Înlocuiți răzuirea celulelor cu UIP400MTP, sonicatorul cu capacitate mare de procesare a probelor

Detașarea și extracția liniilor celulare aderente din plăci cu godeuri multiple pentru analiza multi-omică reprezintă o sarcină zilnică în laboratoare. Detașarea celulelor cu capacitate mare de procesare cu ajutorul sonicatorului pentru plăci cu godeuri multiple UIP400MTP înlocuiește răzuirea manuală a celulelor, conducând la randamente mai mari de ARN, lipide totale și metaboliți polari totali. O nouă metodă integrează sonicatorul Hielscher UIP400MTP cu stația de lucru pentru manipularea lichidelor Beckman Coulter i7, permițând procesarea reproductibilă și eficientă, cu capacitate mare, a celulelor pentru extracția ARN-ului, a metaboliților și a lipidelor. Metoda prezentată depășește metodele tradiționale de răzuire manuală a celulelor, obținând o reproductibilitate și un randament superioare pentru diverse tipuri de celule și condiții experimentale.

Eficientizați detașarea celulelor cu sonicatorul pentru microplăci UIP400MTP

Sistemele de culturi celulare aderente joacă un rol critic în cercetarea toxicologică și biomedicală. În acest context, Cruchley-Fuge et al. (2024) au abordat o provocare semnificativă în cadrul proiectului PrecisionTox, axat pe valorificarea tehnologiilor omice pentru evaluarea pericolelor chimice. Proiectul a urmărit o analiză cu capacitate mare de procesare a mii de probe tratate cu diverse substanțe chimice. Pentru a răspunde acestei cerințe, cercetătorii au dezvoltat un flux de lucru automatizat care combină sonicatorul UIP400MTP cu protocoale consacrate de extracție bifazică pentru analiza prin cromatografie de lichide cuplată cu spectrometrie de masă (LC-MS). Studiul lor evaluează eficacitatea sonicatorului pentru plăci cu godeuri multiple UIP400MTP în detașarea celulelor aderente, comparativ cu răzuirea manuală și cu alte metode tradiționale.

Eficientizarea multi-omicii: extracția automatizată a celulelor aderente cu UIP400MTP

Echipa de cercetători a Laurei Cruchley-Fuge de la University of Birmingham a utilizat trei linii celulare umane: HepG2 (celule de cancer hepatic), HepaRG (celule diferențiate asemănătoare hepatocitelor) și H295R (celule de cancer suprarenal). Aceste celule au fost cultivate în plăci cu 24 și 96 de godeuri și expuse unor substanțe chimice de testare, precum aflatoxina B1 și forskolina.

Design experimental:

• Faza 1: Optimizarea setărilor de putere ale sonicatorului UIP400MTP și compararea cu răzuirea manuală a celulelor și cu băile de apă cu ultrasunete. Celulele HepG2 au fost utilizate pentru a evalua recuperarea ARN-ului, a metaboliților și a lipidelor.
• Faza 2: Integrarea UIP400MTP într-un flux de lucru de extracție bifazică utilizând sistemul Beckman Coulter i7. Validarea a fost efectuată cu celule HepaRG și H295R.

Fluxul de lucru pentru extracție: Fluxul de lucru a cuprins expunerile la substanțe chimice în plăci cu godeuri multiple, detașarea celulelor cu UIP400MTP și extracția bifazică prin metoda Bligh & Dyer (B&D). Analiza LC-MS a fost efectuată cu un Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 pentru compușii lipofili și polari. Metoda B&D, un standard de aur pentru cuantificarea lipidelor, implică o extracție în doi pași cu metanol, cloroform și apă, urmată de cuantificarea lipidelor în faza de cloroform.

Sonicatorul pentru microplăci UIP400MTP facilitează detașarea liniilor celulare aderente din plăci cu godeuri multiple și din plăci Petri

Rezultate:

• Faza 1: Condițiile optime de sonicare au fost identificate la 60% putere.
  UIP400MTP a obținut cea mai mare recuperare de ARN, cu o reproductibilitate excepțională, comparativ cu răzuirea manuală și cu băile cu ultrasunete.
  Recuperarea metaboliților polari a fost constantă între metode, în timp ce recuperarea lipidelor a fost în mod notabil superioară cu UIP400MTP.
• Faza 2: Validarea pe celulele HepaRG și H295R a demonstrat o reproductibilitate ridicată a datelor de lipidomică și metabolomică, după cum indică scorurile PCA strâns grupate.
  Tratamentele cu aflatoxină B1 și forskolină au fost diferențiate eficient de probele de control, subliniind sensibilitatea și fiabilitatea metodei.

„Dispozitivul de sonicare Hielscher UIP400MTP oferă o abordare alternativă de înaltă calitate și reproductibilă față de «standardul de aur» al răzuirii manuale a celulelor, conducând la randamente mai mari de ARN, lipide totale și metaboliți polari totali.” (Cruchley-Fuge et al., 2024)

Cruchley-Fuge et al. evidențiază avantajele sonicatorului UIP400MTP pentru procesarea celulelor aderente. Prin înlocuirea răzuirii manuale, această metodă îmbunătățește reproductibilitatea, capacitatea de procesare și randamentul, devenind un instrument de neprețuit pentru studii la scară largă precum PrecisionTox. Integrarea UIP400MTP în fluxuri de lucru automatizate nu doar reduce variabilitatea, ci și eficientizează procesele care necesită multă muncă, permițând obținerea de date multi-omice de înaltă calitate.

Lucrarea lui Cruchley-Fuge et al. (2024) facilitează și eficientizează procesarea culturilor celulare aderente pentru analiza multi-omică. Integrarea sonicatorului UIP400MTP cu fluxuri de lucru automatizate asigură o pregătire consecventă și eficientă a probelor, ceea ce o face ideală pentru cercetarea toxicologică cu capacitate mare de procesare.

Proiectare, fabricație și consultanță – calitate Made in Germany

Ultrasonicatoarele Hielscher sunt bine cunoscute pentru cele mai înalte standarde de calitate și de design. Robustețea și operarea ușoară permit integrarea fără probleme a ultrasonicatoarelor noastre în instalațiile industriale. Condițiile dificile și mediile solicitante sunt gestionate cu ușurință de ultrasonicatoarele Hielscher.

Hielscher Ultrasonics este o companie certificată ISO și pune un accent deosebit pe sonicatoare de înaltă performanță, cu tehnologie de ultimă generație și ușurință în utilizare. Desigur, ultrasonicatoarele Hielscher sunt conforme CE și îndeplinesc cerințele UL, CSA și RoHs.