Նմուշների ուլտրաձայնային նախապատրաստում՝ THC-ի վերլուծության համար

• Ուլտրաձայնային էքստրակցիան THC-ի արտադրության ապացուցված մեթոդ է, սակայն այն կարող է կիրառվել նաև վերլուծական նպատակներով։
• Ուլտրաձայնային մշակումը նմուշների նախապատրաստման տարածված մեթոդ է, որն օգտագործվում է կանեփի արտադրանքներում THC-ի ընդհանուր պարունակության վերլուծության համար։
• Նմուշները ենթարկվում են ուլտրաձայնային էքստրակցիայի՝ TLC, GC և HPLC վերլուծություններից առաջ։

THC-ի ուլտրաձայնային էքստրակցիա

THC-ն կամ տետրահիդրոկաննաբինոլը (delta-9-tetrahydrocannabinol) այն քիմիական նյութն է, որն առաջացնում է մարիխուանայի հոգեբանական ազդեցությունների մեծ մասը։ Կանեփի տեսակի համար հայտնի են ավելի քան 400 տարբեր տարատեսակներ։ Կախված կանեփի կոնկրետ տարատեսակից՝ կանեփը կարող է պարունակել ընդամենը 0,3 wt% THC։ Այլ տարատեսակներում THC-ի պարունակությունը կարող է հասնել մինչև 20 wt%։
Կանեփի տարբեր արտադրանքները նույնպես զգալիորեն տարբերվում են. այսպես՝ մարիխուանայում THC-ի միջին կոնցենտրացիան տատանվում է 1-ից 5% միջակայքում, հաշիշում THC-ի պարունակությունը 5-ից 15% է, իսկ հաշիշի յուղում այն միջինում 20% է։ Հաճույքի նպատակով օգտագործվող մարիխուանայի դեղաչափերում THC-ի քանակը խիստ փոփոխական է, և որքան ցածր է մարիխուանայում THC-ի պարունակությունը, այնքան ավելի շատ պետք է օգտագործողը սպառի՝ ցանկալի ազդեցությունները զգալու համար։

Բարձր հզորության ուլտրաձայնի կիրառումը (հայտնի է նաև որպես ուլտրաձայնային մշակում) բուսական նյութից ակտիվ բաղադրիչների էքստրակցիայի ապացուցված միջոց է։ THC-ն, ինչպես նաև այլ ակտիվ բաղադրիչներ, օրինակ՝ կաննաբինոիդներն ու տերպենները, կարող են հաջողությամբ էքստրակցիայի ենթարկվել ուլտրաձայնային մշակմամբ։ Սեղմե՛ք այստեղ՝ կանեփի ուլտրաձայնային էքստրակցիայի մասին ավելին կարդալու համար։

Նմուշների ուլտրաձայնային նախապատրաստումն օգտագործվում է THC-ի պարունակությունը վերլուծելու համար

• հաճույքի նպատակով օգտագործվող THC պարունակող արտադրանքների որակի վերահսկման համար,
• THC պարունակող դեղագործական արտադրանքների որակի որոշման համար,
• թմրամիջոց ստանալու համար նախատեսված կանեփը մանրաթել ստանալու համար նախատեսված կանեփից տարբերակելու համար։

THC-ի վերլուծության համար սովորաբար օգտագործվում են հետևյալ քրոմատագրական մեթոդները՝ բարակաշերտ քրոմատագրություն (TLC), գազային քրոմատագրություն (GC) և բարձր արդյունավետության հեղուկային քրոմատագրություն (HPLC)

Նմուշների ուլտրաձայնային նախապատրաստման ընթացակարգ՝ TLC վերլուծության համար

Նմուշների նախապատրաստում. նմուշների նախապատրաստման համար չորացրած բուսական նյութը պետք է մացերացնել և աղալ՝ ստանալով համասեռ փոշի։ Ուլտրաձայնային էքստրակցիայի համար սրվակում խառնում են կանեփի բուսական փոշու 500mg և մեթանոլ-քլորոֆորմ խառնուրդի 5mL (9 : 1 հարաբերակցությամբ)։ Ուլտրաձայնային մշակում կատարելու համար կարելի է օգտագործել ուլտրաձայնային սարք ՝ միկրոծայրով, VialTweeter կամ ուլտրաձայնային CupHorn սարք։ Ուլտրաձայնային մշակման տևողությունը մոտ 5 min է։ Այնուհետև նմուշը թողե՛ք հանգստանա առնվազն 5 min։ Պարզ վերնստվածքային հեղուկը նոսրացրե՛ք էքստրակցիոն խառնուրդով (v/v: 1 : 10)։ Ազատ THC՝ 1μL TLC թիթեղի վրա
Դեկարբօքսիլացում. էքստրակտի 100μL գոլորշիացնում են մինչև չոր մնացորդ ստանալը։ Մնացորդը տաքացնում են 180℃ ջերմաստիճանում՝ 4 min։ Ավելացրե՛ք 500μL մեթանոլ-քլորոֆորմ (v/v 9 : 1)։ Ենթարկե՛ք ուլտրաձայնային մշակման՝ 5 min։ Պարզ վերնստվածքային հեղուկը նոսրացրե՛ք էքստրակցիոն խառնուրդով (v/v: 1 : 10)։
Չափաբերում՝ 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
TLC սիլիկագել F-254, Merck 5729
TLC սկաներ II, CATS3 ծրագրակազմ, Camag Muttenz։ Էլյուենտ՝
Էթիլացետատ : տոլուոլ : քլորոֆորմ = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Հետքրոմատագրական ածանցյալացում՝ Fast Blue Salt 0,1%՝ 0,1 M NaOH-ում
Դենսիտոմետրիա՝ 550 nm ալիքի երկարությամբ

