הכנת דגימות באולטרסאונד לאנליזת THC
- מיצוי באולטרסאונד הוא שיטה מוכחת להפקת THC, אך ניתן להשתמש בו גם למטרות אנליטיות.
- סוניקציה היא שיטה נפוצה להכנת דגימות לצורך אנליזה של תכולת ה-THC הכוללת במוצרי קנאביס.
- הדגימות עוברות מיצוי באולטרסאונד לפני אנליזות TLC, GC ו-HPLC.
מיצוי THC באולטרסאונד
THC, או טטרהידרוקנבינול (delta-9-tetrahydrocannabinol), הוא החומר הכימי הגורם למרבית ההשפעות הפסיכולוגיות של מריחואנה. מוכרים יותר מ-400 זנים שונים של קנאביס. בהתאם לזן הקנאביס המסוים, תכולת ה-THC בקנאביס עשויה להיות נמוכה עד כדי 0.3 wt%. בזנים אחרים, תכולת ה-THC יכולה להגיע עד 20 wt%.
גם בין מוצרי הקנאביס השונים קיימת שונות ניכרת: ריכוז ה-THC הממוצע במריחואנה נע בין 1 ל-5%; בחשיש, תכולת ה-THC היא בין 5 ל-15%, ובשמן חשיש היא עומדת בממוצע על 20%. כמות ה-THC במנות מריחואנה הנצרכות למטרות פנאי משתנה מאוד, וככל שתכולת ה-THC במריחואנה נמוכה יותר, כך על המשתמש לצרוך יותר כדי לחוות את ההשפעות הרצויות.
הכנת דגימות באולטרסאונד משמשת לאנליזת תכולת ה-THC
- לצורך בקרת איכות של מוצרי THC למטרות פנאי,
- לצורך קביעת האיכות של מוצרי THC תרופתיים,
- לצורך הבחנה בין קנבוס המשמש כסם לבין קנבוס לסיבים.
לאנליזת THC נעשה שימוש נפוץ בשיטות הכרומטוגרפיות הבאות: כרומטוגרפיה בשכבה דקה (TLC), כרומטוגרפיית גזים (GC) וכרומטוגרפיה נוזלית בביצועים גבוהים (HPLC)
פרוטוקול להכנת דגימות באולטרסאונד לאנליזת TLC
הכנת הדגימות: לצורך הכנת הדגימות, יש להעביר את החומר הצמחי המיובש מצרציה ולטחון אותו לאבקה הומוגנית. לצורך המיצוי באולטרסאונד, מערבבים בבקבוקון 500mg מאבקת צמח הקנאביס ו-5mL של תערובת מתנול–כלורופורם (ביחס של 9 : 1). ניתן לבצע סוניקציה באמצעות מכשיר אולטרסאונד בעל קצה זעיר, באמצעות VialTweeter או באמצעות ההתקן האולטרסוני CupHorn. משך הסוניקציה הוא כ-5 min. לאחר מכן, הניחו לדגימה לעמוד במשך 5 min לפחות. דללו את הנוזל העליון הצלול בתערובת המיצוי (v/v: 1 : 10). THC חופשי: 1μL על לוחית ה-TLC
דה-קרבוקסילציה: מאדים 100μL מהמיצוי עד ליובש. מחממים את השארית ב-180℃ במשך 4 min. הוסיפו 500μL של מתנול–כלורופורם (v/v 9 : 1). בצעו סוניקציה במשך 5 min. דללו את הנוזל העליון הצלול בתערובת המיצוי (v/v: 1 : 10).
כיול: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
סיליקה ג'ל ל-TLC מסוג F-254, Merck 5729
סורק TLC מדגם II, תוכנת CATS3, Camag Muttenz; אלואנט:
אתיל אצטט : טולואן : כלורופורם = 3 : 17 : 0.25 (v/v/v)
יצירת נגזרת לאחר הכרומטוגרפיה: מלח Fast Blue בריכוז 0.1% ב-NaOH בריכוז 0.1 M
דנסיטומטריה ב-550 nm
טטרהידרוקנבינול (Δ9-THC) לאנליזה ולמיצוי
פרוטוקול להכנת דגימות באולטרסאונד לאנליזת GC
הכנת הדגימות: החומר הצמחי המיובש עובר מצרציה ונטחן לאבקה הומוגנית. לצורך המיצוי, מערבבים בבקבוקון 500mg מאבקת צמח הקנאביס ו-10mL של תערובת מתנול–הקסאן (ביחס של 9 : 1). ניתן לבצע סוניקציה באמצעות מכשיר אולטרסאונד מסוג גשוש בעל קצה זעיר, באמצעות VialTweeter או באמצעות ההתקן האולטרסוני CupHorn. בצעו סוניקציה של הדגימה במשך 15–20 min. נערו את הדגימה והניחו לה לעמוד במשך 5 min לפחות. דללו את הנוזל העליון הצלול בתערובת המיצוי (v/v 1: 20).
דה-קרבוקסילציה: באינסרט
טמפרטורת המזרק 250℃
כיול: מ-5 ng/μL עד 250 ng/μL
GC: HP 6890 עם 5973 MSD ודוגם אוטומטי 7683; הזרקה: 1μL, זמן ללא פיצול: 2 min.
עמודה: HP-5 MS, 30m, קוטר 250 μm, עובי שכבה 0.25 μm
גז נשא: He, 35 psi, ספיקת זרימה קבועה: 4 mL/min.
