul de sonicare UIP400MTP Hielscher oferă o abordare alternativă de înaltă calitate și reproductibilă la “Standardul de aur” de răzuire celulară manuală, ceea ce duce la randamente mai mari de ARN, lipide totale și metaboliți polari totali.” (Cruchley-Fuge et al., 2024)

Cruchley-Fuge et al. evidențiază avantajele sonicatorului UIP400MTP pentru prelucrarea celulelor aderente. Prin înlocuirea răzuirii manuale, această metodă îmbunătățește reproductibilitatea, randamentul și randamentul, făcându-l un instrument neprețuit pentru studii la scară largă, cum ar fi PrecisionTox. Integrarea UIP400MTP în fluxurile de lucru automatizate nu numai că reduce variabilitatea, dar eficientizează și procesele care necesită multă muncă, permițând achiziția de date multi-omice de înaltă calitate.

Munca lui Cruchley-Fuge et al. (2024) facilitează și eficientizează procesarea culturilor de celule aderente pentru analiza multi-omică. Integrarea sonicatorului UIP400MTP cu fluxuri de lucru automatizate asigură o pregătire consecventă și eficientă a probelor, făcându-l ideal pentru cercetarea toxicologică de mare randament.
 

Proiectare, fabricație și consultanță – Calitate Made in Germany

Hielscher ultrasonicators sunt bine-cunoscute pentru cele mai înalte standarde de calitate și design. Robustețea și funcționarea ușoară permit integrarea fără probleme a ultrasonicators noastre în instalații industriale. Condiții dure și medii solicitante sunt ușor de manipulat de ultrasonicators Hielscher.

Hielscher Ultrasonics este o companie certificată ISO și pune un accent deosebit pe sonicatoarele de înaltă performanță, cu tehnologie de ultimă generație și ușurință în utilizare. Desigur, ultrasunetele Hielscher sunt conforme CE și îndeplinesc cerințele UL, CSA și RoHs.