Նմուշների ուլտրաձայնային նախապատրաստման ընթացակարգ՝ GC վերլուծության համար

Նմուշների նախապատրաստում. չորացրած բուսական նյութը մացերացնում և աղում են՝ ստանալով համասեռ փոշի։ Էքստրակցիայի համար սրվակում խառնում են կանեփի բուսական փոշու 500mg և մեթանոլ-հեքսան խառնուրդի 10mL (9 : 1 հարաբերակցությամբ)։ Ուլտրաձայնային մշակում կատարելու համար կարելի է օգտագործել զոնդային տիպի ուլտրաձայնային սարք ՝ միկրոծայրով, VialTweeter կամ ուլտրաձայնային CupHorn սարք։ Նմուշը ենթարկե՛ք ուլտրաձայնային մշակման՝ 15–20 min։ Թափահարե՛ք նմուշը և թողե՛ք հանգստանա առնվազն 5 min։ Պարզ վերնստվածքային հեղուկը նոսրացրե՛ք էքստրակցիոն խառնուրդով (v/v 1: 20)։
Դեկարբօքսիլացում՝ ներդիրում
Ներարկիչի ջերմաստիճան՝ 250℃
Չափաբերում՝ 5 ng/μL-ից մինչև 250 ng/μL
GC՝ HP 6890՝ 5973 MSD և 7683 ավտոմատ նմուշամատուցիչով։ Ներարկում՝ 1μL, առանց հոսքի բաժանման ժամանակահատված՝ 2 min։
Սյունակ՝ HP-5 MS, 30m, տրամագիծ՝ 250 μm, թաղանթի հաստություն՝ 0,25 μm
Կրող գազ՝ He, 35 psi, հաստատուն ծավալային հոսք՝ 4 mL/min։
Ջեռոց՝ 100℃՝ 1min. տևողությամբ, ջերմաստիճանի բարձրացում՝ 15℃ /min. արագությամբ մինչև 280℃, 280℃՝ 5 min տևողությամբ։ MSD՝ SCAN՝ m/e 35 – 550

Նմուշների ուլտրաձայնային նախապատրաստման ընթացակարգ՝ HPLC վերլուծության համար

Նմուշների նախապատրաստում (GC-ի համար նախապատրաստման համանման եղանակով). չորացրած բուսական նյութը մացերացնում և աղում են՝ ստանալով համասեռ փոշի։ Էքստրակցիայի համար սրվակում խառնում են կանեփի բուսական փոշու 500mg և մեթանոլ-հեքսան խառնուրդի 10mL (9 : 1 հարաբերակցությամբ)։ Ուլտրաձայնային մշակում կատարելու համար կարելի է օգտագործել զոնդային տիպի ուլտրաձայնային սարք ՝ միկրոծայրով, VialTweeter կամ ուլտրաձայնային CupHorn սարք։ Նմուշը ենթարկե՛ք ուլտրաձայնային մշակման՝ 15–20 min։ Թափահարե՛ք նմուշը և թողե՛ք հանգստանա առնվազն 5 min։ Պարզ վերնստվածքային հեղուկը նոսրացրե՛ք էքստրակցիոն խառնուրդով (v/v 1: 20)։

HPLC-DAD՝ Waters 2695 բաժանման մոդուլ / 2996 PAD։ Ներարկում՝ 10μL
Նախասյունակ՝ LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Սյունակ՝ LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Էլյուենտ՝ իզոկրատիկ՝ 36% TEAP 25 mmol/L, 64% ացետոնիտրիլ։ Քանակական որոշում՝ 210nm ալիքի երկարությամբ
Չափաբերում՝ 0,001 – 0,10 μg/μL
Չափաբերում՝ 0,01 – 0,50 μg/μL
Պահման ժամանակ՝ CBD-ի համար՝ 6,2 min., CBN-ի համար՝ 8,0 min., THC-ի համար՝ 9,4 min., THC-A-ի համար՝ 11,0 min
Հայտնաբերման սահման (LOD)՝ CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%

VialTweeter-ը եզակի ուլտրաձայնային համակարգ է՝ մինչև 10 սրվակ միաժամանակ, միանգամայն նույն պայմաններում և առանց խաչաձև աղտոտման ուլտրաձայնով մշակելու համար։