תנור: 100℃ למשך 1min.; העלאת הטמפרטורה בקצב של 15℃ /min. עד 280℃; 280℃ למשך 5 min. MSD: סריקה: m/e 35 – 550
פרוטוקול להכנת דגימות באולטרסאונד לאנליזת HPLC
הכנת הדגימות (בדומה להכנה ל-GC): החומר הצמחי המיובש עובר מצרציה ונטחן לאבקה הומוגנית. לצורך המיצוי, מערבבים בבקבוקון 500mg מאבקת צמח הקנאביס ו-10mL של תערובת מתנול–הקסאן (ביחס של 9 : 1). ניתן לבצע סוניקציה באמצעות מכשיר אולטרסאונד מסוג גשוש בעל קצה זעיר, באמצעות VialTweeter או באמצעות ההתקן האולטרסוני CupHorn. בצעו סוניקציה של הדגימה במשך 15–20 min. נערו את הדגימה והניחו לה לעמוד במשך 5 min לפחות. דללו את הנוזל העליון הצלול בתערובת המיצוי (v/v 1: 20).
VialTweeter להכנת דגימות באולטרסאונד
עמודה מקדימה: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
עמודה: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
אלואנט: איזוקרטי, 36% TEAP בריכוז 25 mmol/L, 64% אצטוניטריל; כימות ב-210nm
כיול: 0.001 – 0.10 μg/μL
כיול: 0.01 – 0.50 μg/μL
זמן שהייה: עבור CBD: 6.2 min.; עבור CBN: 8.0 min.; עבור THC: 9.4 min.; עבור THC-A: 11.0 min
גבול גילוי (LOD): CBD 0.5%, CBN 0.5%, THC 0.15%, THC-A 1%
UP200St בעל קצה זעיר לסוניקציה של דגימות
ספרות/מקורות
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): אנליזות כימיות פורנזיות של חומר צמחי מקנבוס המכיל THC. מכרומטוגרפיה בשכבה דקה דרך GC ועד לשיטת HPLC. Applica 2006.
עובדות שכדאי לדעת
מריחואנה מורכבת מהפרחים המיובשים ומהעלים והגבעולים שמתחתיהם בצמח הקנאביס הנקבי. זוהי הצורה הנצרכת ביותר, והיא מכילה כ-3% עד 20% THC. צורות מסוימות של מריחואנה שעברו טיפוח אינטנסיבי מגיעות לתכולת THC של יותר מ-30%. מריחואנה היא חומר המוצא לכל שאר הסוגים של מוצרי קנאביס המכילים THC. כדי להמיר את הקנבינואיד הנפוץ ביותר, חומצה טטרהידרוקנבינולית (THCA), ל-THC הפסיכואקטיבי, יש להתחיל תהליך של דה-קרבוקסילציה. לכן יש לחמם או לייבש את הקנאביס ואת מיצוייו כדי לגרום לדה-קרבוקסילציה.
קיף הוא אבקה עשירה בטריכומות, המתקבלת בניפוי עלים ופרחים של קנאביס. צורכים אותו בצורת אבקה או דוחסים אותו ומשתמשים בו בלבני חשיש.
חשיש או חש הוא לבנה או כדור של שרף מרוכז, המיוצרים מקיף דחוס או משרף המגורד מפני הצמח ומגולגל לכדורים. צבעו נע משחור ועד חום זהוב, בהתאם לטוהר ולמקור. ניתן לצרוך אותו דרך הפה או בעישון, למשל במקטרת, בנרגילה, בבאנג, במקטרת מים מסוג באבלר, במכשיר אידוי, באמצעות סכין חמה, בעישון בג'וינטים, בתערובת עם תפרחות קנאביס או טבק, בעישון דרך בקבוק או כמרכיב במזון.
טינקטורת קנאביס היא מיצוי של קנבינואידים באלכוהול. הקנבינואידים ממוצים מצמח הקנאביס באמצעות משקאות חריפים בעלי ריכוז אלכוהול גבוה (בעיקר אלכוהול מדגנים) ליצירת הטינקטורה.
שמן חשיש הוא מטריצה שרפית של קנבינואידים המופקת במיצוי באמצעות ממס ומתגבשת לגוש מוקשה או צמיג. שמן חשיש הוא אחד ממוצרי הקנאביס החזקים ביותר בשל ריכוזו הגבוה של החומר הפסיכואקטיבי. השימוש בשמן חשיש הממוצה בבוטאן ובפחמן דו-חמצני במצב על-קריטי זוכה לאחרונה לפופולריות גוברת.
תכשירי השריה הם סוגים שונים של תכשירי קנאביס המופקים בהשריה, הנבדלים זה מזה במגוון הרחב של ממסים בלתי נדיפים שבהם ניתן להשתמש להפקתם. להכנת תכשיר כזה, מערבבים חומר מצמח הקנאביס עם ממס, ולאחר מכן סוחטים ומסננים כדי להעביר את השמנים מהצמח אל הממס. חמאת קקאו, חמאה מחלב, שמן בישול, גליצרין ותכשירי לחות לעור הם ממסים נפוצים.
מריחואנה רפואית היא שימוש בצמח הקנאביס כטיפול צמחי בהמלצת רופא, וכן שימוש ב-THC ובקנבינואידים סינתטיים. שימוש זה מחייב בדרך כלל מרשם, וההפצה נעשית בדרך כלל במסגרת המוגדרת בחוקים המקומיים. כמה מחקרים הראו כי השימוש בקנאביס או בנגזרותיו פועל נגד תופעות ומחלות כגון בחילות והקאות הנגרמות מכימותרפיה, כאב נוירופתי וטרשת נפוצה.